sop-lm0404丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶alt實(shí)驗(yàn)操作

1、目的和適用范圍：為保證血液檢測(cè)的結(jié)果正確性，規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作，特制定本操作規(guī)程。1.2. 適用于本術(shù)語：無。職責(zé)：3.1.3.2.操作說明，全體都必須嚴(yán)格按照本操作規(guī)程進(jìn)行操作。都必須嚴(yán)格按照本操作規(guī)程進(jìn)行操作。負(fù)責(zé)最終的簽發(fā)。4.1. 實(shí)驗(yàn)原理：血清酮酸與 2,4二下： 酮戊二酸丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及 酮戊二酸組成的基質(zhì)產(chǎn)生酸，丙肼作用，形成酸二腙，在堿性溶液中呈紅棕色。反應(yīng)過程如+ L 丙氨酸 L-谷氨酸 +酸腙 + 水吸頭、37水浴箱、DNM-9602肼 2，4-二L-酸 +2,4 二實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備和材料：ALT 測(cè)定試劑盒、100l 加樣器酶標(biāo)儀。實(shí)驗(yàn)操作步驟：將基質(zhì)液 37保溫 5min

2、。4.3.2. 微孔板上設(shè)定 1 個(gè)空白對(duì)照，3 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔，其余為樣品孔。4.3.3. 各孔加緩沖液、基質(zhì)液、酸與樣品量如下：4.3.3.1. 空白孔：10ul 磷酸緩沖液后，再加 50ul 基質(zhì)液。4.3.3.2. 標(biāo)準(zhǔn)孔：10ul 磷酸緩沖液，加 5ul酸標(biāo)準(zhǔn)液，再加 45ul 基質(zhì)液。4.3.3.3. 樣品孔：分別加樣本 10ul，加 50ul 基質(zhì)液。4.3.4. 適當(dāng)震蕩混勻，置 37溫育 30min。4.3.5. 每孔加 2,4 二肼 50ul,混勻后置 37溫育 20min。4.3.6. 每孔加 NaOH 溶液 150ul, 混勻后，置 37溫育 5min。4.4. 結(jié)果判讀：雙

3、波長(zhǎng)（492nm,參考波長(zhǎng) 630nm）,以空白CUT OFF 值為 3 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔的平均值。零點(diǎn)，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液與樣品的 OD 值。4.4.3. 若樣品 OD 值大于或等于 CUT OFF 值，為陽(yáng)性。4.4.4. 若樣品 OD 值小于 CUT OFF 值為4.5. 注意事項(xiàng)。4.5.1. 嚴(yán)重脂血，溶血或血清可使吸光度明顯增加，因此檢測(cè)此類標(biāo)本應(yīng)作血清對(duì)照管。4.5.2. 當(dāng)標(biāo)本酶表式：值超過 150，應(yīng)將血清用生理鹽水稀釋后再測(cè)定。5.5.1. ALT 實(shí)驗(yàn)操作原始6. 相關(guān)文件：無（：PAFC-BXJY-SOP-LM04-04-R01A）相關(guān)附件：無：無9. 文件履歷：版本號(hào)日期狀態(tài)（創(chuàng)建、

4、變更、評(píng)審、其它）說明1.02013.04.27創(chuàng)建新建1.12015.05.08評(píng)審評(píng)審1.22016.09.04變更變更1.32017.10.08評(píng)審評(píng)審ALT 實(shí)驗(yàn)操作原始: PAFC-BXJY-SOP-LM04-04-R01A本保存至供漿期滿后 10 年操作 步驟工作內(nèi)容操作時(shí)間記（時(shí)、分）操作者123456789101112A1將基質(zhì)液 37保溫 5min至2空白孔：10ul 磷酸緩沖液后，再加 50ul 基質(zhì)液；標(biāo)準(zhǔn)孔：10ul 磷酸緩沖液，加 5ul酸標(biāo)準(zhǔn)液，再加 45ul 基質(zhì)液。樣品孔：分別加樣本 10ul，加 50ul 基質(zhì)液。加樣完成時(shí)間：BC3適當(dāng)震蕩混勻，置 37溫育 30min孵育溫度：孵育時(shí)間：至D4每孔加 2,4 二肼 50ul,混勻后置 37溫育 20min。孵育溫度：孵育時(shí)間：至EF5每孔加 NaOH 溶液 150ul, 混勻后，置 37溫育 5min。孵育溫度：孵育時(shí)間：至G6雙波長(zhǎng)（492nm,參考波長(zhǎng) 630nm）,以空白孔為零點(diǎn)，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液與樣品的 OD 值讀數(shù)時(shí)間：H反應(yīng)板加樣陽(yáng)性標(biāo)本挑出序號(hào)檢驗(yàn)序號(hào)挑出人：核對(duì)人