吸附精制破傷風(fēng)類毒素制造及檢定規(guī)程

1、吸附精制破傷風(fēng)類毒素制造及檢定規(guī)程本品系精制破傷風(fēng)類毒素經(jīng)氫氧化鋁吸附制成。用于預(yù)防破傷風(fēng)。1毒素制造制造破傷風(fēng)毒素應(yīng)在隔離的具有專用消毒設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室的墻面、地面及實(shí)驗(yàn)臺應(yīng)使用便于消毒的材料。工作人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)并接受破傷風(fēng)類毒素全程免疫，以后每10年進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，凡發(fā)生外傷未完全治愈前不能參加工作。1.1菌種1.1.1應(yīng)選用中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或同意的產(chǎn)毒效價(jià)高、免疫力強(qiáng)的破傷風(fēng)菌株，必要時(shí)可對菌種進(jìn)行篩選。1.1.2菌種應(yīng)定期作全面性狀檢查（如細(xì)菌形態(tài)、純菌試驗(yàn)、糖發(fā)酵反應(yīng)、產(chǎn)毒試驗(yàn)及特異性中和試驗(yàn)等），并有完整的傳代、檢定記錄。1.1.3菌種應(yīng)用凍干或其他適宜方法保

2、存在28。1.2培養(yǎng)基制造種子管及毒素培養(yǎng)基所用的酪蛋白、黃豆蛋白、牛肉等蛋白質(zhì)應(yīng)適當(dāng)加深水解。其他原材料應(yīng)盡量減少對人體產(chǎn)生過敏反應(yīng)的物質(zhì)，不得含有可引起人體毒性反應(yīng)的物質(zhì)。培養(yǎng)基原材料應(yīng)保證質(zhì)量，所用化學(xué)原料應(yīng)符合中國生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)。1.3毒素1.3.1毒素制造過程應(yīng)嚴(yán)格控制雜菌污染，經(jīng)顯微鏡檢查或純菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)污染者應(yīng)廢棄。1.3.2毒素須經(jīng)除菌過濾后方可進(jìn)行下步制造程序，亦可殺菌后進(jìn)行精制。1.3.3毒素Lf測定用生理鹽水將Lf檢定用標(biāo)準(zhǔn)破傷風(fēng)抗毒素稀釋至100Lf/ml，按一定間隔遞增量加于一列絮狀檢定用試管中，每管加待檢毒素1ml，搖勻后立即放入50水浴中，以首先出現(xiàn)絮狀

3、者判定毒素的Lf值，并記錄絮狀反應(yīng)時(shí)間。1.3.4用于生產(chǎn)的毒素不得低于40Lf/ml。2類毒素制造2.1毒素或精制毒素的脫毒毒素或精制毒素中加入適量甲醛溶液，置適宜溫度進(jìn)行脫毒。所用甲醛溶液等級應(yīng)不低于化學(xué)純。2.2脫毒試驗(yàn)每瓶取樣，用體重300400g豚鼠1只，皮下注射10ml。精制毒素脫毒者可事先用生理鹽水稀釋成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天進(jìn)行觀察，動(dòng)物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，到期每只動(dòng)物體重不得較注射前減輕且健存者為合格，發(fā)生破傷風(fēng)癥狀者應(yīng)繼續(xù)脫毒，體重減輕者應(yīng)予重試。2.3脫毒試驗(yàn)合格的類毒素應(yīng)做Lf測定。類毒素應(yīng)為黃色或棕黃色透明液體。2.4類毒素之保存時(shí)

4、間，自脫毒合格之日起保存于28不得超過3年。3精制3.1毒素或類毒素可用等電點(diǎn)沉淀、超濾、硫酸銨鹽析等方法或其他適宜方法精制。3.2用于精制的類毒素應(yīng)透明，無肉眼可見之染菌。3.3精制時(shí)所用化學(xué)藥品等級應(yīng)不低于化學(xué)純或符合中國藥典規(guī)定，蒸餾水應(yīng)新鮮。3.4類毒素精制后應(yīng)加0.01%(g/ml)硫柳汞防腐并盡快除菌過濾。3.5用同一菌種、培養(yǎng)基處方、精制方法制造的類毒素在同一容器內(nèi)混合均勻后除菌過濾者為1批。4精制類毒素的檢定和保存4.1pH值應(yīng)為6.67.4。4.2無菌試驗(yàn)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。無菌試驗(yàn)不合格時(shí)可重新除菌過濾，如制品有肉眼可見之染菌應(yīng)廢棄。4.3效價(jià)測定每瓶取樣進(jìn)行Lf測

5、定。測定方法見1.3.3項(xiàng)。4.4純度精制類毒素的純度應(yīng)在1500Lf/mgPN以上。4.5安全試驗(yàn)每亞批取樣，等量混合，用生理鹽水稀釋為250Lf/ml，用體重300400g豚鼠4只，每只皮下注射2ml。于注射后第7、14、21天進(jìn)行觀察并稱體重。動(dòng)物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，局部無化膿、壞死，到期每只動(dòng)物體重比注射前增加者為合格。4.6保存與效期保存于28。類毒素精制者自精制之日起，先精制后脫毒制品從脫毒試驗(yàn)合格之日起，效期為3年半。5吸附劑配制5.1吸附劑配制過程所用的器具應(yīng)清潔、蒸餾水應(yīng)新鮮，各種藥品等級應(yīng)不低于化學(xué)純。5.2配制氫氧化鋁，可用三氯化鋁加氨水法或三氯化鋁加氫氧化鈉法，用氨水配制

6、者需透析除氨后使用。5.3配制成的氫氧化鋁原液應(yīng)為淺藍(lán)色或乳白色的膠體懸液，不應(yīng)含有凝塊或異物。5.4氫氧化鋁原液應(yīng)取樣測定氫氧化鋁及氯化鈉含量。6吸附精制類毒素的制造6.1吸附制品每ml應(yīng)含精制破傷風(fēng)類毒素710Lf。6.2氫氧化鋁用量不得超過3mg/ml。6.3吸附制品應(yīng)加0.005%0.01%(g/ml)硫柳汞為防腐劑。6.4同批精制類毒素用同批吸附劑吸附者為1批，用大罐吸附時(shí)每罐為1批，但所用精制破傷風(fēng)類毒素、氫氧化鋁各不得超過3批。7成品檢定7.1理化性狀7.1.1吸附精制破傷風(fēng)類毒素振搖后為乳白色均勻懸液，無搖不散的凝塊及異物。7.1.2pH值應(yīng)為6.07.0。7.1.3氫氧化鋁含

7、量不應(yīng)超過3mg/ml。7.1.4氯化鈉含量應(yīng)為0.75%0.9%(g/ml)。7.1.5硫柳汞含量不應(yīng)超過0.01%(g/ml)。7.1.6游離甲醛含量不應(yīng)超過0.02%（g/ml）。7.2無菌試驗(yàn)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。7.3安全試驗(yàn)每亞批取樣等量混合，用體重300400g，豚鼠4只，每只注射2.5ml于腹部皮下，注射后于第7、14、21天各觀察1次并稱體重，動(dòng)物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，注射部位無化膿、壞死，到期體重比注射前增加者為合格。7.4效力試驗(yàn)每亞批取樣等量混合，用體重300400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml，第30天采心血，分離血清，等量混合，測定破傷風(fēng)抗毒素單位，至少應(yīng)含1

8、IU/ml?？苟舅貑挝粶y定方法：用pH7.07.4之硼酸硼砂緩沖生理鹽水，將被檢血清做系列稀釋，各取1ml放入一列試管中，然后各加入5個(gè)L+/100量破傷風(fēng)標(biāo)準(zhǔn)毒素1ml（由0.05IU/ml破傷風(fēng)標(biāo)準(zhǔn)抗毒素標(biāo)定），蓋上膠塞，混合均勻，放37結(jié)合45分鐘，每個(gè)混合液各用體重1517g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml。同時(shí)設(shè)對照組，即取0.05IU/ml的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素1ml，加入5個(gè)L+/100的標(biāo)準(zhǔn)毒素1ml，放37結(jié)合45分鐘。用體重1517g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml，每日觀察動(dòng)物發(fā)病情況并記錄。以72120小時(shí)動(dòng)物全部死亡為判定標(biāo)準(zhǔn)。以被檢樣品與對照組動(dòng)物死亡數(shù)相同之最高稀釋度判定之。亦可按WHO推薦的效力檢定方法（見附錄）進(jìn)行。7.5穩(wěn)定性試驗(yàn)生產(chǎn)工藝有改變時(shí)應(yīng)做穩(wěn)定性試驗(yàn)。抽3批不同批號的精制類毒素