No3——如何實現(xiàn)高效、準確、快捷地測定大批量溶出度樣品電子版本

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。No3如何實現(xiàn)高效、準確、快捷地測定大批量溶出度樣品-如何實現(xiàn)高效、準確、快捷地測定大批量溶出度樣品謝沐風上海市食品藥品檢驗所上海市浦東新區(qū)張衡路1500號郵編：201203郵箱：xiemufeng摘要：固體制劑的多條溶出曲線測定愈發(fā)受到關(guān)注。如何實現(xiàn)高效、準確、快捷地測定大批量溶出度樣品開始困擾分析人員，尤其是在保證測定數(shù)據(jù)介于允許誤差范圍的前提下，如何實現(xiàn)事半功倍、而非事倍功半的測定技巧上，本文提出了許多建設性意見，供試驗者參考。關(guān)鍵詞：溶出度；高效準確；大批量樣品目前，測定固體制劑的多條溶出曲線愈

2、發(fā)受到關(guān)注謝沐風.改善溶出度評價方法，提高固體藥物制劑水平.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志2005,7(36),447451,謝沐風.溶出度研究系列（一）.中國藥品標準，2005,6(6):4246.,謝沐風.溶出度研究系列（二）.中國藥品標準，2006,1(7):4851.，其在制劑工藝研發(fā)、處方篩選、仿制藥生物等效性試驗的預評價，以及同一品種不同來源產(chǎn)品間內(nèi)在品質(zhì)的差異評估等方面，已逐漸發(fā)揮出舉足輕重的作用謝沐風、張啟明等.國外藥政部門采用溶出曲線評價口服固體制劑內(nèi)在品質(zhì)的情況簡介.中國藥事，2008,3(22):257-261.,張啟明、謝沐風等.采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量中國醫(yī)藥工業(yè)

3、雜志，2009,12(40):946-950；由此引發(fā)的如何高效、準確、快捷地測定大批量溶出度樣品開始困擾分析人員；尤其是在保證測定數(shù)據(jù)介于允許誤差范圍的前提下，如何實現(xiàn)事半功倍、而非事倍功半的測定技巧上，本人基于多年工作經(jīng)驗進行了梳理與歸納，擷取以下思路與觀點供試驗者參考。對于片劑/槳板法的測定采用錯時投樣對于片劑/槳板法、為使手動取樣時不至“手忙腳亂”，采取間隔固定時間（如30秒）的投樣方式，這樣便可做到平行操作、從容不迫了。手動抽取樣品建議采用“1個濾頭/1個取樣針筒方式”進行多樣品抽取。在規(guī)定的第一取樣時間點前1分鐘，抽取第1杯中樣品1020ml后，過濾使濾膜吸附飽和，并將濾液沿溶出杯

4、壁緩慢注回，待設定時間到、再抽取所需體積（如HPLC法、12ml即可）過濾，取濾液即可，其后所有樣品無需再棄去初濾液，直接收集。至于對樣品間污染的擔憂，由于針筒內(nèi)殘余量很少，故誤差完全可忽略。此處強烈建議：不要采用“分別濾頭/分別針筒方式”，既浪費人力和物力，又會給試驗帶來較大誤差。盡可能采用HPLC測定法現(xiàn)今，由于國產(chǎn)輔料質(zhì)量參差不齊，在紫外處有吸收的品種較多，尤薄膜衣/腸溶衣/糖衣/膠囊殼更甚，導致紫外法測定時、經(jīng)常會出現(xiàn)溶出度均值高出含量10%50%的情況。同時，由于原研參比制劑輔料一般無法獲得，故輔料對測定結(jié)果的干擾更將無法評價謝沐風.溶出度測定中應注意的若干問題.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2

5、006,12(37):859-862。綜上所述、強烈建議采用HPLC測定法。因為絕大部分輔料皆屬惰性、在反相色譜柱上不會出峰，即便出峰保留時間也較短，故皆不會干擾主成分測定。再者、由于HPLC法線性范圍寬，樣品均可直接進樣測定，且隨著自動進樣設備的普及，省略掉紫外測定吸收度值需在0.200.80、樣品必須經(jīng)稀釋的繁瑣步驟，大大提高了工作效率?，F(xiàn)今，某些廠商的自動溶出儀收集器已可直接接收于液相小瓶內(nèi)，且由于附帶了加墊片的蓋兒，可防止采集過程中瓶內(nèi)液體的揮發(fā)，方便易行、快捷便利。如采用紫外法測定，為盡可能排除干擾，強烈建議采用雙波長相減法（最大吸收波長與遠端無吸收波長）。但如樣品是手動操作測定，這

6、將極其繁瑣?，F(xiàn)今的市售光纖溶出儀，采用了“予以校正的紫外法”；該法在可保證排除輔料干擾的前提下，還是非常值得肯定與推薦的；畢竟快速、便捷地測得一條完整曲線對于指示藥品內(nèi)在品質(zhì)具有更加深遠的意義和實用價值。如何提高HPLC法測定效能樣品處理由于HPLC法測定需樣品量少，每一時間點的取樣量12ml即可，因此、對于小規(guī)格制劑（不超過10mg），建議樣品溶液經(jīng)手動取出后無需過濾，直接置于液相小瓶中、放置0.5小時即可進樣測定。因為在取樣點位置處，吸取這么小體積攜帶出輔料的可能性極小，即便有少量存在，靜置后使其沉淀，也不會影響到測定，更不會堵塞色譜柱（5-10m粒徑的色譜柱完全沒問題）。這樣，還可省略去

7、溶出量累積計算的繁瑣以及過濾時濾膜吸附的擔憂，起到“一舉多得、事半功倍”之效！該法尤適用于采用自動取樣裝置時、管路與濾膜有吸附樣品；此類多為小規(guī)格/難溶制劑，主成分皆進行了微粉化處理，比表面能較大，故易出現(xiàn)該情形。采用短分析柱現(xiàn)今，市售有25cm長、粒徑510m的短分析柱、可大大縮短分析時間，還極大地節(jié)約了試劑用量、降低檢測成本。調(diào)節(jié)流動相、縮短保留時間為加快測定，完全可將已驗證、并確定的流動相中有機相比例提高。如此，雖然有雜質(zhì)與主成分未能分離的擔憂，但考慮到樣品已被稀釋9001000倍（溶出介質(zhì)體積通常為該體積），在此條件下，存在的微量雜質(zhì)響應值已微乎其微，即便該雜質(zhì)峰與主峰重疊，其對于溶出

8、結(jié)果的影響亦在誤差范圍內(nèi)，可忽略不計。升高柱溫、縮短保留時間升高柱溫至4050。一般的反相色譜柱最高承受溫度可達60。加大流速、縮短保留時間流速可根據(jù)柱壓的限制提高至1.52.0ml/min、以加快測定進程。調(diào)整進樣量對于小規(guī)格制劑，進樣量可根據(jù)對照品溶液的精密度予以靈活調(diào)節(jié)，只要儀器功能許可，100l500l是完全可以的。需強調(diào)的是：建議采用溶出量為標示量10%濃度的對照品溶液進行精密度驗證，以確保測定低濃度樣品時的準確性。對于大規(guī)格制劑，可采用減少進樣量至5l的方法，以省去稀釋繁瑣步驟、直接進樣測定。改變測定波長對于小規(guī)格制劑，當采用最大吸收波長仍無法滿足測定精密度，則可改用吸收更強的末端

9、吸收波長，以增大靈敏度。對于大規(guī)格制劑，在幾近全部溶出時，由于濃度過大，會出現(xiàn)色譜柱超載或檢測器超載而導致峰形不佳之情形，此時可通過改變波長（采用非最大吸收峰）使峰面積變小、從而令色譜峰精密度滿足要求。使用超高速液相如采用超高速液相測定，效果自然更高！但由于色譜柱粒徑較小，樣品液若不過濾，恐堵塞色譜柱，建議試驗時驗證后予以酌情考慮。液相軟件編程對于大批量樣品的數(shù)據(jù)處理，一定要充分利用儀器自帶的軟件功能，絕不建議將每一個峰面積輸入Excel軟件計算這種費時費力的方式?，F(xiàn)今市場上的主流品牌色譜儀皆已具有數(shù)據(jù)批量處理功能和打印功能（多張圖譜結(jié)果打印在一張紙上），將這些功能開發(fā)掌握后一次性編輯好模板，便可大大提高工作效率。本人曾在5分鐘內(nèi)完成50個樣品的數(shù)據(jù)處理（得到溶出量），每一溶出量數(shù)據(jù)直接從軟件中拷貝出、粘貼至Excel軟件中、畫出溶出曲線圖的全部過程。古語道：“工欲善其事、必先利其器”，所以充分掌握軟件功能至關(guān)重要！5討論5.1溶出度的測定，僅是針對一個或兩個主成分峰，故以上多項舉措，皆是為提高測定效率所設。5.2HPLC法檢測某一物質(zhì)的出發(fā)點源于有關(guān)物質(zhì)，含量測定色譜條件謝沐風