細(xì)胞培養(yǎng)必備設(shè)施常用器材和培養(yǎng)基

1、細(xì)胞培養(yǎng)必備設(shè)施常用器材和培養(yǎng)基主要內(nèi)容:細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施細(xì)胞培養(yǎng)常用器材及處理方法常用溶液、培養(yǎng)液及其配制第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施一、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室防止微生物污染和有害因素的影響工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥和無(wú)煙塵。二、超凈臺(tái)三、恒溫培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱CO2培養(yǎng)箱四、其他設(shè)備倒置顯微鏡電熱鼓風(fēng)干燥箱電子天平恒溫水浴箱離心機(jī)壓力蒸汽消毒器冰箱第二節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)常用器材及處理方法一、玻璃器材培養(yǎng)皿滴流瓶刻讀吸管、離心管等培養(yǎng)瓶燒杯、量筒等三角燒瓶玻璃器材的消毒處理方法 清潔液浸泡，自來(lái)水沖10次，單蒸水洗2次，培養(yǎng)瓶再用三蒸水浸泡過(guò)夜，烘干，包裝，滅菌二、塑料器材多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)皿培養(yǎng)瓶塑料器材的消毒

2、處理方法用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡過(guò)夜（單用或交叉處理）-水洗10次-單蒸水2次-三蒸水浸泡過(guò)夜-烘干-紫外線或輻射滅菌三、橡皮器材橡皮制品(最好是硅制品)主要是各種瓶或試管的塞子、蓋子。橡皮器材的消毒處理方法5%NaOH煮-水洗-4%鹽酸煮-水洗810次-單蒸水洗三次、二蒸水洗一次。四、金屬器材剪刀、鑷子、手術(shù)刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號(hào)針頭等金屬器材的消毒處理方法紙擦去表面的油脂-洗衣粉煮沸，或用1%碳酸氫鈉煮沸15分鐘-水洗-95%酒精紗布擦干-包裝滅菌五、其他物品紗布注射器和針頭第三節(jié) 常用溶液、培養(yǎng)液及其配制一、平衡鹽溶液細(xì)胞培養(yǎng)中常用的基本液體。（一）配液時(shí)

3、的注意事項(xiàng)1）稱(chēng)量要準(zhǔn)確2）物質(zhì)的純度3）物質(zhì)的可溶性4）物質(zhì)的不穩(wěn)定性5）貯存液（二)幾種常用溶液的配制方法1、無(wú)鈣、鎂離子溶液2、磷酸鹽緩沖液3、Hanks液1、無(wú)鈣、鎂離子溶液(1000ml)氯化鈉(NaCl) 8g 磷酸二氫鈉 氯化鉀(KCl) 0.2g 碳酸氫鈉 1g檸檬酸三鈉葡萄糖1g加去離子水或雙蒸水至1000mL2、磷酸鹽緩沖液甲液：磷酸氫二鈉溶液 磷酸氫二鈉(無(wú)水) 28.4g 氯化鈉加去離子水或雙蒸水至1000mL乙液：0.2 mol/L磷酸二氫鈉溶液磷酸二氫鈉(無(wú)水) 2.4g 氯化鈉加去離子水或雙蒸水至1000mL甲、乙液于4保存，使用時(shí)按比例，配制成所需pH濃度，高壓

4、滅菌后室溫保存。3、Hanks液 (1)母液甲(20 x)配法 ) 160g，) 8g， 2O（A.R) 2g，2O(A.R) 2g，依次溶于800mL雙蒸水中，前一物質(zhì)溶后再加后一種。 CaCl2溶于100mL雙蒸水中，溶時(shí)不斷攪拌（此液應(yīng)單配，單溶）。待上述兩溶液中的“溶質(zhì)”全溶后，將它們混合，再用雙蒸水補(bǔ)至1000mL，向其中加2mL氯仿作為防腐劑，置4保存。(2)母液乙(20)配法 Na2HPO4.12H2，KH2PO4，葡萄糖溶于800ml雙蒸水中。 0.4%酚紅液酚紅放在玻璃研缽后加0.01N NaOH，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，過(guò)濾，pH為，4保存。

5、待上述各“溶質(zhì)”完全溶解后，用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐劑，置40保存(3)使用液（1）配法取母液甲和母液乙各一份，加雙蒸水18份，分裝后，塞好瓶塞，掛上標(biāo)志。以115高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞)，置室溫后4保存，可使用幾個(gè)月。臨用前，用7.5%NaHCO3調(diào)至所需pH。二、其他溶液（一）pH調(diào)節(jié)液（二）消化液（三）抗生素溶液（四）0.5%臺(tái)盼蘭(Trypan blue)液（五）0.1%結(jié)晶紫三、培養(yǎng)基（維持液、營(yíng)養(yǎng)液） (一)天然培養(yǎng)基(組成=平衡鹽溶液+天然動(dòng)物成分)1、血清（馬、兔、雞、小牛、新生小牛和胎牛）（1）收集與保存（2）小牛血清對(duì)細(xì)胞的作用提供細(xì)胞增殖

6、所必須的生長(zhǎng)因子（A因子促進(jìn)；B、C因子對(duì)細(xì)胞有抑制生長(zhǎng)作用；D因子促進(jìn)細(xì)胞粘連）對(duì)細(xì)胞附壁有利保護(hù)作用，解除毒性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的毒性作用；免受凍存，攪拌，損傷其他：利于染色體分布（3）影響血清作用的因素年齡；血型（ABA或O）；血色素；膽紅質(zhì)；脂肪酸；紅細(xì)胞生成素；腫瘤患者血清；濃度；支原體污染2、水解乳蛋白(hydrolytic albumin)乳蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶混合物水解而得的制品，常用濃度為0.2%0.5%，用平衡鹽溶液配制。0.4%濃度的水解乳蛋白經(jīng)分解后幾乎與人血漿中氨基酸成分相當(dāng)。 3、酵母浸出液：它還含有豐富的維生素，增加細(xì)胞的生長(zhǎng)率特別有利。常用濃度為0.1%。 4、雞胚浸出液（加過(guò)程） 5、雞血漿 6、胰酶消化牛心肌浸液(二)人工合成培養(yǎng)基（加配制）1、種類(lèi)：199，Eagle 、RPMI1640、HAMF12、NCT109等。2、優(yōu)點(diǎn)：已知成分配制，培養(yǎng)條件一致有利于定量研究代謝成分可延長(zhǎng)培養(yǎng)