項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物化學(xué)發(fā)光檢測(cè)解析課件

1、腫瘤標(biāo)志物17項(xiàng)（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）2016-5-26第1頁(yè)，共38頁(yè)。各種類(lèi)型腫瘤發(fā)生率 (不考慮性別)100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0271318751252124597073843475467肺乳腺結(jié)直腸胃前列腺卵巢胰腺膀胱宮頸發(fā)生率5年生存率數(shù)據(jù)來(lái)自the American Cancer Society第2頁(yè)，共38頁(yè)。腫瘤診斷方法1、臨床病史、體癥2、輔助物理檢查：X光、CT、核磁共振、 B超、 紅外掃描 病理 術(shù)前：穿刺、刮片、拉網(wǎng) 術(shù)后：組織切片 免疫學(xué)檢查：腫瘤標(biāo)志物和代謝物測(cè)定 分子生物學(xué)檢查： 核酸分析 第3頁(yè)，共38頁(yè)。在腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)

2、程中，由腫瘤細(xì)胞合成、釋放、或者是宿主對(duì)腫瘤反應(yīng)產(chǎn)生的一類(lèi)生化物質(zhì)。在血液、體液及組織中腫瘤標(biāo)志物的定量或定性檢測(cè)可以作為腫瘤篩查、鑒別診斷、治療后病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷的標(biāo)志與依據(jù)。這些物質(zhì)必須在正常人中不存在或者是在癌癥患者中出現(xiàn)的水平顯著高于正常人。腫瘤標(biāo)志物 【tumor markers TM】第4頁(yè)，共38頁(yè)。腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)（化學(xué)特性）癌胚抗原類(lèi)標(biāo)志物 糖類(lèi)抗原標(biāo)記物酶類(lèi)標(biāo)志物激素類(lèi)標(biāo)志物癌基因其他第5頁(yè)，共38頁(yè)。理想的腫瘤標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn) 特異性100% 靈敏度100% 器官特異性 與腫瘤大小或分期有關(guān) 能進(jìn)行療效觀察 與預(yù)后有關(guān) 可靠的預(yù)測(cè)價(jià)值 然而目前所應(yīng)用的腫瘤標(biāo)志物均未達(dá)到上述

3、要求，但如正確合理使用，仍有很大臨床價(jià)值，關(guān)鍵是要正確評(píng)價(jià)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的臨床意義。第6頁(yè)，共38頁(yè)。目前臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物現(xiàn)狀理想形式特異性100%真陰性100%假陽(yáng)性 0%健康人臨界值敏感性100%真陽(yáng)性100%假陰性 0%腫瘤患者實(shí)際狀況假陰性假陽(yáng)性臨界值敏感性100%特異性- 60%健康人腫瘤患者特異性100%敏感性- 50%敏感性上升特異性上升腫瘤標(biāo)志物參數(shù)在健康人和腫瘤患者兩組人群間的區(qū)別實(shí)際狀態(tài)：假陰性和假陽(yáng)性在選擇臨界值中的作用：特異性越高，敏感性越低，反之亦然第7頁(yè)，共38頁(yè)。腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用 正常人群中的篩查 有癥狀者的輔助診斷 癌癥的臨床階段的分期 疾病進(jìn)程的預(yù)后指標(biāo)

4、 評(píng)估治療方案 判斷癌癥是否復(fù)發(fā) 治療應(yīng)答的監(jiān)測(cè)第8頁(yè)，共38頁(yè)。腫瘤標(biāo)志物的注意事項(xiàng)定位 TM基本上不能對(duì)腫瘤定位。極少數(shù)TM如PSA，甲狀腺球白等具器官特異性，但不是腫瘤特異性。確診 通常不能進(jìn)行確診。分期 大多數(shù)TM與疾病分期有關(guān)，且濃度與腫瘤大小通常存在關(guān)聯(lián)，但并不能根據(jù)個(gè)體測(cè)得值來(lái)判斷腫瘤大小，也不能以TM 濃度精確指示各期腫瘤，因?yàn)楦髌谀[瘤的TM濃度范圍極廣，且互相重疊。預(yù)后 術(shù)前TM濃度增加，術(shù)后降低，表示這些TM對(duì)此腫瘤有預(yù)后價(jià)值。 在病程監(jiān)測(cè)中，TM的濃度增加或降低與疾病的預(yù)后密切相關(guān)。 第9頁(yè)，共38頁(yè)。TM評(píng)價(jià)治療有效性方案（Beastall, 1991)無(wú)效：TM濃度與

5、治療前相比下降50%有效：TM濃度與治療前相比下降90%顯效： TM濃度下降至臨界值以下第10頁(yè)，共38頁(yè)。檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的試驗(yàn)方法放射免疫法（RIA）免疫放射法（IRMA） ELISA法斑點(diǎn)法金標(biāo)法熒光免疫法流式熒光免疫法時(shí)間分辨免疫熒光法化學(xué)發(fā)光法（CLIA）磁微粒化學(xué)發(fā)光法電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）蛋白芯片技術(shù)第11頁(yè)，共38頁(yè)。化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個(gè)部分, 即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)。化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化, 形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體, 當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí), 同時(shí)發(fā)射出光子(hM) , 利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)

6、量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)(在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體) 直接標(biāo)記在抗原(化學(xué)發(fā)光免疫分析) 或抗體(免疫化學(xué)發(fā)光分析) 上, 或酶作用于發(fā)光底物 進(jìn)樣系統(tǒng)反應(yīng)池PMT放大器記錄儀負(fù)高壓 檢測(cè)系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光分析法儀器方框圖PMT:光電倍增管第12頁(yè)，共38頁(yè)。腫瘤類(lèi)型已選標(biāo)志物補(bǔ)充標(biāo)志物肺癌肝癌乳腺癌胃癌前列腺癌結(jié)腸直腸癌胰腺癌卵巢癌睪丸腫瘤CEAAFP、 CEACA15-3、CEACEA、 CA199PSACEA、CA199CA199、 CEA、CA50HE4、CA125、 CEAAFPNSE、CFRA21-1、SCCAHCGCA724fPSACA242CA242HCG、 CA

7、724HCG腫瘤標(biāo)志物的選擇第13頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖蛋白，4560%糖，電泳遷移率， 抗原決定基分子量： 180,000發(fā)生部位： 胚胎及胎兒腸黏膜參考值范圍：5ng/ml臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌和支氣管癌病程及療效 影響因素： 5%吸煙者檢測(cè)值可至2.55ng/ml， 1%至1020ng/ml；肝炎疾病可使CEA 水平短暫升高（一）癌胚抗原 （CEA）第14頁(yè)，共38頁(yè)。605040302010 0腫瘤患者 % 7.0 7.0 4.2 7.0 7.4臨界值 (ng/ml)5033282722在實(shí)體腫瘤患者中,CEA特異性為95%時(shí)的敏感性參考值范圍：5ng/ml在實(shí)體

8、腫瘤患者中CEA表達(dá)狀況第15頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖蛋白，4%糖，電泳-1-遷移率分子量： 70，000發(fā)生部位： 卵黃囊、胚胎肝參考值范圍：10ng/ml臨床應(yīng)用： 發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細(xì)胞癌，監(jiān)測(cè)治療效果；用于診斷生殖細(xì)胞腫瘤 影響因素： 肝炎疾病可使AFP水平短暫升高；AFP可通過(guò)胎盤(pán)，妊娠3236周可達(dá)高峰。（二）甲胎蛋白（AFP）第16頁(yè)，共38頁(yè)。（三）糖類(lèi)抗原242 （CA242）生化特性：是一種唾液酸化的新型粘蛋白類(lèi)糖類(lèi)腫瘤抗原臨床應(yīng)用：CA242可作為胰腺癌和結(jié)腸癌校好的腫瘤標(biāo)志物，其靈敏度與CA19-9相仿（70% 92% ），但特異性、診斷效率則優(yōu)于CA19-9。參考值：

9、25U/ml第17頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖蛋白，由兩個(gè)單克隆抗體： 1.115D8抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌 細(xì)胞系所證實(shí)分子量： 115D8： 400，000；DF3290，000發(fā)生部位： 乳腺癌細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞參考值范圍：28U/ml臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)乳腺癌療效影響因素： 與CEA聯(lián)合檢測(cè)（四）癌抗原15-3 （CA15-3）？第18頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖脂,Lewis血型決定基半抗原分子量： 抗原:36,000;粘蛋白:106D發(fā)生部位： 各種腫瘤,在胎兒胃腸道上皮細(xì)胞,許多 粘膜細(xì)胞參考值范圍：37U/ml臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)胰腺癌療效影響因素： 結(jié)直腸TM的第二選擇（五）糖

10、類(lèi)抗原19-9 （CA19-9）第19頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖蛋白,以卵巢癌細(xì)胞系免疫所獲 單克隆抗體所證實(shí)分子量： 200,000發(fā)生部位： 卵巢癌(膜結(jié)合物),胎兒和成人支氣 管正常上皮細(xì)胞參考值范圍：35U/ml (65U/ml)臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)卵巢癌病程及療效，透明細(xì)胞癌，子宮內(nèi)膜癌、輸卵 管埃及未分化卵巢癌明顯升高影響因素： 來(lái)源于體腔上皮細(xì)胞衍生物的分化抗原，特異性低；血清濃度輕微升高正常婦女，以及良性卵巢疾患， 懷孕前3個(gè)月、行經(jīng)期、肝硬化、子宮纖維變性、急性輸卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。 （六）糖類(lèi)抗原125 （ CA125）第20頁(yè)，共38頁(yè)。（七）糖類(lèi)抗原50

11、（CA50）生化特性：糖類(lèi)抗原CA50是一種以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白為主 的腫瘤標(biāo)志物參考范圍： 23U/ml臨床意義：糖類(lèi)抗原CA50是一種非特異性的廣譜腫瘤標(biāo)志物，與癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌的輔助診斷，其中胰腺癌病人增高最明顯。 增高：見(jiàn)于胰腺癌（陽(yáng)性率可達(dá)87）、結(jié)腸直腸癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤；潰瘍性結(jié)腸炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高第21頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖蛋白分子量： 400,000發(fā)生部位： 上皮細(xì)胞參考值范圍： 3U/ml臨床應(yīng)用： 胃癌,卵巢粘液癌影響因素: 與CEA聯(lián)合檢測(cè)胃癌,卵

12、巢癌的第二選擇標(biāo)志物（八）癌抗原72-4 （ CA72-4）第22頁(yè)，共38頁(yè)。 CA72-4臨床應(yīng)用CA72-4的參考范圍高限值為10U/ml,具有高特異性。在胃癌患者血清中,其水平升高尤為明顯。 經(jīng)過(guò)對(duì)50例良性胃腸道疾病和197例處于活動(dòng)期胃癌的研究發(fā)現(xiàn),CA72-4對(duì)胃癌的特異性為100%,靈敏度為48%。CA72-4的測(cè)定對(duì)胃癌的生長(zhǎng)期和治療效果極為重要,最好聯(lián)合測(cè)定CA72-4和CEA。CA72-4也見(jiàn)于卵巢癌中。第23頁(yè)，共38頁(yè)。胃癌單項(xiàng)或聯(lián)合測(cè)定CEA、CA19-9及CA72-4的敏感性80604020 0敏感性（%）272966406672CEA（10.1）CA19-9（9

13、6）CA72-4（2.4）CA19-9（107）CEA（10.1）CA72-4（2.4）CA19-9（260）CA72-4（2.4）CEA（10.4）胃癌特異性95%情況下，敏感性指標(biāo)第24頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 烯醇化酶二聚體分子量： 87,000發(fā)生部位： 神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,紅細(xì)胞,血小板參考值范圍：15.0ng/ml 臨床應(yīng)用： 增高：見(jiàn)于小細(xì)胞肺癌SCLC （最敏感最特異的腫瘤標(biāo)志物之一） 、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞腫瘤（如嗜鉻細(xì)胞瘤、胰島細(xì)胞瘤、黑色素瘤）等影響因素： 不要將血放置太久，否則將出現(xiàn)假高值；1小時(shí)內(nèi)離心；檢測(cè)SCLC時(shí)，與CEA聯(lián)合應(yīng)用.（九）神經(jīng)

14、特異性烯醇化酶 （NSE）第25頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 糖蛋白,腫瘤抗原T4分子量： 48,000發(fā)生部位： 主要存在于子宮頸鱗狀細(xì)胞癌,正常 鱗狀上皮參考值范圍：1.2ng/ml臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)宮頸、耳、鼻、喉、肺和食管鱗 狀細(xì)胞癌病程及治療影響因素： 被皮膚或唾液污染后可導(dǎo)致假性高值（十）鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原 （ SCC）第26頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 細(xì)胞角蛋白片段19分子量： 30,000發(fā)生部位：正常及惡性的上皮細(xì)胞支架蛋白，已知有20種，存在于許多組織中，特別是肺中參考值范圍： 3.3ng/ml臨床應(yīng)用： 非小細(xì)胞肺癌影響因素： 被唾液污染后可導(dǎo)致假性高值（十一）細(xì)胞角蛋白組分19

15、 (CYFRA21-1)第27頁(yè)，共38頁(yè)。肺癌中腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用CYFRA21-1CEANSE治療前治療后復(fù)查組織類(lèi)型不明確腺癌鱗狀細(xì)胞癌小細(xì)胞肺癌大細(xì)胞肺癌第28頁(yè)，共38頁(yè)。（十二）前列腺特異抗原 （ t-PSA）和游離前列腺特異性抗原（fPSA） PSA是前列腺的特異性標(biāo)記物，在正常男性含量小于4 g/L。屬于器官特異性抗原，不具備腫瘤特異性前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎和前列腺損傷都會(huì)導(dǎo)致血清PSA升高游離PSA在正常男性含量小于1g/L第29頁(yè)，共38頁(yè)。臨床應(yīng)用： 當(dāng)TPSA在4-10ng/ml之間時(shí)，區(qū)別良性與惡性前列腺疾病，測(cè)定游離PSA（f-PSA）與總PSA（tPSA)的

16、比率更有臨床價(jià)值。f-PSAtPSA 大于25%：多為良性病人。f-PSAtPSA 小于10%：多為前列腺癌。第30頁(yè)，共38頁(yè)。生化特性： 與IgG分子的重鏈和輕鏈的C片段同型,與 HLA共同片段的部分相同分子量： 11,800發(fā)生部位： 淋巴細(xì)胞，巨嗜細(xì)胞和一些上皮細(xì)胞表面參考值范圍：1.22.5mg/l臨床應(yīng)用： 多發(fā)性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影響因素： 在腎臟疾病診斷中也有重要意義 （十四）2-微球蛋白 （ 2-MG）第31頁(yè)，共38頁(yè)。（十五）人附睪蛋白（HE4）HE4 （Human Epididymis Secretory Protein 4,人附睪分泌蛋白4），是一種酸

17、性蛋白質(zhì)。HE4在惡性腫瘤中的高表達(dá)多見(jiàn)于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌，少見(jiàn)于肺腺癌及間皮瘤。HE4在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及檢測(cè)卵巢癌總的敏感性均高于CA125，是卵巢癌敏感及特異的標(biāo)志物，可用于對(duì)卵巢癌的早期診斷及輔助監(jiān)控卵巢癌患者的治療情況。英國(guó)的一項(xiàng)研究對(duì)200，000婦女用30多種腫瘤標(biāo)記物分別單獨(dú)或與CA125聯(lián)合進(jìn)行卵巢癌篩查，HE4可以使診斷卵巢癌的敏感度和特異度提高 。第32頁(yè)，共38頁(yè)。HGH又被稱為人體生長(zhǎng)激素。研究發(fā)現(xiàn)人類(lèi)生長(zhǎng)素隨著年齡的增長(zhǎng)而分泌量趨于減少。（1）升高：垂體腫瘤：肢端肥大癥、腦垂體性巨人癥。非垂體腫瘤：糖尿病、部分肝病、腎功能不全、胰腺癌。可用抑制試驗(yàn)鑒

18、別非垂體腫瘤所致GH之增高。（2）降低：垂體性侏儒癥及其他原因所致的垂體前葉功能減低癥。非垂體疾病所致GH值降低：肝硬化、垂體附近的腦腫瘤。（十六）人生長(zhǎng)激素（hGH）第33頁(yè)，共38頁(yè)。消化系惡性腫瘤腫瘤標(biāo)志物CEAAFPCA19-9CA125四指標(biāo)聯(lián)檢檢出率58.50%62.26%52.83%47.17%88.68%檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 2008年5期 腫瘤標(biāo)志物在診斷消化系惡性腫瘤中的應(yīng)用價(jià)值卵巢癌腫瘤標(biāo)志物CA125CA19-9CEA三指標(biāo)聯(lián)檢敏感性80.6%58.1%41.9%96.7%多指標(biāo)聯(lián)合評(píng)價(jià)有利于提高檢測(cè)的靈敏度，已成為公認(rèn)的腫瘤標(biāo)志物臨床應(yīng)用的原則之一。腫瘤標(biāo)志物多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)健康體檢普適技術(shù)！多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的意義腫瘤研究與臨床 2007年Z1期 三項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的臨床應(yīng)用價(jià)值第34頁(yè)，共38頁(yè)。幾種主要TMs聯(lián)檢技術(shù)比較 技術(shù)平臺(tái)Array-ELISA化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光（ECL）ELISA流式熒光操作性 簡(jiǎn)單方便操作簡(jiǎn)便 全自動(dòng) 簡(jiǎn)單方便操作要求高樣本用量5-10L25-100ul 100-200L50 L10 L檢測(cè)效率快速較快較快較慢快速局限性六種檢測(cè)指標(biāo)不能選擇性檢測(cè)多重指標(biāo)需重復(fù)檢測(cè)多指標(biāo)檢測(cè)時(shí)出結(jié)果時(shí)間長(zhǎng)多重指標(biāo)需重復(fù)檢測(cè)陣列區(qū)域存在相互干擾，易產(chǎn)生假陽(yáng)性與假陰性成本低較低高較低較