六-肥達(dá)反應(yīng)課件(PPT 13頁)

1、一 肥達(dá)氏反應(yīng)原理：用已知傷寒沙門菌O、H抗原，以及引起 副傷寒的副傷寒沙門菌H抗原與受檢血清作定量凝集試驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。作為臨床上診斷傷寒和副傷寒的參考。 第1頁，共13頁。實驗材料 (1)待測血清(1:10)，傷寒桿菌O、H菌液，甲型副傷寒桿菌(PA)和乙型副傷寒桿菌(PB) H菌液，生理鹽水。 (2)小試管，吸管，試管架，吸耳球(或橡皮乳頭)，水浴箱，記號筆等。第2頁，共13頁。方法：在試管架上放4排試管，每排支，做好標(biāo)記。 每排每支試管各加入0.5ml生理鹽水。 每排第1管中分別加入待測血清0.5ml?；靹蚝笥梦芪?.5ml混合液加到第2管內(nèi)?；靹蚝笤?/p>

2、從中吸取0.5ml液體到第3管中，如此重復(fù)直至第6管。第6管稀釋完后吸取0.5ml混合液棄去。第7管不加待測血清作陰性對照。每一排試管均重復(fù)上述步驟。第3頁，共13頁。在第1排每個試管中加入傷寒桿菌“O”抗原0.5ml，第2排，第3排和第4排則每管分別加入0.5ml傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、乙型副傷寒桿菌的“H”抗原。將所有的試管充分振蕩，使其混勻，置50水浴45分鐘，取出觀察結(jié)果。第4頁，共13頁。肥達(dá)反應(yīng)稀釋法示意表試驗管（每管0.5ml） 對照管 1234567生理鹽水0.50.50.50.5 0.50.5 0.5-1“O”抗原 0.50.50.50.5 0.50.50.52“H”抗原0

3、.50.50.50.50.50.50.53PA抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最終稀釋度 1:401:801:1601:3201:6401:1280-第5頁，共13頁。抗原構(gòu)造與分類成分產(chǎn)生抗體產(chǎn)生特點制備反應(yīng)特點O抗原LPSIgM出現(xiàn)早維持時間短酒精處理或加熱反應(yīng)速度慢顆粒狀凝集H抗原蛋白質(zhì)IgG出現(xiàn)較晚，維持時間長甲醛固定后使O抗原被遮蓋反應(yīng)速度快絮狀凝集第6頁，共13頁。肥達(dá)實驗結(jié)果判定血清的凝集效價（滴度）：是指能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集的血清最高稀釋倍數(shù)。血清效價代表血清中抗體的含量，血清效價越高，所含

4、抗體的量愈多。第7頁，共13頁。結(jié)果判斷1、正常凝集效價 傷寒沙門菌“O”抗體凝集效價在1：80以下，傷寒沙門菌“H”抗體在1：160以下， 甲、乙型副傷寒沙門菌“H”抗體凝集效價在1：80以下。2、病程中動態(tài)觀察 二份血清，第二次效價增長四倍以上有意義3、O與H抗體在診斷上的意義第8頁，共13頁。 O H A B 診 斷 意 義（可能）傷寒及副傷寒感染早期/交叉反應(yīng)傷寒及副傷寒感染晚期/預(yù)防接種/非特異性回憶反應(yīng)傷寒甲型副傷寒乙型副傷寒接種傷寒及副傷寒三聯(lián)疫苗非腸熱癥/早期用抗生素/免疫功能低下O 與H抗體在診斷上的意義第9頁，共13頁。實驗二 其他細(xì)菌白喉棒狀桿菌：G+ 一端或兩端膨大，排列不規(guī)則，常呈柵欄狀或英文字母樣，如V、W、X等觀察異染顆粒第10頁，共13頁。炭疽桿菌：G粗大桿菌，兩端平切、排列呈竹節(jié)狀；有莢膜，芽胞呈橢圓形，位于菌體中央第11頁，共13頁。肉毒梭菌：G粗大桿菌，芽胞位于近極端，成網(wǎng)球拍狀第12