PCR測定臨床應(yīng)用及結(jié)果臨床意義

1、PCR測定臨床應(yīng)用及結(jié)果臨床意義 北京大學(xué)人民醫(yī)院 張正 100044概述 臨床PCR檢測三條件 SDA批準(zhǔn)使用的試劑盒 國家批準(zhǔn)符合要求的實(shí)驗(yàn)室 經(jīng)行政部門同意并培訓(xùn)后持證上崗關(guān)于結(jié)核桿菌等5項(xiàng)檢測的 具體應(yīng)用 結(jié)核分枝桿菌(TB) 靶序列來源: a. 單抗檢出的TB抗原旦白編碼基因 b. TB特異性核酸片段克隆 c. 插入序列實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)特點(diǎn)舉例 65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123bp;IS986,245bp; 16sDNA,584bp.注意事項(xiàng) 標(biāo)本處理 ：痰液化，抑制物去除 試劑質(zhì)控及靈敏度臨床評價(jià) 結(jié)核的PCR臨床主要應(yīng)用 a.結(jié)核與其他分枝桿菌區(qū)分 b.

2、結(jié)核耐藥基因 c.對含菌量低的標(biāo)本的分離 d.為臨床可疑者捕捉信息 PCR方法與痰涂片及TB培養(yǎng)的比較 應(yīng)做比對研究臨床評價(jià) 沙眼衣原體(Ct)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)特點(diǎn) 靶及引物選擇 外膜蛋白基因(MOMP-OMPI) 7.5kb質(zhì)粒 隱蔽性基因質(zhì)?？截?16srRNA基因注意事項(xiàng) 標(biāo)本取材是關(guān)鍵臨床評價(jià) 細(xì)胞培養(yǎng) McCoy. Hela-229金標(biāo)準(zhǔn) ELA法 PCR法.專家希望此法為新金標(biāo) HBV-DNA. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)特點(diǎn) S及C混合引物 定量用治療監(jiān)測 104 , 106 臨床評價(jià)一 般臨床靠免疫標(biāo)志 但無法明確時(shí)可測拉米呋定及干擾素治療監(jiān)測新問題研究 HCV-RNA 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)特點(diǎn) 需擴(kuò)增二次 低溫

3、啟動(dòng)UDG系統(tǒng)-RNA不穩(wěn)定性注意事項(xiàng) 防止RNase污染 杜絕溶血臨床評估 定性用于診斷(只有抗HCV無法 決定病毒存在狀況） 定量用于治療監(jiān)測 HLA方法:免疫學(xué) 分子生物學(xué) ： PCR SSCP RFLP 基因芯片I 類(A,B,C) 與疾病發(fā)生頻率有關(guān)II 類(DR,DQ,DP) 等 移植配型DR為例 設(shè)計(jì)10條特異性引物:DR1-DR10 設(shè)計(jì)2條組特異性引物:3568,DRB1 選擇其中某些組合成上,下游引物 據(jù)bp數(shù)推算等位基因局限性: DR6用排它法 有6種表型(DR3/DR3, DR8/DR6等)不能區(qū)分臨床評價(jià)中共同問題假陽:殘余模板的污染 其它假陰:標(biāo)本處理不當(dāng) 其它假陽性與假陰性 不能單向強(qiáng)調(diào)PCR的優(yōu)勢和檢出率應(yīng)與傳統(tǒng)方法比對,合理判斷陽性率與“金標(biāo)準(zhǔn)”臨床實(shí)踐是