生物技術(shù)在水產(chǎn)品中的應(yīng)用

1、生物技術(shù)在水產(chǎn)品中的應(yīng)用 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院報告人：羅永康 主要內(nèi)容生物傳感器技術(shù)1免疫學(xué)技術(shù)2分子生物學(xué)技術(shù)3DNA探針雜交技術(shù)4生物傳感器技術(shù)生物傳感器(biosensor)對生物物質(zhì)敏感并將其濃度轉(zhuǎn)換為電信號進(jìn)行檢測的儀器。是由固定化的生物敏感材料作識別元件（包括酶、抗體、抗原、微生物、細(xì)胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì)）與適當(dāng)?shù)睦砘瘬Q能器（如氧電極、光敏管、場效應(yīng)管、壓電晶體等等）及信號放大裝置構(gòu)成的分析工具或系統(tǒng)。生物傳感器具有接受器與轉(zhuǎn)換器的功能。生物傳感器技術(shù) 水產(chǎn)品中揮發(fā)性氮類以假單胞菌為敏感材料，以固定化細(xì)胞作為識別元件形成微生物細(xì)胞傳感器檢測水產(chǎn)品中TMA，檢測

2、范圍約為526mol。將黃嘌呤氧化酶、核苷酸酶和核苷磷酸化酶共同固定在膜表面，制備5一核苷酸酶固定化酶膜和核苷磷酸化酶一黃嘌呤氧化酶共固定化酶膜，并將其與氧電極共價結(jié)合，同時為傳感器附設(shè)小型陰離子交換樹脂柱，則實(shí)現(xiàn)了不同核苷類物質(zhì)的分離與檢測，最終可測定樣品的K值。水產(chǎn)品中核苷酸類物質(zhì)水產(chǎn)品中多胺類物質(zhì)將腐胺氧化酶固定在微平面薄膜氫過氧化物電極上，當(dāng)酶催化腐胺轉(zhuǎn)化為醛時，電極將檢測到過程中所消耗的氧。當(dāng)?shù)孜餄舛葹?033molL時，氧消耗與其呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。生物傳感器技術(shù)水產(chǎn)品中重金屬Danielsson等人利用汞、銅等重金屬離子對于脲酶的抑制作用，發(fā)展了檢測水產(chǎn)品中該類重金屬的酶傳感器，

3、檢測限可達(dá)到10gkg水產(chǎn)品中毒素Kreuzer等以堿性磷酸酶為標(biāo)記，利用SPE構(gòu)建了電化學(xué)免疫傳感檢測平臺，對于貝毒等水生毒素的檢測限可以達(dá)到gL，檢測時間30min，能夠較好地滿足現(xiàn)場檢測需要。水產(chǎn)品中細(xì)菌Abdelhamid等人利用部分浸沒的免疫電極，發(fā)展了一種更為新型的電化學(xué)免疫傳感器。免疫電極在工作狀態(tài)下部分浸沒于反應(yīng)體系中，從而在其表面形成超彎液面，其厚度約為0.40.8mm，可以將檢測靈敏度提高6倍以上，如對于大腸桿菌的檢測限可降低至150cellmL。免疫學(xué)技術(shù)單克隆抗體Maddison B C等利用該技術(shù)制備了虹鱒魚prion的單克隆抗體，對于檢測重要經(jīng)濟(jì)魚類中可遺傳的海綿狀

4、腦病發(fā)揮重要作用。免疫學(xué)技術(shù)凝集反應(yīng)馬家好等利用凝集反應(yīng)試驗(yàn)，診斷了淡水養(yǎng)殖魚類主要細(xì)菌性傳染病；楊廣智等用此法檢測出了草魚出血病病毒。免疫學(xué)技術(shù)熒光抗體鄢慶枇等應(yīng)用熒光抗體技術(shù)檢測牙鲆體內(nèi)的弧菌；余俊紅等得出應(yīng)用間接熒光抗體技術(shù)既可以診斷發(fā)病的感染花鱸，也可檢測帶菌狀態(tài)或未發(fā)病的感染花鱸。免疫學(xué)技術(shù)酶免疫Snow M等利用出血性敗血癥病毒的ELISA檢測方法檢測感染的大菱鲆；樊景鳳等應(yīng)用間接ELISA法檢測凡納濱對蝦紅體病病原菌取得較為滿意的效果。分子生物學(xué)技術(shù)16 S rRNA檢測技術(shù)基因芯片限制性酶酶切檢測技術(shù)核酸雜交技術(shù)PCR技術(shù) 分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)核酸雜交技術(shù)雷質(zhì)文等采用原

5、位雜交技術(shù)檢測中國對蝦體內(nèi)的白斑綜合征病毒(WSSV)。Hasson K W等建立了用特異的cDNA基因探針作原位雜交檢測TSV。Martine Z通過核酸斑點(diǎn)雜交方法可以檢測水產(chǎn)品中鰻弧菌的8個血清型，其最低檢出量可以達(dá)到150 Pg。Rehnstam A S等設(shè)計了25個堿基的寡核苷酸探針，用印跡雜交法則可以直接從病魚腎臟中檢出鰻弧菌。分子生物學(xué)技術(shù)多重PCR張新中等針對創(chuàng)傷弧菌gyrB基因的不同位點(diǎn)設(shè)計了3對引物，對3種海產(chǎn)品進(jìn)行了創(chuàng)傷弧菌的檢測，結(jié)果在3種海產(chǎn)品中均能特異性地檢測到創(chuàng)傷弧菌。常規(guī)PCR戰(zhàn)文斌等采用Kimura設(shè)計的引物，用PCR技術(shù)對不同生長時期的中國對蝦進(jìn)行了鰻弧菌的

6、檢測；鄧先余等建立了副溶血弧菌16 S23 S rDNA基因區(qū)間序列的PCR技術(shù)。熒光 PCR張振冬等用實(shí)時熒光PCR技術(shù)檢查水生動物病原體取得良好效果。分子生物學(xué)技術(shù)16s r RNA技術(shù)養(yǎng)殖環(huán)境中微生物的檢測養(yǎng)殖甲殼類病原菌海洋魚類病原菌淡水養(yǎng)殖病原菌分子生物學(xué)技術(shù)Einer-Jensen K等通過RFLP技術(shù)分析魚體棒狀病毒血紅素敗血病病毒的基因型。限制性酶酶切技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)基因芯片技術(shù)鰻弧菌創(chuàng)傷弧菌副溶血弧菌神經(jīng)壞死病毒霍亂弧菌出血病毒DNA 探針技術(shù)診斷的靈敏度較高測定水產(chǎn)品中微生物大腸桿菌沙門氏菌大腸桿菌志賀氏菌李斯特菌耶希氏菌DNA 探針技術(shù)美國的CENE-TRAK公司已開發(fā)出大腸桿菌的商品化DNA探針系統(tǒng),此系統(tǒng)最快可在1h內(nèi)完成檢測操作,靈敏度為大腸桿菌細(xì)胞10 cfu/g (或ml) 樣品,該試劑盒已通