蛋白印跡實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、精選公文范文蛋白印跡實(shí)驗(yàn)報(bào)告篇一:實(shí)驗(yàn)十二 Western印跡鑒定 目標(biāo)蛋白實(shí)驗(yàn)十二Western印跡鑒定目標(biāo) 蛋白實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私釽estern blot的原理及其意 義，掌握Western blot的操作方法；應(yīng)用Western blot技術(shù)分析鑒定 經(jīng)SDS分離后轉(zhuǎn)移到尼龍膜上的 重組蛋白。實(shí)驗(yàn)原理Western印跡法簡(jiǎn)稱蛋白質(zhì)印跡 法。蛋白質(zhì)樣品經(jīng)SDS電泳后， 凝膠所含的樣品蛋白質(zhì)區(qū)帶通過電泳方 法轉(zhuǎn)移、固定到載體（如尼龍膜、硝酸 纖維素膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵的 形式與蛋白質(zhì)結(jié)合，從而固定住蛋白質(zhì); 以膜上的蛋白或多肽為抗原，與相應(yīng)的 第一抗體起免疫反應(yīng)，再和酶標(biāo)記或同精選公文范文

2、位素標(biāo)記的第二抗體反應(yīng)，用適當(dāng)?shù)娜?液漂洗去未結(jié)合抗體后，置含底物的溶 液中溫育，或通過放射自顯影顯出譜帶， 即可檢測(cè)出樣品中的特異蛋白組分。試劑與器材試劑1.轉(zhuǎn)移緩沖液：甘氨酸（39 mmol/L），Tris 堿（48mmol/L），SDS （%），200ml甲醇（20%），定容至 1,000mL；封閉液：5%脫脂奶粉，%疊氮 鈉，溶于PBST溶液中；麗春紅S（ Ponceaus）染液：麗 春紅S溶于1mL冰乙酸中，加水至 100mL；洗膜液：PBS緩沖液含 Tween 20；DAB濃縮顯色液（50X）： DAB（二氨基聯(lián)苯胺）是根過氧化物酶的底 物之一，臨用前稀釋。5 x PBS：在160

3、0mL蒸餾水中溶解 Na 2HPO4 , Na H2PO4, 40g Na 精選公文范文2精選公文范文Cl,用/L NaOH調(diào)pH至，加水定容至2 升。高壓滅菌20分鐘，室溫保存。用前 稀釋至1x。7. SDS電泳用溶液和試劑。器材電泳裝置一套；電轉(zhuǎn)移膜裝置抗體-酶反應(yīng)搖床操作方法一電轉(zhuǎn)移將蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行SDS, 待漠酚藍(lán)跑出膠后停止電泳（1）。載手套切6-8張定性濾紙和一 張尼龍膜，它們的大小應(yīng)與凝膠的大小 相同。在尼龍膜的一（左）角作一記號(hào)（或剪角），與濾紙和海棉（纖維）墊浸 泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中。剝膠，并將凝膠裁成合適大小， 切角以做記號(hào)（2）。按下圖示制備“夾心餅”，打開電極板，在一邊放上

4、一塊纖維墊，再依 次往上疊加3-4張濾紙，將凝膠輕放于 精選公文范文3精選公文范文 濾紙上。再將一張NC膜放上，加上3-4 張濾紙，每加上一種物品都要精確對(duì)齊， 并確保沒有氣泡。再鋪上纖維墊，最后 將電極板夾上，夾上夾子插進(jìn)轉(zhuǎn)膜槽中。按下示意圖，接上電源（凝膠 一邊接負(fù)極，尼龍膜一邊接正極），恒流 電泳小時(shí)，/cm2膜。關(guān)閉電源，將尼龍膜取出，置 塑料盒中用麗春紅S染色約5分鐘，回 收麗春紅S，然后用蒸餾水洗去背景染 料顯色，室溫稍干燥后用鉛筆描下 Marker所在位置，然后用PBST浸泡幾 次，完全洗去麗春紅S染料（4）。二封閉將膜放入塑料盒中，加入20mL 封閉液，置脫色搖床中緩慢搖動(dòng)，室

5、溫1 小時(shí)或4笆封閉過夜（5）。三靶蛋白 與第一抗體結(jié)合8棄去封閉液，加入含有第一抗體 的封閉液510mL，室溫平緩搖動(dòng)溫育 3小時(shí)。然后盡量回收抗體溶液，-20C 保存，可重復(fù)使用（6）。精選公文范文用PBST室溫洗膜3次，每次 10 min (7)。四與第二抗體反應(yīng)棄去PBST溶液，加入適量( 5-10mL )含有第二抗體的封閉液，室溫 下平緩搖動(dòng)溫育1小時(shí)(8)，盡量回收 第二抗體。用PBST溶液漂洗尼龍膜3次， 每次10鐘。五顯色把尼龍膜置于稀釋50倍的 DAB溶液中，輕輕搖動(dòng)，顯色約10-30 min，待蛋白帶的顏色深度達(dá)到要求后， 用水漂洗，最后轉(zhuǎn)移至PBS溶液中，拍 照或掃描(9

6、)。注意事項(xiàng)與提示電泳時(shí)間要根據(jù)目標(biāo)蛋白大 小而定。為避免干燥，可在膠上滴轉(zhuǎn) 膜緩沖液或浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中，使其 離子強(qiáng)度和pH值與轉(zhuǎn)膜緩沖液一致。可用一圓棒在濾紙上來回滾精選公文范文 動(dòng)以驅(qū)除氣泡。染色后整張膜呈紅色，由于 麗春紅S與膜上蛋白的結(jié)合很不緊密， 因此脫背景色時(shí)要注意觀察，勿將紅色 的蛋白帶也洗去；脫色完畢，觀察轉(zhuǎn)移 效果，并用鉛筆在分子量標(biāo)準(zhǔn)帶處做上 記號(hào)。如果用預(yù)染的Marker，則不需要 用麗春紅染色。封閉液的作用是封閉膜上沒 有蛋白帶的部位，以減少抗體的非特異 結(jié)合；我們推薦4C封閉過夜。抗體的用量以浸沒尼龍膜為 準(zhǔn)，用封閉液稀釋第一抗體，抗體的稀 釋度要由預(yù)實(shí)驗(yàn)來定，下

7、列數(shù)值可作為 參考：多克隆抗體：1： 100到1： 5000小 鼠腹水：1： 1000 到 1： 10 000PBS對(duì)膜上的蛋白沒有影響， 但可洗去剩余的封閉液和其它雜質(zhì)； Tween 20是一種非離子型去污劑，含適 當(dāng)濃度Tween 20的PBST可洗去非特異 結(jié)合的抗體，使整張膜的背景更清晰。一般所用的第二抗體(抗免精選公文范文 疫球蛋白或蛋白質(zhì)A）為酶標(biāo)抗體，如 辣根過氧化物酶標(biāo)抗體或堿性磷酸酶標(biāo) 抗體。第二抗體的稀釋度一般為：1： 200 到1： 2000。本實(shí)驗(yàn)中第一抗體為鼠源單 克隆抗體，因此二抗應(yīng)選擇兔抗鼠抗體， 若一抗為兔源多克隆抗體，二抗應(yīng)選擇 羊抗兔抗體。（9）DAB有致突

8、變之嫌，因此要 戴手套操作；辣根過氧化物酶顯色的條 帶在陽(yáng)光下幾個(gè)小時(shí)就會(huì)褪色，因此要 盡快拍照。實(shí)驗(yàn)安排試劑配制一電泳一轉(zhuǎn)移：1天； 雜交一顯色一結(jié)果處理：約1天。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求與思考題用數(shù)碼相機(jī)拍下麗春紅S染色 和最后抗體顯色的結(jié)果，計(jì)算目標(biāo)蛋白 的分子量，并對(duì)結(jié)果加以分析。對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的其它問題進(jìn)行 分析討論。進(jìn)行凝膠電泳時(shí)應(yīng)如何選擇樣 品點(diǎn)樣，設(shè)置對(duì)照？精選公文范文篇二：3蛋白印跡技術(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)名稱：蛋白印跡技術(shù) 姓名： 陳杰學(xué)號(hào)：3140104666序號(hào)：25同組同學(xué)：唐陳曦帶教 教師：劉偉俞萍實(shí)驗(yàn)日期：2015年9月29日目錄1. 原理3印跡技術(shù)3RT-PCR聚丙烯

9、酰胺凝膠雙向電泳精選公文范文(2D)52. 操 作 步驟5安裝垂直板型電泳裝置5凝 膠 的 制備5轉(zhuǎn)膜6封閉6一 抗 反應(yīng)6洗滌精選公文范文9精選公文范文7二 抗 反應(yīng)7洗膜7檢測(cè)73. 實(shí) 驗(yàn) 結(jié)果8照片記錄8數(shù)據(jù)處理84. 討論精選公文范文.101.原理Westen印跡技術(shù)蛋白質(zhì)印跡技術(shù)又稱免疫印跡技 術(shù)和Western印跡技術(shù)，是鑒別蛋白質(zhì)的 分子雜交技術(shù)。Western blotting的原理 是將經(jīng)過SDS分離的蛋白質(zhì)樣品 轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜、 尼龍膜或PVDF膜）上，固相載體以非 共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)。且能保持電泳 分離的蛋白質(zhì)的相對(duì)位置不變（轉(zhuǎn)膜裝 置和預(yù)染的標(biāo)準(zhǔn)

10、相對(duì)分子質(zhì)量蛋白的轉(zhuǎn) 膜結(jié)果見圖8-2-55-2-7）。以固相載體 上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的 未標(biāo)記的一抗起免疫反應(yīng)，再與酶或同 位素標(biāo)記的二抗反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色、 化學(xué)發(fā)光或放射自顯影，可以檢測(cè)電泳 分離的某種特定蛋白成分的存在和含 量。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)某種蛋白 的表達(dá)水平。Western blotting實(shí)驗(yàn)過程主要有 以下幾個(gè)步驟：精選公文范文1、SDS分離待檢測(cè)的蛋白 質(zhì)；2、轉(zhuǎn)膜：將SDS分離的蛋 白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上；3、封閉：即利用非 反應(yīng)活性物質(zhì)封閉固相載體膜上未吸附 結(jié)合蛋白質(zhì)的區(qū)域；4、抗體結(jié)合：即 利用相應(yīng)蛋白質(zhì)的抗體（一抗）與待測(cè) 蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫結(jié)合，再與酶或

11、同位素 標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)；5、底物顯色或放射自顯影檢測(cè)電 泳分離的特異性目的蛋白的存在與否和 含量。Western blotting的轉(zhuǎn)膜方式以電 轉(zhuǎn)移最為常用，固相載體主要有：硝酸 纖維素薄膜、尼龍膜和聚偏二氟乙烯膜 （PVDF膜）。硝酸纖維素薄膜結(jié)合蛋白 的能力為100ug / cm2，綜合性能較好， 以往使用的人較多；尼龍膜結(jié)合蛋白質(zhì) 的能力較強(qiáng)，有很高的靈敏度，但結(jié)合 背景較高；PVDF-膜具有較好的結(jié)合蛋 白質(zhì)的能力（200ug/cm2），且能較牢固 地結(jié)合蛋白質(zhì)，該膜的機(jī)械性能和化學(xué) 特性強(qiáng)，不易卷曲或撕裂，在90%甲醇 的脫色條件下也不會(huì)影響膜的結(jié)構(gòu)，結(jié) 精選公文范文1精選公

12、文范文 合在膜上的蛋門質(zhì)可以直接進(jìn)行序列分 析，具有較好的染色和檢測(cè)的兼容性。常用的二抗標(biāo)記物有辣根過氧化 物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等，辣 根過氧化物酶最敏感的底物是3，3 - 二氨基聯(lián)苯胺，它在過氧化物酶所在部 位被反應(yīng)轉(zhuǎn)變成棕色沉淀。在鉆或鎳離 子存在下進(jìn)行反應(yīng)可以加深沉淀的顏色 并提高反應(yīng)的靈敏度。但是，使用辣根 過氧化物酶不可能完全排除背景顏色， 因此須十分小心地觀察生色反應(yīng)，一旦 特異性染色蛋白帶清晰可見，就應(yīng)盡快 終止生色反應(yīng)。堿性磷酸酶可催化底物 5-漠-4-氯-3-引哚磷酸/氮藍(lán)四唑在原位轉(zhuǎn)變 為深藍(lán)色化合物。這是利用二抗標(biāo)記物 進(jìn)行的顯色反應(yīng).是最早的 Wester

13、n blotting檢測(cè)方法，現(xiàn)在主要用于免疫組 化，在顯微鏡下觀察。該方法的靈敏度 相對(duì)較低，可以檢測(cè)ng水平的目標(biāo)蛋白。 ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑是基于Luminol 的新一代增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物試劑，它 精選公文范文b精選公文范文 由辣根過氧化物酶催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng)， 發(fā)出熒光，結(jié)果可以通過X光片壓片和 其他顯影技術(shù)展現(xiàn)，或使用Luminometer 檢測(cè)。溶液A主要成分為L(zhǎng)uminol及特 制發(fā)光增強(qiáng)劑，溶液B主要成分為H2O2 及特殊穩(wěn)定劑。發(fā)光液A和B在HRP 的催化作用下Luminol與H2O2反應(yīng)生 成一種過氧化物，過氧化物不穩(wěn)定隨即 分解，形成一種能發(fā)光的電子激發(fā)中間 體，當(dāng)后者由

14、激發(fā)態(tài)返回至基態(tài)，就會(huì) 產(chǎn)生熒光。在激發(fā)過程中不需要消耗 HRP，HRP只是起催化作用，所以只要 HRP沒有降解失活，是可以重復(fù)加發(fā)光 液進(jìn)行觀察的。ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)靈敏 度高，可以檢測(cè)pg水平的目標(biāo)蛋白。Western blotting 示意圖抗原生物素標(biāo)記一抗的二抗ECL發(fā)光試劑RT-PCRRT-PCR是一種在轉(zhuǎn)錄水平上檢測(cè) 基因的方法。首先提取組織或細(xì)胞中的 總RNA，然后以RNA（主要是mRNA） 精選公文范文精選公文范文 為模板，以與RNA 3 端互補(bǔ)的引物或 Oligo-dT在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下進(jìn)行逆轉(zhuǎn) 錄，生成cDNA的第一條鏈。然后以 cDNA 3端互補(bǔ)的引物以及與RNA 3端

15、 互補(bǔ)的引物組成引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增， 最后通過電泳來檢測(cè)是否產(chǎn)生PCR的擴(kuò) 增區(qū)帶，判別目的基因是否表達(dá)。為了避免由于RNA的降解而導(dǎo)致 陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在進(jìn)行RT-PCR時(shí)要 設(shè)立一個(gè)內(nèi)參照（管家基因的表達(dá)），以 避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果。同時(shí)內(nèi)參照可以 對(duì)基因表達(dá)的變化起到半定量的作用。 RT-PCR技術(shù)靈敏性高，常用于檢測(cè)細(xì)胞 中是否表達(dá)了某種RNA，是基因表達(dá)檢 測(cè)的方法之一。聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳（2D）利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量的 差異，通過雙向凝膠電泳的方法將各種 蛋白質(zhì)分離開。雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)結(jié) 合了等電聚焦技術(shù)和SDS-聚丙烯酰胺凝 精選公文范文15精選公文范文 膠電泳

16、技術(shù)的雙重優(yōu)點(diǎn)。第一向電泳是等電聚焦，在細(xì)管中 進(jìn)行，蛋白質(zhì)根據(jù)其等電點(diǎn)不同進(jìn)行分 離。而后將凝膠從管中取出，用SDS-聚 丙烯酰胺凝膠進(jìn)行第二向電泳。在第二 向電泳過程中，蛋白質(zhì)依據(jù)其分子量大 小進(jìn)行分離。由于雙向電泳具有很高的 分辨率，它可以直接從細(xì)胞提取液中檢 測(cè)某個(gè)蛋白。2-DE是目前唯一種可以僅通過一 次操作解析上千種蛋白質(zhì)的技術(shù)，是蛋 白質(zhì)組研究中最早的支撐技術(shù)之一。在 2-DE中，蛋白質(zhì)首先根據(jù)等電點(diǎn)的不同 在一向等電聚焦電泳中分離。接著被轉(zhuǎn) 移到二向SDS-聚丙烯酰胺凝膠上，再根 據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小不同被分離。用適 當(dāng)?shù)娜旧夹g(shù)顯示被分離的蛋白。2.操作步驟安裝垂直板型電泳裝置

17、將玻璃板用蒸餾水洗凈晾干。把玻 璃板在灌膠支架上固定好。固定玻璃板 時(shí)，兩邊用力一定要均勻，防止夾壞玻 精選公文范文i精選公文范文 璃板。凝膠的制備1.分離膠的制備：在一個(gè)干凈的 小燒杯中，按下表所列的試劑用量配置。 根據(jù)室溫來調(diào)節(jié)TEMED的加入量。12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠分離膠 配制用量表30%stock acrylamide （凝膠 貯液）3mol/L Tris-HCl緩沖液，（分離膠 緩沖液）10% SDS ddH2O10% Ammonium persulfate2% TEMED篇三：實(shí)驗(yàn)報(bào)告三免疫印跡實(shí)驗(yàn)三：免疫印跡1原理免疫印跡又稱 Western印跡，與 DNA的Southe

18、rn印跡技術(shù)相對(duì)應(yīng)，兩種 技術(shù)均把電泳分離的組分從凝膠轉(zhuǎn)移至 一種固相載體，然后用探針檢測(cè)特異性 組分。不同的是，Western blotting所檢 測(cè)的是抗原類蛋白質(zhì)成分，所用的探針 精選公文范文1精選公文范文 是抗體，它與附著于固相載體的靶蛋白 所呈現(xiàn)的抗原表位發(fā)生特異性反應(yīng)。該 技術(shù)結(jié)合了凝膠電泳分辨力高和固相免 疫測(cè)定特異敏感等諸多優(yōu)點(diǎn)，具有從復(fù) 雜混合物中對(duì)特定抗原進(jìn)行鑒別和定量 檢測(cè)，以及從多克隆抗體中檢測(cè)出單克 隆抗體的優(yōu)越性。該技術(shù)的靈敏度能達(dá) 到標(biāo)準(zhǔn)的固相放射免疫分析的水平而無 需對(duì)靶蛋白進(jìn)行放射性標(biāo)記。目前， Western blotting廣泛用于蛋白質(zhì)研究、 基礎(chǔ)研究

19、和臨床醫(yī)學(xué)的研究。免疫印跡可分成兩個(gè)步驟:蛋白質(zhì) 由凝膠轉(zhuǎn)移至固相基質(zhì)；特異性抗體檢 測(cè)。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移通常由電泳實(shí)現(xiàn)，現(xiàn)常 用的方法有二：1半干法：將凝膠和固 相基質(zhì)似三明治樣夾在緩沖液濕潤(rùn)的濾 紙中間，通電10-30分鐘可完成轉(zhuǎn)移；2 濕法：將凝膠和固相基質(zhì)夾在濾紙中間， 浸在轉(zhuǎn)移裝置的緩沖液中，通電45分鐘 或過夜課完成轉(zhuǎn)移。本試驗(yàn)采用濕法轉(zhuǎn) 移。免疫印跡用膜通常有硝酸纖維素膜 和尼龍膜兩種。大多數(shù)應(yīng)用前者。本實(shí) 精選公文范文e精選公文范文 驗(yàn)也用硝酸纖維素膜進(jìn)行轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移結(jié)束后，蛋白質(zhì)的檢測(cè)可分成 三個(gè)步驟進(jìn)行：首先，將膜同特異性抗 體孵育數(shù)小時(shí)或過夜，然后將膜同可特 異性識(shí)別上述抗體（一

20、抗）的第二抗體 （二抗）孵育，通常二抗連接有如辣根 過氧化物酶等標(biāo)記物。目的蛋白可由該 酶催化的顯色反應(yīng)在膜上形成有色產(chǎn)物 加以檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)用的是酶標(biāo)抗IgG， 故不加一抗。2試劑與儀器試劑（所有試劑均供兩組用）轉(zhuǎn)移緩沖液Tris甘氨酸甲醇20mL加蒸餾水約800mL，調(diào)pH至， 定容1000mLTris緩沖鹽溶液加蒸餾水約800mL，調(diào)pH至， 定容1000mLTBS800mLTween-20 400l精選公文范文封閉液及抗體稀釋液脫脂奶粉TBS100mL底物溶液二氨基聯(lián)苯胺（DAB）TBS 18mLH2O2 20叫臨用前配麗春紅總蛋白質(zhì)染色液麗春紅1g4% 乙酸 100mL5%小牛血清生理

21、鹽水小牛血清%生理鹽水定容至150mL酶標(biāo)抗 IgG（1： 1500）酶標(biāo)抗IgG5%小牛血清生理鹽水定容至150mL儀器夾心式電泳槽，電泳儀，硝酸 纖維素膜，直徑9cm培養(yǎng)皿，剪刀，鑷 子，刀片，微量移液槍，普通濾紙3試驗(yàn)步驟SDS電泳分離精選公文范文-2)精選公文范文所需試劑、儀器以及分離步驟完全 與實(shí)驗(yàn)六相同，故此處從略。不同之處 如下：樣品制備：取人血清，加稀釋5 倍的上樣緩沖液，振搖后10000rp/5min 離心，取80叫上清液加入等體積的樣品 緩沖液，在沸水浴中加熱3min。瞬間離 心，取上清液上樣。加樣：拔出梳子，用電極緩沖液沖 洗樣品槽后加樣。上樣量從左到右為5、 20、 1

22、5、 10、 5、 5、 5、 5、 10、 15、 20、 5叫（從中間分開，兩側(cè)對(duì)稱）。電泳：穩(wěn)流10mA電泳，當(dāng)漠酚藍(lán) 指示劑前沿到達(dá)距底部1cm左右時(shí)，停止電泳。取出膠，將點(diǎn)有樣品的膠 條從中間切成兩條，一條用常規(guī)方法染 色和脫色，另一條用于轉(zhuǎn)移和酶聯(lián)。轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)到硝酸纖維素膜上（電 轉(zhuǎn)移）切割與膠尺寸相符的硝酸纖維素 膜，用轉(zhuǎn)移緩沖液浸泡5min使沒有氣 泡。精選公文范文剪2張濾紙與膠尺寸大小相符，將 其與海綿一起浸泡在轉(zhuǎn)移緩沖液中。打開轉(zhuǎn)移槽的膠板，依次放入：a. 一張浸濕的海綿；b, 一張用轉(zhuǎn)移緩沖液 飽和的濾紙；c.用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗過的 膠，并小心的趕走濾紙和膠之間的氣泡; d

23、.硝酸纖維素膜，正面對(duì)著膠，在膠和 膜的右下角剪一小角，以標(biāo)明方向；e, 一 張用轉(zhuǎn)移緩沖液飽和的濾紙；f. 一張浸 濕后的海綿。小心的合上膠板，并立即放入轉(zhuǎn)移 電泳槽中。加轉(zhuǎn)移緩沖液至滿。插好電極，注意正負(fù)極方向，膠側(cè) 為負(fù)，NC膜側(cè)為正。打開電泳儀開關(guān)調(diào) 至穩(wěn)壓60v，電泳2h，轉(zhuǎn)移結(jié)束后打開 膠板取出硝酸纖維素薄膜。膜的酶聯(lián)免疫染色用麗春紅溶液檢驗(yàn)轉(zhuǎn)移是否成功， 若顯色清楚，用蒸餾水沖洗，TBS洗膜 1min。將膜放入培養(yǎng)皿中。加封閉液后在 37 C搖床上搖動(dòng)60min。精選公文范文取出膜，用TTBS洗膜3次，每次 3min，將膜放入另一個(gè)培養(yǎng)皿中。在培養(yǎng)皿中加入用150ml 5 %小牛

24、 血清生理鹽水配制的1: 1500的酶標(biāo) IgG,在冰箱中振蕩過夜。取出膜，用TTBS洗3次，每次 3min，最后用TBS溶液洗1次，以去除 Tween-20。將膜浸入10ml底物溶液中，至顯 色清楚后，取出膜，將膠制成干板。4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果SDS電泳分離結(jié)果（圖1 右）上樣量為10叫的泳道分離效果較 5叫的泳道好，共出現(xiàn)4個(gè)較清晰的條帶。顯色后的免疫印跡膜（圖1左）在免疫印跡膜上共檢測(cè)出一條帶C1，應(yīng)該為球蛋白，對(duì)應(yīng)于右圖中的C。人血清蛋白10 5何C1 C精選公文范文圖1: SDS電泳分離結(jié)果（右 圖）和顯色后的免疫印跡膜（左圖），圖 上所標(biāo)的數(shù)字分別為每一個(gè)泳道的上樣量（單位 /“）l5討論

25、本實(shí)驗(yàn)所用的樣品是人血清，人血 清的成分非常復(fù)雜，BioPharm International（ 2003）報(bào)道：Melecular and Cellular Proteomics 2002 年 12 月號(hào)發(fā)表 的一篇論文稱，人血清中已確證的蛋白 種類幾乎翻了一番，即達(dá)到490種。這 是 Pacific Northwest National Laboratory （PNNL）的科學(xué)家利用液相層析法和質(zhì) 譜分析法代替?zhèn)鹘y(tǒng)凝膠電泳法鑒定的成 果。這些人血清蛋白包括了先前在血清 中未鑒定出來的低豐度蛋白，以及尚未 明功能的蛋白。由于方法的限制，我們 所用的傳統(tǒng)電泳方法根本不可能完全分 離。血清中的蛋白主要是由白蛋白與 球蛋白所構(gòu)成。健康人的白蛋白與球蛋 精選公文范文2精