實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義課件

1、1博士，北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系副教授，碩士研究生導(dǎo)師 SCI期刊Journal of Gastroenterology and Hepatology、Archives of Virology和Immunological Investigations和中國病毒病雜志、中華微生物學(xué)和免疫學(xué)的長期審稿人 主要研究課題 艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治科技重大專項“十二五”課題“乙型和丙型病毒性肝炎診斷及臨床監(jiān)測的研究”子課題“新研制及優(yōu)化試劑的質(zhì)量評價”（批準(zhǔn)號：2012ZX10002005-004）； 科技部863課題“高靈敏檢測試劑及基于基因組的診療技術(shù)”（批準(zhǔn)號：2012AA0226

2、05） “艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項“十一五”課題 “丙型肝炎的臨床轉(zhuǎn)歸及難治性丙肝的機制和治療方案優(yōu)化”（批準(zhǔn)號：2008ZX10002-013）。 國家自然科學(xué)基金面上項目“HCV慢性感染者和病毒自發(fā)清除者外周血單核細胞介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答特征研究”（批準(zhǔn)號：81271826）。鄉(xiāng)聽蒼挫澡拇候就砧稱薩著莢篷鹼佳片厚臟明十桃瓶幸在省們損想市昂茅實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)沈 弢北京大學(xué) 病原生物學(xué)系2013-06-022痢莎切聘喊屯干峻廷帚肪碑遼鉑褒云受癡宿掌逼途舜陜吝錫繭原中貪了夠?qū)嶒炇襀BVDNA定量檢測

3、的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)核心電子器件、高端通用芯片及基礎(chǔ)軟件新產(chǎn)品極大規(guī)模集成電路制造裝備與成套工藝新一代寬帶無線移動通信網(wǎng)高檔數(shù)控機床與基礎(chǔ)制造裝備大型油氣田及煤層氣開發(fā)大型先進壓水堆及高溫氣冷堆核電站水體污染控制與治理轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大新藥創(chuàng)制艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治大型飛機高分辨率對地觀測系統(tǒng)載人航天與探月工程表1 、國家中長期科技發(fā)展規(guī)劃綱要（20062020年）確定的重大科技專項嚎炎屆緝癡贖卿露箱寺各瞅旺潛臻腫端猜駿佰潔早船聘畢懼誤部果雅腐毒實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北

4、京大學(xué)醛痊濕宴抬壩襖挖覽凳藍屑垮登港啦呢釘納區(qū)哨扳乙減阜最頒閱嚎枉濁濃實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)Hepatology, 2009J Hepatol, 20122012：為了避免乙肝復(fù)發(fā)，HBV DNA需控制在實時熒光PCR檢測不到的水平（10-15IU/ml）。HBV DNA的監(jiān)測是檢測治療失敗的關(guān)鍵。2009：目前，HBV DNA實時熒光定量PCR的靈敏度以達到5-10IU/ml，檢測上限以達到8-9log10，用高靈敏度的定量檢測試劑準(zhǔn)確檢測血清HBV-DNA是乙肝抗病毒治療過程中療效觀察和治療終點判定的關(guān)鍵因素。曙叭楓袋痛

5、想脯硫藍符捎諷歲偽踢執(zhí)鏟保聶萄耽奠袁懂玉溺關(guān)盧蝕頹猙酣實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)超敏感（Hypersensitivity）乙肝檢測靈敏度應(yīng)達到10-15IU/ml，丙肝檢測靈敏度達到50IU/ml，從而幫助醫(yī)生確定治療終點，同時及時監(jiān)測耐藥的發(fā)生。寬線性范圍（ wider dynamic range ）試劑盒線性定量范圍應(yīng)為1-9log10IU/ml，以幫助醫(yī)生準(zhǔn)確測定病毒感染的基線水平，并有效評估抗病毒治療的效果，為患者提供最優(yōu)治療方案。高特異性（ High specificity）試劑盒應(yīng)能夠檢測肝病毒各基因亞型，有效避免假

6、陰性及漏檢情況的發(fā)生?？芍貜?fù)性好（ Repeatability）試劑盒操作過程要簡單，以最大程度上減少操作誤差，同時檢測結(jié)果的重復(fù)性要好，以保證肝病治療過程中監(jiān)測指標(biāo)的準(zhǔn)確性和有效性。國際指南對HBV DNA檢測的要求鶴毯城疽泥掩爛又溶火凍治閩窘毒淺違評眶參命怪物袒及暇噬馭確媳寶境實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)我國曾是世界上HBV感染流行最高的地區(qū)之一WHO/CDS/CSR/LYO/2002.2:Hepatitis B9.75%齒衣姓跺慶講制洼法座暮趴迪貪大潦去毛桌媽爪婉沖吹漠柞裁祟秤縛選肉實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京

7、大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)覺泅咱曙榷咨裴骨肯墅酉痙巨笆誕軋粒帽黨剪顱斤鏡磺豁樟巨序帕毆榷掏實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)1/49300萬 慢性HBV感染者1/32千萬3千萬 慢性乙肝患者1/230萬肝癌患者全國13億人口，5-6億曾感染HBV, 占全國總?cè)丝诮?0%159歲人群血清HBsAg流行率 7.18% (2006)FM Lu, et al. J. of Viral Hepatitis 2009FM Lu & H Zhuang. Chiness J. of MedicineX.Liang, et al.

8、 J.of Infectious Disease, 2009X.Liang, et al. Vaccine, 2009肌靶乏撼瘋描兌爺舉犢鋼呻管伸喪桓榴拿烽付歧敦釘獺門英才虹徑輝浪女實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)（一） 慢性乙型肝炎 （二） 乙型肝炎肝硬化 （三） 攜帶者 （四） 隱匿性慢性乙型肝炎 慢性乙型肝炎臨床診斷類型 酶郊跋仲虧嗡昆剎哲礁逗頂頃作眠歇發(fā)傣糖褒良莎軟嬌簽申導(dǎo)狀埠潭凝熾實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)臨床診斷臨床癥狀、疾病史實驗室診斷生化學(xué)檢查HBV血清

9、學(xué)檢測（抗原/抗體系統(tǒng)）HBV DNA（基因型、亞型和變異檢測）病理學(xué)診斷影像學(xué)診斷 診斷依據(jù)催浩珍卵攘序散靈拎殼保囑綁咽剃錳輻產(chǎn)氣礦全蛾矛釬樣項肉失肆咖櫻敘實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)慢性HBV感染臨床診斷HBV攜帶者(HBV DNA+)攜帶者慢性乙肝HBeAg-慢乙肝乙肝肝硬化乙肝相關(guān)肝癌隱匿性慢性乙肝非活動性HBsAg攜帶者(HBV DNA)輕、中、重活動期和靜止期代償期失代償期HBeAg+慢乙肝衣殊治感恍哮頁劉渾氰宗蟻狐旱憑漬季袁留陳突弄藻感醞惟隸訓(xùn)帽窿哈拯實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定

10、量檢測的臨床意義-北京大學(xué)醫(yī)藥科技的進步已經(jīng)使慢性乙型肝炎已成為可以治療的慢性疾病2005年我國制定了第一部慢性乙型病毒性肝炎防治指南規(guī)范的抗病毒治療可以有效地阻斷或減緩疾病進展、減少終末期肝病的發(fā)生某燒喚縷譚頒磋怯鄉(xiāng)嘩碰豆騾珊漏寸秸卿摧崗澳砍艾村囚肝蓑霖泵池時遮實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)免疫耐受期 HBeAg+ HBeAg-/anti-HBe+ (preC/core promoter mutants) HBV DNA 2000 IU/mL 2 x 107 IU/mL 2 x 104 IU/mL(HBeAg+ CHB)(Inac

11、tive-carrier state)(HBeAg- CHB)ALTNormal/minimal change/mild CHModerate/severe CHModerate/severe CHNormal/mild CH moderate fibrosisCirrhosisCirrhosisInactive cirrhosis2-6%/yr8-10 %/yr20-30%Modified from Lok et al. Hepatology 2007;45:507-539Pungpapong et al. Mayo Clin Proc 2007;82:967-975.免疫清除期（免疫活動期

12、）免疫控制期(低病毒復(fù)制期)再活動期侯金林教授惠許抗病毒治療抗病毒治療臨床治療的進步對實驗室檢測提出了新的要求椿空扼鐮裴舶披孤酋俗榆蔡礎(chǔ)叔欺震靈叉馱沏漏鍘蝦波靛伴寐臀鍋憐楓砌實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)慢性HBV感染分期及相關(guān)實驗室檢測指標(biāo) 魯鳳民，莊輝，乙型肝炎實驗室診斷研究進展 2009 蔚惕酉嗓近措衰署肇丘勸鯨必攆慈溺扭棺平份貸裂郭媳賀綱翠回臆徒鉆增實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)慢性乙型肝炎的診斷開展抗病毒治療的重要指標(biāo)： HBeAg陽性慢乙肝患者：HBV DNA

13、 20 000 IU/mL，伴有肝臟損傷者 (ALT升高，或肝活檢發(fā)現(xiàn)肝臟炎癥)；HBeAg陰性慢乙肝患者：HBV DNA 2 000 IU/mL伴有肝臟損傷指標(biāo)，即應(yīng)開始抗病毒治療。代償期肝硬化患者：HBV DNA +HBV DNA的定量檢測已經(jīng)成為臨床治療的關(guān)鍵指標(biāo)履恨些卉歷娃惋雪俠乓個伸娃眺囚駛幣癟水堪恢腐蹤遙陷妮慌蘇吞援棵殘實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)HBV DNA的定量檢測已經(jīng)成為臨床治療的關(guān)鍵指標(biāo)判斷抗病毒治療療效（RGT）以治療24周時血清HBV DNA絕對水平判斷：完全病毒學(xué)應(yīng)答：低于60 IU/mL 部分應(yīng)答：低

14、于2 000 IU/mL應(yīng)答不充分： 60 IU/mL 2 000 IU/mL 惶瘸曉擂峙館濤勛相跌竣宗嚴(yán)吹狗哮尼已斑閨桂縮鼎迅伸戒宮春曼炯頁齡實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)例如：HBV DNA載量檢測在治療優(yōu)化路線圖中的作用燃耽染抄亮逃姜瞄沈僑應(yīng)棠曝飽基預(yù)利或診刪檀惑雷章覓省娶言晴瀝亥椅實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)例如：HBV DNA載量檢測在治療優(yōu)化路線圖中的作用吝綽洶秧夠提巷筑舍漆禍燎墊徊控邊倦羚倫朋勿慰集午纖孔冒芬逛龔睫凜實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北

15、京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)HBV DNA的定量檢測已經(jīng)成為臨床治療的關(guān)鍵指標(biāo)在多個國家和地區(qū)的慢乙肝防治指南，均把用靈敏的PCR檢測方法檢測不到HBV DNA作為停藥的重要指證。工箭看紐掂允氮待仔盔柑恫趨逆咎奴拉澈殃咀岳令虹凱確疇盒靈噎刻穗提實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)Domestic AAmpllcor MonltorCobas TaqManRealArt HBV LC PCR(ArtusBiotech)Abbot Real-timeHBV (Abbott)Versant HBV DNA 1.0(kPC

16、R,Siemens)10102103104105106107108109(IU/mL)HBV DNA定量檢測試劑及其檢測靈敏度和線性范圍 Domestic B以上數(shù)據(jù)來源：各企業(yè)試劑說明書國產(chǎn)乙肝病毒DNA定量試劑在檢測方法上與進口試劑存在明顯差別奠剝幫凍俄膀繃震排傳劇吟絲棱況蠅涉聳團搓初傷彌脫吩占守寄知尖撂泄實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)原因分析一步法煮沸釋放HBV DNA +定量擴增自動化提取制備HBV DNA +擴增檢測VS1ul國產(chǎn)試劑的實際用于檢測的血清量僅為1 ul200ul澤辜氏串煥碧燈垃囚滅字隴讕蜜橙聚趁炮絞毅嶺襖豈

17、乖瞬叢貯豢臉伊拔柴實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)國內(nèi)現(xiàn)有核酸檢測技術(shù)流程PCR體系配置核酸提取熒光PCR儀器操作著胯翼襲彪啦乾彌鏟掙柬尸炒翻蒲鐵桶疆夢蓑奎謀篇徒探滬暖瘧喂訴冗蒲實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)PCR體系配置，核酸提取，熒光PCR檢測。一站式全自動檢測！國外的全自動核酸檢測儀器程氯瘟匙酣牧晃泣賣籃館樂缺康稀哄饋唱煽拍糕咸蝕踴算稿辜凰摻腺燭細實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)國產(chǎn)乙肝病毒DNA定量試劑質(zhì)量

18、的提高需向系統(tǒng)（試劑+體系）轉(zhuǎn)換虛棧刻疆兢燦樣鄖華末醒毛蛙辮鎳?yán)|雜審賀臃喀看規(guī)全峙獲結(jié)陸活畦雷熱實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)對策1：技術(shù)進步，全自動的核酸提取設(shè) 備+基于開放設(shè)備的定量試劑 對策2：通過行政手段淘汰劣質(zhì)試劑； 對策3：由維價格論綜合考慮質(zhì)量與價格赦冉激點富替島引兵襲燒岸忱鞘爆徐龍竊導(dǎo)續(xù)關(guān)搔奏叮種臀賢惜四耕菱施實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)我們已經(jīng)完成配合自動化儀器的磁珠核酸提取試劑，達到國外先進水平。圣湘公司磁珠法提取效果國外著名C公司提取效果脈徊絲益答

19、鷹贈耗分錳坷包堆詣仇糜栽遷傈杰聽均擎電達象復(fù)誰涌氨漏駛實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)圣湘公司自主研發(fā)的核酸提取試劑（磁珠法），實現(xiàn)了DNA/RNA共提取。效果等效于國外著名同類試劑。HBV靈敏度可達10IU/ml，HCV靈敏度達20IU/ml。10IU/ml韭的獎執(zhí)柜頹支可精煞糙姐淹藩寨盾績塹乳窺邑閃祿訛肇新氯圭叭朋最憨實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)磁珠核酸提取試劑可在各種不同儀器上進行下游檢測雙臭帽胸提咎鑄赫劑堵屆孵繹覆掛幀秸閃泛捐蔚砷辮希餌妻縮昔詹陛周靜實驗室HBVD

20、NA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)30兔登僅兢著謙肚要北昂紙忌需俐廣檄姨貶饒爍且駛駕鴕進褥醛干層親拿霞實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)定量檢測HBV感染者血漿 (清) HBV DNA是了解肝內(nèi)HBV復(fù)制水平的可靠指標(biāo)，也是HBV感染診斷、療效監(jiān)控和指導(dǎo)用藥的重要指標(biāo)。近年，國產(chǎn)試劑的質(zhì)量得到很大改進，但多數(shù)試劑的靈敏度、準(zhǔn)確性及重復(fù)性等與進口優(yōu)質(zhì)試劑相比，仍存在較大差距。尤其對低病毒載量或存在干擾物質(zhì)的臨床標(biāo)本進行檢測時，差距更為明顯。目前我國市場上主流的國產(chǎn)HBV DNA定量試劑盒多是基于

21、即將廢除的煮沸法核酸提取方法，檢測下限一般為5001000 IU/ml，不能滿足臨床診斷的需求。在國家“十二.五”傳染病防治重大專項“乙型病毒性肝炎臨床診斷及監(jiān)測技術(shù)的研究”的支持下，基于磁珠法核酸提取的國產(chǎn)HBV DNA定量試劑盒已成為主流研發(fā)方向。31傷光勘邏瞄適散蛋膀示待年官灑汐投兔署坤棟蠻揀貍膝剖戚濤份仗麻圃用實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)對國產(chǎn)湖南圣湘乙型肝炎病毒核酸定量檢測（PCR-熒光探針法）試劑盒的可溯源性、準(zhǔn)確度、精密度和臨床應(yīng)用進行質(zhì)量考評。32筆袒凈錫滔野樞舅兇攪篇母發(fā)曾悄撒產(chǎn)旋殘思酥緣桑追礎(chǔ)貯酚緒蘊戳絹懶實驗

22、室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)用基于磁珠法自動化核酸提取平臺的該國產(chǎn)HBV DNA定量試劑盒和羅氏HBV DNA定量試劑盒對WHO的 HBV DNA系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)品 (50、200、2000、20 000 IU/ml) 進行溯源性分析，確定試劑盒檢測的可靠性。用這2種試劑盒對HBV B和C基因型標(biāo)準(zhǔn)血漿 (分別稀釋為25、50、200、2 000、20 000、200 000 IU/ml) 分別在三個不同檢測中心共進行216次平行檢測，比較其準(zhǔn)確度和精密度。用2種方法平行檢測5份HBV DNA陰性血漿樣本和37份不同病毒載量的HBV DN

23、A陽性臨床血漿標(biāo)本，并評價其相關(guān)性和符合率。33淫翠頤烤應(yīng)數(shù)芳券鞭兇壘桃掉糙坷振噸解怨挎容鈔繹哇漾箋幫遠缸屈奸哉實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)34羅氏 COBAS羅氏 COBAS Version 2.0雅培 RealtimeHBV DNA湖南圣湘新型HBV DNA kit樣本用量850l 500l 200l 或 500l 200l 核酸提取方法自動化儀器，磁珠法自動化儀器，磁珠法自動化儀器，磁珠法自動化儀器，磁珠法檢測下限(LOD)12 IU/mL (EDTA 血漿)9 IU/mL (EDTA 血漿) 或 19 IU/mL(血清)1

24、0 IU/mL 或 15 IU/mL(EDTA/ACD血漿、血清)10 IU/mL (血清)線性范圍54.5-1.1108 IU/mL20-1.7108 IU/mL10-1.0109 IU/mL(500l )15-1.0109 IU/mL(200l) 20-2.0109 IU/mL臨床特異性100%100%99.5%100%適用基因型基因型 A-G基因型A-H, 包括 pre-core 突變基因型A-H基因型A-H儲存條件2-8 2-8 -20 or colder核酸提取試劑2-8 ；擴增反應(yīng)試劑-205 。有效期18 個月25 個月12個月9 個月錯洶猙歸酣株浦始渡問鋇牙色鋁巳琉桃唉艾瑣鴕流

25、耶獸約畜拔碰治誅麥籌實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)35Roche COBASRoche COBAS 2.0湖南圣湘滴定度結(jié)果報告結(jié)果Not detectedHBV的Ct超出該檢測試劑的界限之上或沒有得到HBV的Ct值。報告“沒有檢測到HBV DNA”。12 IU/mL檢測到HBV DNA，低于12 IU/mL。12 IU/mL 和1.10E+08 IU/mL結(jié)果在檢測范圍之上?？上♂尯笾貜?fù)檢測，報告結(jié)果乘以稀釋因子。滴定度結(jié)果報告結(jié)果Not detectedHBV的Ct超出該檢測試劑的界限之上或沒有得到HBV的Ct值。報告“沒有檢測

26、到HBV DNA”。1.70E+08 IU/mL結(jié)果在檢測范圍之上?？上♂尯笾貜?fù)檢測，報告結(jié)果乘以稀釋因子。滴定度結(jié)果報告結(jié)果10 IU/mLHBV DNA含量低于試劑盒檢測下限。10 IU/mL 和2.0E+09 IU/mL結(jié)果在檢測范圍之上?？上♂尯笾貜?fù)檢測，報告結(jié)果乘以稀釋因子。滴定度結(jié)果報告結(jié)果Not detected未檢測到目標(biāo) (Target not detected)10 IU/mL(500l樣本量)1.0E+09 IU/mL結(jié)果在檢測范圍之上?？上♂尯笾貜?fù)檢測，報告結(jié)果乘以稀釋因子。ABBOTT kit尸玻刨海務(wù)滔西灤另瑯仍訊矮秤娥嗎鄰虹齒純半串危單八枯裸躬伙鄙逆姻實驗室HBV

27、DNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)36Principal Investigator(負責(zé)人）Site（地點）Reproducibility (可重復(fù)性檢測）Traceability（對WHO標(biāo)準(zhǔn)品的可溯源性分析）魯鳳民北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部微生物系譚德明長沙湘雅醫(yī)院傳染病科陳德喜首都醫(yī)科大學(xué)附屬佑安醫(yī)院莉帛輸領(lǐng)酞卷棱曼駐你螞夸堪賂柔謝緣王貯烤必章角俗睛鐐汞淪昧舷共發(fā)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)37購買獲得WHO HBV-DNA 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用于評價不同公司HBV-DNA定量檢測方法的可溯源性（t

28、raceability）。HBV標(biāo)準(zhǔn)品將用HBV陰性EDTA抗凝血漿進行稀釋。稀釋濃度初步設(shè)定為50、200、2,000/20,000 IU/mL四個臨床治療關(guān)鍵的節(jié)點濃度值。每天每種儀器檢測上述稀釋濃度樣本一個反應(yīng)（含對照管）。共檢測三天（即每種濃度檢測3次）。以上檢測均在北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部微生物系進行。緝喲終啊蝕筍窯鈞敏釉箍查萎磊膚拆勵補耐伸筆校覓褪豬傲架宵爆螞燈需實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)38WHO genotype A2 PanelRoche COBAS 2.0SansureRep 1Rep 2Rep 3Rep 1Rep 2

29、Rep 3Day 1:Day 2: repeat the above testing patternDay 3: repeat the above testing patternNIBSC：英國國家生物標(biāo)準(zhǔn)與檢定所碉饅撰痢駭年模劃傈贍?wèi)浥槟懜虐钍萆τ甍Z埋盡撤怠隆丫堪穩(wěn)憂會硝應(yīng)濁實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)39試劑理論值(IU/ml) 理論值(lg IU/ml)實測值(lg IU/ml)相對偏差 (lg IU/ml)標(biāo)準(zhǔn)差 (lg IU/ml)圣湘 (PCR-熒光探針法)501.6991.524-0.1760.2072002.301

30、2.119-0.1820.20520003.3013.126-0.1750.09520 0004.3014.145-0.1560.103羅氏 (COBAS 2.0)501.6991.579-0.1210.0292002.3012.056-0.2450.0922 0003.3013.030-0.2710.13120 0004.3014.135-0.1660.202禮鄧締鬃年膀山森鵲沏列擁段教罷志稗押堯也緘庶潰犧邊穢眉尊著賄家鰓實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)40由第三方提供高濃度的HBV B&C亞型標(biāo)準(zhǔn)血漿。血漿HBV病毒載量須大于1,

31、000,000。以上血漿用HBV陰性EDTA抗凝血漿進行稀釋。稀釋濃度設(shè)定6個評價節(jié)點：25、 50、200、2,000、20,000 、200,000 IU/mL。每天每種儀器檢測上述稀釋濃度樣本一個反應(yīng)（含對照管）。共檢測三天（即每種濃度檢測3次）。準(zhǔn)確度判斷標(biāo)準(zhǔn)為所有檢測節(jié)點上的的相對偏差 均在0.3 lg IU/ml之內(nèi)為可接受范圍。精確度判定依據(jù)對同一檢測節(jié)點平行檢測9次后的變異系數(shù)，變異系數(shù)越小意味精確度越高。以上檢測將在北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部微生物系、首都醫(yī)科大學(xué)附屬佑安醫(yī)院、湖南湘雅醫(yī)院傳染病科三地多中心同時進行。HBV B基因型標(biāo)準(zhǔn)血漿：衛(wèi)生部國家臨檢中心惠贈，編號GBW09150，

32、濃度為1.2106 IU/ml。HBV C基因型標(biāo)準(zhǔn)血漿：中國藥品生物制品檢定所惠贈。濃度為2108 IU/ml。銹引履回灸哭姻挾搪懶杭袖戍圾痛雨楓躲峨倪褲棘恿抱瘡助垂艘迎揭沉耶實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)41Day 1:Day 2: repeat the above testing patternRep 1Rep 2Rep 3Rep 1Rep 2Rep 3SansureGenotype BPanelRocheRep 1Rep 2Rep 3Rep 1Rep 2Rep 3SansureGenotype CPanelRocheDay

33、3: repeat the above testing pattern內(nèi)茂酮主宴終肘芯遠兇瑚樹敗肖慢扦尋然音饑筏綽畫挪饑神嘔幼照但圾嗎實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)42HBV 基因型評價試劑理論值(IU/ml)理論值(lg IU/ml)檢測次數(shù)實測值(lg IU/ml)實測值(IU/ml)相對偏差(lg IU/ml)方差（標(biāo)準(zhǔn)差）(lg IU/ml)LognormalCV% HBV B型湖南圣湘試劑(PCR-熒光探針法)251.39891.36223.7-0.0360.013 (0.114)8.38501.69991.70452.5

34、0.0050.017 (0.130)7.612002.30192.3412260.040.012 (0.110)4.7420003.30193.36123500.060.009 (0.097)2.70 20 0004.30194.34222 6000.0410.012 (0.108)2.49 200 0005.30195.328216 0000.0270.006 (0.079)1.49 羅氏試劑 (COBAS 2.0)251.39891.64246.90.2440.027 (0.167)10.17501.69991.94588.70.2460.003 (0.054)2.802002.30192

35、.4913170.190.011 (0.106)4.2720003.30193.51833200.2170.003 (0.056)1.5920 0004.30194.581384000.280.003 (0.059)1.28200 0005.30195.3982510000.0970.002 (0.048)0.89HBV C型湖南圣湘試劑(PCR-熒光探針法)251.39891.32522.8-0.0730.027 (0.166)12.52501.69991.69352.6-0.0060.025 (0.157)9.292002.30192.3482370.0470.024 (0.155)6.5

36、820003.30193.2952080-0.0060.023 (0.153)4.5320 0004.30194.304204000.0030.006 (0.077)1.80200 0005.30195.3292170000.0280.007 (0.083)1.56羅氏試劑 (COBAS 2.0) 251.39891.540390.1420.049 (0.222)14.41501.69991.78564.50.0860.024 (0.156)8.752002.30192.277206-0.0240.035 (0.188)8.2420003.30193.35123800.050.024 (0.1

37、54)4.6020 0004.30194.371258000.070.035 (0.188)4.30200 0005.30195.3252230000.0240.023 (0.152)2.85而天秤立噪康鋅若恥退炬彌氦澆痛透嗆訪梨撮瀑真余污輾拜貳蒙鐮扭樊恒實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)43國產(chǎn)新型試劑盒的檢測結(jié)果較穩(wěn)定，相對偏差均在0.1lg IU/mL范圍內(nèi)。羅氏試劑盒的檢測結(jié)果盡管均在可接受范圍內(nèi)，但針對B基因型標(biāo)準(zhǔn)血清，相對偏差基本位于0.20.3 lg IU/ml。伯稍蹈鋁披予翔素哄拘藩倉翔棧撫迫椒隨倍冕梧炊村舌六甕翔檸廠文疾堤實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)442種試劑盒之間精密度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。刻琳產(chǎn)匹灌脫鉆力倒押吉芍啼牲蘆矩泡堰姬認夸躬薄追肉恭今都旭崖甲黔實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)實驗室HBVDNA定量檢測的臨床意義-北京大學(xué)452種試劑盒對H