大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立與觀察

1、大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立與觀察黃永年 張元德 邢玉馥長春,白求恩醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院(黃永年、張元德);長春中醫(yī)學(xué)院(邢玉馥)1995-08-081一、材料與方法1.實驗動物:Wistar大鼠系,體重120 1 30g,雌雄各半。共用鼠86 只,其中70只用作免疫實驗;另16 只不免疫,用作正常對照。2.細菌菌株:取一只健康大鼠的結(jié)腸內(nèi)容物,劃線于伊紅美藍平板,37 C培養(yǎng)24 小時,取典型菌落擴增,并作數(shù)值鑒定,確定為大腸桿菌后,冰箱保存?zhèn)溆谩Ｃ庖咔叭【N擴增,用福馬林殺死細菌,生理鹽水洗兩次并調(diào)濃度為1.2 x108/ ml23.免疫過程:免疫動物分別于第1、1 0、17、24 天共接

2、受4次免疫。第一次于后足腸處注射細菌懸液0.2m l;第2、3次分別于腹部甸背部皮下多點注射0.4ml和0.6ml;第4次腹腔內(nèi)注射1.2m l,其中半數(shù)動物在第2 次免疫前給口服活菌1.5m l(濃度同前)。4.檢查項目與方法:用常規(guī)方法每3天檢查便潛血一次,用形態(tài)法測定淋巴細胞轉(zhuǎn)化率;用比濁法測定循環(huán)免疫復(fù)合物;在不同時間處死動物,取各段結(jié)腸各0.5c m 及肝、心、脾、肺、腎等臟器作病理切片,HE染色、光鏡觀察。一、材料與方法3二、結(jié)果1.便潛血及主要癥狀:被免疫大鼠從第二周開始出現(xiàn)軟便及便潛血陽性,但僅為部分大鼠且程度較輕;到第四周時所有接受免疫的大鼠均表現(xiàn)為便潛血陽性。在繼續(xù)飼養(yǎng)過程

3、中,便潛血有加重傾向。在加服活菌的半數(shù)免疫動物,便潛血表現(xiàn)得更為嚴重,但與單純免疫組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.0 5)。免疫大鼠從第三周開始出現(xiàn)粘液便,并伴有食欲減退,消瘦,倦怠、毛松等癥狀。4二、結(jié)果2.淋巴細胞轉(zhuǎn)化率:第31 天時取各組大鼠處死,測定淋巴細胞轉(zhuǎn)化率。正常對照組為35.9士11.7;單純免疫組為24.1士7.4;免疫同時加服活菌組為22.8士3.8;免疫組與正常對照組比較差異顯著(P0.0 5)。5二、結(jié)果3.循環(huán)免疫復(fù)合物:在第31 天測定淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的同時,測定循環(huán)免疫復(fù)合物。正常對照組為3.7士1.7;單純免疫組為9.3 士4.6;免疫同時加服活菌組為11.0士3. 4

4、。免疫組與正常對照組比較差異顯著(P0.0 5)。6二、結(jié)果4.病理改變:16 只正常對照鼠結(jié)腸各層組織結(jié)構(gòu)完整,除2份標(biāo)本粘膜層可以看到極少數(shù)的嗜酸性粒細胞浸潤外,其余標(biāo)本無異常。而在免疫的70 只鼠中,均可見粘膜及粘膜下層水腫,炎細胞浸潤及血管炎改變。粘膜內(nèi)可見多處隱窩膿瘍及潰瘍形成;潰瘍有的深達粘膜下層或達漿膜,甚至形成粘膜下或漿膜下膿腫。無論是否加服活菌,病理改變基本相同,并隨時間的延長,潰瘍的形成率在增加。比較各段結(jié)腸病變情況,可見病變在橫結(jié)腸與降結(jié)腸更為多見,但與升結(jié)腸比較并無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。肝、心、脾、肺、腎等重要臟器未發(fā)現(xiàn)有意義的病理變化。7三、討論本文結(jié)果說明,隨著免疫次數(shù)的增加,在大鼠的結(jié)腸壁上逐漸出現(xiàn)潰瘍或彌漫性炎癥;同時可以看到細胞免疫機能下降和循環(huán)免疫復(fù)合物增加。說明細胞免疫機能低下及循環(huán)免疫復(fù)合物的形成可能是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的重要因素。此外加服活菌并不能影響結(jié)腸壁上潰瘍形成的數(shù)量,說明單純免疫即可達到造型的目的,使實驗操作變得簡單。本模型由于造型