液相色譜儀工作原理

1、液相色譜儀工作原理一、液相色譜儀一高壓輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)由貯液罐、過濾器、梯度洗脫裝置、高壓輸液泵、脫氣裝置等組成。高壓泵是高效液相色譜儀最重要的部件之一。由于高效液相色譜儀所用色譜柱直徑細(xì)，固定相粒度小，流動相阻力大，因此，必須借助于高壓泵使流動相以較快的速度流過色譜這。高壓泵需要滿足以下條件：能提供150450kg/cm2的壓強(qiáng)；流速穩(wěn)定，流量可以調(diào)節(jié)；耐腐蝕。目前所用的高壓泵有機(jī)械泵和氣動放大泵兩種。梯度淋洗裝置可以將兩種或兩種以上的不同極性溶劑，按一定程序連續(xù)改變組成，以達(dá)到提高分離效果，縮短分離時(shí)間的目的。梯度淋洗的作用與氣相色譜中的程序升溫裝置類似。貯液罐貯液罐為不銹鋼、玻璃或氟塑料

2、制成的容器，容量為1到2L,用來貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動相。貯液罐可以是一個(gè)普通的溶劑瓶，也可以是一個(gè)專門設(shè)計(jì)的儲液器。儲液器往往和泵通過管路構(gòu)成循環(huán)系統(tǒng)以便除去溶劑中的氣體。現(xiàn)多數(shù)使用溶劑瓶，一般采用耐腐蝕的玻璃瓶或聚四氟乙烯瓶。貯液罐的放置位置要高于泵體，以保持輸液靜壓差，使用過程應(yīng)密閉，以防止因蒸發(fā)引起流動相組成改變，還可防止氣體進(jìn)入。高壓輸液泵氣相色譜由高壓鋼瓶直接提供動力，高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關(guān)鍵部件之一，是流動相的動力源。高壓輸液泵功能是將溶劑貯存器中的流動相以高壓形式連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中完成分離過程。液相色譜為了獲得高柱效，所用色譜柱徑較細(xì)，所填固

3、定相粒度很小，因此，對流動相的阻力較大，為了使流動相能較快地流過色譜柱，就需要高壓輸液泵。對高壓輸液泵的要求(1)能在高壓下連續(xù)工作，一般要求耐壓4050MPacm2，能在824h連續(xù)工作。輸出流量范圍寬：分析型填充柱在0.1-10mL/min內(nèi)連續(xù)調(diào)節(jié)，制備型填充柱要求在100mL以上。輸出流量穩(wěn)定，要求無脈沖，流量精度和重復(fù)性為0.5%左右。耐腐蝕，能適合各種有機(jī)溶劑、水和緩沖溶液。密封性好。泵體易于清洗和維修。高壓輸液泵，按其性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。泵的類型高壓輸液泵主要有恒壓

4、泵和恒流泵兩類，常使用恒流泵。恒流泵又稱機(jī)械泵，主要有機(jī)械注射泵與機(jī)械往復(fù)泵兩類。恒流泵特點(diǎn)是在一定操作條件下，輸出流量保持恒定，其流量與流動相粘度和色譜柱引起阻力變化無關(guān)；恒壓泵是指輸出壓力恒定，但其流量隨色譜系統(tǒng)阻力而變化，故保留時(shí)間的重現(xiàn)性差。如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。恒壓泵和恒流泵各有優(yōu)缺點(diǎn)。(1)恒壓泵A：氣動泵直接式，簡單，但高壓氣體可溶解于溶劑中，當(dāng)溶劑進(jìn)入檢測器時(shí)會放出氣體影響檢測。圖8-7氣動泵B：氣動放大泵泵出口壓力在系統(tǒng)中是恒定的，流速由柱的阻力決定。壓力由兩活塞的面積比決定。操作簡便，流量范圍大，但流速取決于溶劑粘度和柱滲透性。液缸大不便清洗。流

5、量有波動。圖8-8氣動放大泵特點(diǎn)：高壓、無脈動、成本低，用空氣壓縮機(jī)或氣體鋼瓶低壓驅(qū)動，操作成本低。缺點(diǎn)是更換溶劑困難。（2）恒流泵恒流泵有往復(fù)泵和螺旋柱塞泵，這類泵輸出流量恒定，柱壓力由柱的阻力決定。A：螺旋注射泵步進(jìn)馬達(dá)控制活塞移動，同時(shí)控制流量。至限位開關(guān)時(shí)停泵后退活塞、吸液，然后繼續(xù)。壓力大（可達(dá)60MPa），無脈沖。但清洗不便，精密而價(jià)高。圖8-9螺旋注射泵B：往復(fù)柱塞泵圖8-10往復(fù)柱塞泵往復(fù)柱塞泵由偏心輪帶動活塞往復(fù)移動，恒流輸出，并通過改變電機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)流量。體積小清洗方便，特別適用于梯度淋洗。往復(fù)柱塞泵有明顯脈沖，需采取增加脈沖阻尼器、改變凸輪形狀、加電子線路保護(hù)、用多頭泵系統(tǒng)

6、（并聯(lián)串聯(lián)）等措施。往復(fù)柱塞泵目前應(yīng)用較多。往復(fù)柱塞泵特點(diǎn)是單位時(shí)間輸出的液體流量由單位時(shí)間柱塞往復(fù)的次數(shù)決定，因此，流量恒定，與系統(tǒng)阻力無關(guān)，可以連續(xù)不斷的輸送液體，更換溶劑方便，可用于梯度洗脫，主要缺點(diǎn)是有脈動。C：多頭柱塞泵并聯(lián)雙柱泵少用一組單向閥。用兩相差180度的凸輪推動兩交替工作的柱塞。流量穩(wěn)定。圖8-11多頭柱塞泵D：往復(fù)隔膜泵柱室間用不銹鋼薄膜隔開而使活塞不與流動相接觸，靠油壓迫鋼膜而輸出。流量穩(wěn)定，單形成高壓慢。圖8-12往復(fù)隔膜泵（三）輸液體統(tǒng)的輔助裝置過濾器：除掉機(jī)械雜質(zhì)及固體顆粒。由于液相色譜柱、進(jìn)樣器等都很精密，微小的機(jī)械雜質(zhì)將導(dǎo)致這些部件的損害，而不能正常工作，同時(shí)

7、機(jī)械雜質(zhì)在柱頭的積累還影響柱子的使用，因此，溶劑需要過濾。圖8-13過濾器的結(jié)構(gòu)混合器：體積不宜大。脈動阻尼器：種類多，都有一定容積和彈性。壓力測量裝置：電子壓力控制器流量流量測量裝置：電子流量計(jì)脫氣裝置：除掉溶于流動相中的各類氣體，以保證柱效能?？刹捎猛ǖ摎狻⒊暡摎?、自動脫氣機(jī)脫氣等。（四）梯度洗脫裝置在液相色譜中，當(dāng)樣品組成復(fù)雜時(shí)，有時(shí)會出現(xiàn)先出的峰分不開，后面的峰保留值又太大的現(xiàn)象，這時(shí)，可以采用梯度洗脫來調(diào)整混合溶劑的組成，改變?nèi)軇?qiáng)度或選擇性。梯度洗脫就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，從而使流動相的強(qiáng)度、極性、pH值或離子強(qiáng)度相應(yīng)地

8、變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時(shí)間的目的。梯度洗脫裝置分為兩類：外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統(tǒng)，僅需一臺泵即可。內(nèi)梯度裝置（又稱高壓梯度），先將兩種溶劑分別用泵增壓后，再由泵按程序壓入混合室，混合，再注入色譜柱。圖8-14梯度洗脫裝置示意圖梯度洗脫的實(shí)質(zhì)是通過不斷地變化流動相的強(qiáng)度，來調(diào)整混合樣品中各組分的k值，使所有譜帶都以最佳平均k值通過色譜柱。它在液相色譜中所起的作用相當(dāng)于氣相色譜中的程序升溫，所不同的是，在梯度洗脫中溶質(zhì)k值的變化是通過流動相的極性、pH值和離子強(qiáng)度來實(shí)現(xiàn)的，而不是借改變溫度（溫度程序）來達(dá)到。流動相A、洗脫時(shí)，若樣品中各成分容

9、量因子k相差大，則大的峰寬而低且分析時(shí)間長。流動相B、是溶解力強(qiáng)。洗脫時(shí)，各成分很快出來，則k（12）小的峰達(dá)不到分離。A-B若將A、B流動相的組成隨時(shí)間改變，則即分離好，又縮短分析時(shí)間。當(dāng)我們需要混合三種流動相時(shí)，可利用電磁閥的功能將吸液分劃成A：B：C三部分，劃分比一定，組分送液時(shí)是一定時(shí)，相當(dāng)于GC中恒溫分析。在梯度送液時(shí)，劃分比則按所設(shè)定的程度時(shí)時(shí)刻刻都在變化，相當(dāng)于GC中程序升溫。二、液相色譜儀一進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣口、注射器和進(jìn)樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進(jìn)行分離。高效液相色譜柱比氣相色譜柱短得多（約540cm）,因此柱外效應(yīng)較突出。柱外效應(yīng)是指色譜柱外因素引

10、起的峰展寬，包括進(jìn)樣系統(tǒng)，連接管，檢測器中存在的死體積。柱外展寬可分為柱前和柱后展寬，進(jìn)樣系統(tǒng)是引起柱前展寬的主要因素，因此高效液相色譜法中對進(jìn)樣技術(shù)要求較嚴(yán)。在液相色譜中，進(jìn)樣方式有隔膜式注射進(jìn)樣器進(jìn)樣，高壓進(jìn)樣閥進(jìn)樣，自動進(jìn)樣裝置等。（一）隔膜式注射進(jìn)樣器隔膜式注射進(jìn)樣器有硅橡膠隔膜，在原理上與氣相色譜法完全一致。用微量注射器進(jìn)樣的優(yōu)點(diǎn)可柱頭進(jìn)樣，減小死體積，充分發(fā)揮柱的效能，簡單便宜。缺點(diǎn)是高壓進(jìn)樣時(shí)漏液.會產(chǎn)生誤差，隔墊使用次數(shù)有限，進(jìn)樣量小，重復(fù)性差。（二）進(jìn)樣閥方式一六通閥進(jìn)樣目前，廣泛采用多通路進(jìn)樣閥，它可以承受很高的壓力，由于進(jìn)樣量是由進(jìn)樣定量管決定的，因此，可以獲得好的重復(fù)性

11、，更換不同體積的進(jìn)樣定量管，可調(diào)整進(jìn)樣量。進(jìn)樣時(shí)，樣品中不應(yīng)混入機(jī)械雜質(zhì)，溶解樣品的溶劑最好與使用的流動相相同，以防止溶劑變化出現(xiàn)不溶物而堵塞柱子。一般高效液相色譜流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，六通閥結(jié)構(gòu)如圖所示，進(jìn)樣量由定量環(huán)確定。操作時(shí)先將進(jìn)樣器手柄置于采樣位置（LOAD），此時(shí)進(jìn)樣口只與定量環(huán)接通，處于常壓狀態(tài)，用微量注射器（體積應(yīng)大于定量環(huán)體積）注入樣品溶液，樣品停留在定量環(huán)中。然后轉(zhuǎn)動手柄至進(jìn)樣位置（INJECT），使定量環(huán)接入輸液管路，由高壓泵輸送的流動相將樣品送人色譜柱中。樣品定量管的容積是固定的，因此進(jìn)樣重復(fù)性好。缺點(diǎn)是不能注入小體積樣品（卡1.2卩L

12、）,改變注入量時(shí)要更換定量管。圖8-15旋轉(zhuǎn)式六通閥進(jìn)樣裝置三、液相色譜儀分離系統(tǒng)（一）色譜柱分離系統(tǒng)包括色譜柱、恒溫器和連接管等部件。進(jìn)行色譜分離的首要工作是選擇性能良好的色譜柱，即選擇在確定的分離條件下分離效率高和分析時(shí)間短的色譜柱。色譜柱的選擇應(yīng)考慮：固定相類型的選擇，主要取決于樣品分離模式；柱填料的結(jié)構(gòu)，主要指顆粒的形狀大小、均勻性、比表面、平均孔徑和孔容等；柱規(guī)格指柱內(nèi)徑、柱長度和填料粒度；色譜柱的牌號/廠商。色譜柱多為直形，內(nèi)部充滿微粒固定相。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。色譜柱可分為分析柱；制備柱；分析柱的保護(hù)柱。柱材料及規(guī)格色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定

13、相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多，它是由內(nèi)部拋光的不銹鋼管制成。一般色譜柱長540cm，內(nèi)徑為16mm,柱效達(dá)500010000塊/m理論塔板數(shù)。凝膠色譜柱內(nèi)徑312mm。，制備往內(nèi)徑較大，可達(dá)25mm以上。柱的填料固定液涂在擔(dān)體上而成。擔(dān)體有兩類：一類是表面多孔型擔(dān)體；另一類是全多孔型擔(dān)體。近年來又出現(xiàn)了全多孔型微粒擔(dān)體，這種擔(dān)體粒度為510ym，是由10nm級的硅膠微粒堆積而成，又叫堆積硅珠。由于顆粒小，所以柱效高，是目前最廣泛使用的一種擔(dān)體。3保護(hù)柱一般在分離柱前有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分離柱一樣，安裝在分析柱

14、前。其作用是收集、阻斷來自進(jìn)樣器的機(jī)械和化學(xué)雜質(zhì)，以保護(hù)和延長分析柱的使用壽命。一只1cm長的保護(hù)柱就能提供充分的保護(hù)作用。若選用較長的保護(hù)柱，雖可降低污染物進(jìn)入色譜柱，但會引起譜帶擴(kuò)張。因此選擇保護(hù)柱的原則是在滿足分離要求的前提下，盡可能選擇對分離樣品保留低的短保護(hù)柱。保護(hù)柱也可裝填和分析柱不同的填料，如較粗顆粒的硅膠（1015ym）。保護(hù)柱裝填的填料較少，價(jià)格較低，為消耗品，通常分析50100次樣品，柱壓力呈增大趨向時(shí)就是需要更換保護(hù)柱的信號。目前市場上供應(yīng)的結(jié)構(gòu)新穎的可更換芯式設(shè)計(jì)保護(hù)柱，是由保護(hù)套和可更換式保護(hù)芯，兩部分組成。（二）柱連接方式柱出、入口的連接管的死體積越小越好,一般常用

15、窄孑L（內(nèi)徑0.13mm）的厚壁（1.52.0mm）不銹鋼管,以減少柱外死體積.（三）柱溫控制在高效液相色譜分析中，柱溫一般為室溫或接近室溫。適當(dāng)提高柱溫可改善傳質(zhì)，提高柱效,縮短分析時(shí)間。因此，在分析時(shí)可以采用帶有恒溫加熱系統(tǒng)的金屬夾套來保持色譜柱的溫度。溫度可以在室溫到60C之間調(diào)節(jié)。對凝膠滲透色譜儀，其柱溫可從室溫至150C實(shí)現(xiàn)精確控制。四、液相色譜儀一檢測系統(tǒng)檢測器實(shí)際上是一種換能裝置，它將流動相中組分含量的變化，轉(zhuǎn)變成可測量的電信號（通常是電壓），然后輸入記錄器。從原理分析，任何一種分析鑒定方法都可能用作色譜檢測器。理想的檢測器應(yīng)該是靈敏度高、線性范圍大、對所有待測組分相同響應(yīng)。高效

16、液相色譜的檢測器很多，光學(xué)（紫外，熒光，折光檢測器）；電化學(xué)（極譜、電導(dǎo)、庫侖、離子選擇電極等。對檢測器要求是高靈敏度；低噪聲；大的線性范圍；對所有化合物都響應(yīng)。與GC一樣。用得最多的是UV檢測器，常用于有雙鍵的芳香族化合物檢測，有UV吸收就可用UV檢測器。因?yàn)閁V對甲醇，水無吸收，所以甲醇，水可用作流動相。檢測器噪聲一般由于電引起。（一）檢測器分類按性質(zhì)或應(yīng)用范圍分類有總體性能檢測器和溶質(zhì)性能檢測器。總體性能檢測器，是響應(yīng)值取決于流出物（含樣品與流動相）某些物理性質(zhì)的總的變化的檢測器。屬于這類檢測器的有示差折光、電導(dǎo)等檢測器,GC中的熱導(dǎo)檢測器也屬于這類檢測器。溶質(zhì)性能檢測器是響應(yīng)值取決于流

17、動相中溶質(zhì)的物理或化學(xué)特性的檢測器。屬于這類檢測器較多，有紫外檢測器、熒光檢測器、化學(xué)發(fā)光檢測器、安培檢測器、手性檢測器等。因?yàn)槿苜|(zhì)性能檢測器僅對被測定物質(zhì)有較大響應(yīng)，而流動相沒有響應(yīng)或響應(yīng)很小，所以檢測靈敏度高，受操作條件變化和外界環(huán)境影響小，并且可用于梯度洗脫操作。但與總體性能檢測器相比，應(yīng)用范圍受到限制。總體性能檢測器和溶質(zhì)性能檢測器的劃分也不是絕對的，例如紫外-可見檢測器常用作溶質(zhì)性能檢測器，但在間接光度離子色譜法中則成為總體性能檢測器。按測量信號性質(zhì)分類有濃度型檢測器和質(zhì)量型檢測器。濃度型檢測器的響應(yīng)值正比于溶質(zhì)在流動相中的濃度，測量的是流動相中溶質(zhì)濃度的瞬間變化，大部分液相色譜檢測

18、器屬這一類檢測器。當(dāng)樣品量一定時(shí)，檢測器瞬間響應(yīng)，峰高響應(yīng)值與流動相流速無關(guān)；峰面積響應(yīng)值與流動相流速成反比，峰面積與流速乘積為常數(shù)。質(zhì)量型檢測器的響應(yīng)值正比于單位時(shí)間內(nèi)通過檢測器的物質(zhì)的質(zhì)量，峰面積與流動相流速無關(guān)，峰高響應(yīng)值與流速成正比。例如庫侖檢測器就是質(zhì)量型檢測器。按測量原理分類有熱學(xué)性質(zhì)檢測器、光學(xué)性質(zhì)檢測器、電學(xué)及電化學(xué)性質(zhì)檢測器等。光學(xué)性質(zhì)檢測器是根據(jù)被測物質(zhì)對光的吸收、發(fā)射和散射等性質(zhì)進(jìn)行檢測的。有較多的液相色譜檢測器屬這一類檢測器，例如紫外-可見檢測器、示差折光檢測器、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、化學(xué)發(fā)光檢測器、手性檢測器等。電學(xué)及電化學(xué)性質(zhì)檢測器是根據(jù)被測物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)

19、進(jìn)行檢測的，常用的有安培檢測器、電導(dǎo)檢測器、庫侖檢測器、介電常數(shù)檢測器、極譜檢測器等。該類檢測器通常駐將色譜流出液作為化學(xué)電池的一個(gè)組成部分，通過測量電池的某種參數(shù)（如電流、電阻、電量等）進(jìn)行檢出和測定。性質(zhì)進(jìn)行檢測的。利用熱學(xué)原理進(jìn)行檢測的熱學(xué)性質(zhì)檢測器有光聲、熱透鏡和光熱偏轉(zhuǎn)檢測器等，分別利用了光聲光譜和光熱光譜等技術(shù)。激光檢測器的應(yīng)用使靈敏度得到較大的提高，這類檢測器的應(yīng)用仍有待于發(fā)展。4其它分類按信號記錄方式不同可分為積分型和微分型檢測器；按樣品是否變化可分為破壞性和非破壞性檢測器。以上各種檢測器中最常用的液相色譜檢測器依次是紫外檢測器、示差折射檢測器、熒光檢測器和電化學(xué)檢測器等。近年

20、來出現(xiàn)的光散射檢測器是新興的通用型檢測器。近年來發(fā)展迅速的光電二極管陣列檢測器雖然價(jià)格較高，仍不失為一種較理想的檢測器。（二）常用檢測器的主要性能檢測器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。對檢測器的要求是：靈敏度高，重復(fù)性好、線性范圍寬、死體積小以及對溫度和流量的變化不敏感等。評價(jià)檢測器主要考慮以下幾點(diǎn)：噪聲；基線漂移；靈敏度；線性范圍；檢測池的體積。檢測器的線性、靈敏度和柱外效應(yīng)三個(gè)基本特性直接影響色譜定量分析的準(zhǔn)確度、精密度和再現(xiàn)性。檢測器的線性范圍：大部分廠商都聲稱它們的檢測器在一定的濃度范圍內(nèi)是線性響應(yīng)。靈敏度在色譜分析中有三種不同的表示法，有檢測器本身的靈敏度、整個(gè)色譜體系的濃度靈敏度和質(zhì)量

21、靈敏度。對于定量分析來說，最重要的是色譜體系的靈敏度，它還包括色譜柱以及儀器的其它部分的影響。檢測器的靈敏度（CD）,實(shí)際上指檢測限，即通常指相當(dāng)于兩倍噪音信號的溶質(zhì)濃度。而色譜體系的最小檢測限應(yīng)是柱外效應(yīng)10%的最大進(jìn)樣體積所對應(yīng)的二倍于噪音峰高所對應(yīng)的樣品濃度。對于毛細(xì)管氣相色譜和高效液相色譜，檢測器的色譜峰展寬是柱外效應(yīng)的一個(gè)主要來源。一般儀器廠商在設(shè)計(jì)時(shí)已把檢測器的色譜峰展寬減少到最低程度。八十年代初就有各種各樣的液相色譜檢測器問世，最流行的是可變波長檢測器，固定波長檢測器由于最適用于各種芳香化合物檢測，也得到廣泛應(yīng)用。折光指數(shù)檢測器，主要是應(yīng)用于空間排阻色譜在高分子工業(yè)以及食品和飲料

22、工業(yè)中糖的檢測。發(fā)展最迅速的是可變波長光電檢測器和電化學(xué)檢測器。激光檢測器的使用，包括光掃描、熒光、光電離子化、熱光離子化、折光率、光度和聲光檢測器。在離子色譜（IC）中改進(jìn)選擇性和敏感度。液相色譜新的檢測技術(shù)不斷發(fā)展，以適應(yīng)毛細(xì)管和微球柱大小的需要，近幾年正在迅速發(fā)展的液相色譜檢測技術(shù)，有光譜和電化學(xué)檢測器二大領(lǐng)域，也考慮到擴(kuò)大柱后流動試劑檢測領(lǐng)域。在液相色譜中生物化學(xué)柱后反應(yīng)檢測技術(shù)，酶、蛋白質(zhì)和抗體的使用，改進(jìn)檢測器選擇性和敏感度。當(dāng)今面臨控制環(huán)境污染分析和監(jiān)測方面的挑戰(zhàn)，提供分析金屬離子的色譜技術(shù)，液相色譜技術(shù)同特殊元素檢測相結(jié)合，可以分離金屬絡(luò)合物結(jié)構(gòu)，對于大氣、水、殘?jiān)汪~類的金屬

23、離子分析具有重要意義。在近年來興起的DNA分析領(lǐng)域中，已有不少人報(bào)道評價(jià)聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)品的液相色譜分離和檢測中定量分析準(zhǔn)確度和精密度。各種各樣檢測器的研究論文層出不窮，如紫外一可見光度檢測器，拉曼光譜檢測器，熒光檢測器，化學(xué)熒光檢測器，質(zhì)譜檢測器，電化學(xué)檢測器，核磁共振檢測器以及光電二極管陣列檢測器等。近幾年出現(xiàn)的蒸發(fā)激光散射檢測器（FLSD）有希望成為高效液相色譜全新的通用靈敏的質(zhì)量型檢測器。總之，檢測器研究的共同方向均朝著靈敏度高、重現(xiàn)性好、響應(yīng)快、線性范圍寬、適應(yīng)范圍廣、對流動相流量和溫度波動不敏感、死體積小等特性。表8-3檢測器的主要性能性能/檢測器紫外熒光折光安培電導(dǎo)測量參數(shù)吸光度熒

24、光強(qiáng)度折射率電流電導(dǎo)率類型選擇性選擇性通用選擇性選擇性池體積1103203108.5會引起基體硅膠的溶解。pHVl.O，鍵合的硅烷會被水解從柱中洗脫下來。為減少硅膠鍵合相中殘留硅醇基對色譜分離的不良影響，可采用以下措施：（1）利用具有低pH值的流動相抑制硅醇的離解。（2）借助增加（或減?。┝鲃酉嗟膒H值來抑制堿性（或酸性）分析物的離解（3）在流動相中加一種競爭試劑，其可借助封閉硅醇來進(jìn)一步降低峰形拖尾。三甲基胺或烷基胺化合物，還有兩價(jià)金屬陽離子（如Ba2+），都可作為硅醇的競爭試劑。此外硅膠中含有的痕量金屬離子雜質(zhì)也是引起色譜峰形拖尾和損失色譜分離度的來源之一。它們在硅膠表面產(chǎn)生的活性吸附位，

25、比硅膠表面游離的硅醇基大50倍。因此用于制備鍵合相的硅膠應(yīng)使用高純度的產(chǎn)品，其痕量金屬含量應(yīng)低于0.1%，若含量偏高，應(yīng)在進(jìn)行硅烷化鍵合之前，先用鹽酸處理，使金屬含量減少1/3以上，再用EDTA處理硅膠，以進(jìn)一步除去能夠增強(qiáng)殘留硅醇基活性的金屬雜質(zhì)。鍵合相色譜分離的重現(xiàn)性同一種類的鍵合相，因生產(chǎn)廠家不同，或生產(chǎn)批號不同，表現(xiàn)出不同的分離特性。因此鍵合相色譜法不宜作為標(biāo)準(zhǔn)分析法。圖8-27在5種不同型號ODS硅膠化學(xué)鍵合相上7各多環(huán)芳烴混合物的分離鍵合相色譜分離的選擇性圖8-28表示了反相色譜分析中，使用同一種ODS固定相，使用二種極性參數(shù)(P)值相近的不同溶劑組成流動相會得到不同的分析結(jié)果。圖

26、8-28在同一種ODS-硅膠固定相，使用二種具有相近極性參數(shù)(P)值的不同混合溶劑作流動相時(shí)，山梨酸和苯甲酸的分離三、流動相(一)溶劑的選擇性分組在鍵合相色譜中使用的流動相，與液固色譜、液液色譜流動相使用的流動相有相似之處，在第四節(jié)已討論過，第四節(jié)講到常見溶劑的極性參數(shù)P和Xe、xd、xn可查表。這里進(jìn)一步討論溶劑的選擇性分組和提高分離選擇性的具體方法。當(dāng)將每種溶劑的Xe、Xd、Xn值組成一個(gè)三角形坐標(biāo)時(shí)，就可發(fā)現(xiàn)選擇性相似的溶劑分布在三角形平面中的一定區(qū)域內(nèi)，從而構(gòu)成選擇性不同的溶劑分組。圖8-29為溶劑選擇性分組的三角形坐標(biāo)圖。表8-6列出了依據(jù)溶劑選擇性分組的各種有機(jī)化合物的類型。圖8-29溶劑選擇性三角形圖溶劑選擇性分組的三角形坐標(biāo)可知，常用溶劑可分為8個(gè)選擇性不同的特征組，處于同一組中的溶劑具有相似特性。同組溶劑