DNA提取技術(shù)在法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用與進(jìn)展

1、DNA提取技能在法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用與希望【摘要】dna斷定技能在當(dāng)代法醫(yī)物證查驗(yàn)中有著普及的應(yīng)用，其應(yīng)用分子生物學(xué)的要領(lǐng)，對(duì)犯法現(xiàn)場(chǎng)遺留的生物物證所含的dna與犯法疑心人的dna樣本舉行比對(duì)，斷定dna布局是否雷同，從而對(duì)生物物證是否來(lái)自于犯法疑心人作出評(píng)價(jià)。不外大多犯法現(xiàn)場(chǎng)遺留的生物樣本存在著很多倒霉于法醫(yī)提取的因素，好比敗北、變質(zhì)、污染等。本文就現(xiàn)場(chǎng)dna提取純化技能方面來(lái)先容當(dāng)今法醫(yī)學(xué)的技能希望?！娟P(guān)鍵詞】dna提取硅珠磁珠自從20世紀(jì)80年代dna技能問(wèn)世以來(lái)，改變了已往對(duì)生物物證的查驗(yàn)只能“否認(rèn)不克不及“認(rèn)定的汗青。使用dna斷定技能，可以直接“認(rèn)定犯法現(xiàn)場(chǎng)的血跡、精斑、毛發(fā)、唾液斑等生物

2、檢材是否為犯法疑心人所留，從而為案件的偵破、訴訟提供有力的證據(jù)。如今，dna斷定技能在生物物證查驗(yàn)中的應(yīng)用非常普及，在損害、強(qiáng)奸、交通肇事、親子斷定等刑事或民事案件中，現(xiàn)場(chǎng)遺留的血跡、精斑、骨骼、肌肉、毛發(fā)、唾液斑、尿斑、指(趾)甲、汗液指紋等生物物證都是dna斷定的常見(jiàn)檢材，dna斷定結(jié)論是很多刑事案件的緊張證據(jù)之一。眾所周知，要想對(duì)dna舉行斷定，必需得到足量且純潔的dna樣本，dna提取純化技能是法醫(yī)dna查驗(yàn)的第一個(gè)步調(diào)，也是最關(guān)鍵的步調(diào)。從犯法現(xiàn)場(chǎng)提取的血痕或精斑，大概是從疑心人或親緣斷定中提取的血液樣本，這些生物檢材中除了dna外還包羅很多物質(zhì)，在闡發(fā)dna之前，必需將dna同其他

3、物質(zhì)分散開(kāi)來(lái)?？梢哉f(shuō)，可否樂(lè)成舉行dna查驗(yàn)取決于可否從生物檢材中得到高質(zhì)量dna。尤其對(duì)付敗北、變質(zhì)、污染等種種條件下的現(xiàn)場(chǎng)生物檢材，dna的提取質(zhì)量將直接干系到dna查驗(yàn)的成敗。如今法醫(yī)dna實(shí)行室最常見(jiàn)的2種dna提取要領(lǐng)是：酚-氯仿提取法、helex提取法。固然這些要領(lǐng)是被普及應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)檢材，但是不得不成認(rèn)，他們各自都有著不成制止的缺點(diǎn)。酚-氯仿提取法：在dna提取歷程中，涉及到一些損害的化學(xué)物質(zhì)，耗時(shí)。并且有些色素和土壤中能被醇沉的雜質(zhì)不易被去除。同時(shí)，由于操縱中涉及到屢次轉(zhuǎn)移樣本，如許很輕易造成dna喪失，dna提取率低，增長(zhǎng)錯(cuò)誤或污染的幾率。2helex提取法：該要領(lǐng)固然提取d

4、na量較多，但對(duì)微量、污染的檢材結(jié)果欠佳。并且該要領(lǐng)提取的dna中常存在pr擴(kuò)增按捺物，且不宜恒久保存，這些都大概使擴(kuò)增服從落落或擴(kuò)增失敗。1-3由此看到，固然這些要領(lǐng)可以提取出較多的dna樣本，但是由于提取純度較低，含有較多pr按捺物，影響了接下來(lái)的擴(kuò)增歷程，如許也就影響了dna的查驗(yàn)。以是怎樣能提取出較純潔的dna顯得非常的需要。在此，我想先容兩種更為有用的dna提取純化技能。1以二氧化硅為底子的提取純化法這種要領(lǐng)是近幾年才生長(zhǎng)起來(lái)的高通量dna提取純化要領(lǐng)。此中最多見(jiàn)的就是以硅珠或硅膜為底子的提取要領(lǐng)。其根本原理是4-6，核酸在高濃度高離液鹽比方氫氯酸胍、硫氰酸胍、碘化鈉和高氯酸鈉環(huán)境中

5、，通常用的是硫氰酸胍，選擇性地吸附在雷同玻璃珠的硅支持物上。這些高離液鹽可粉碎液態(tài)水中的氫鍵網(wǎng)格，使變性的卵白質(zhì)和核酸比其在折疊或配對(duì)布局的環(huán)境下更具有熱力學(xué)不變性7。由于硫氰酸胍是高性能的卵白質(zhì)變性劑，可以使卵白質(zhì)與dna分散，在硅支持物吸附前高速離心可以將變性的卵白質(zhì)、雜質(zhì)等不容物撤除，吸附后漂洗可以將溶液中的pr按捺物撤除，因此提取的dna比力純，速率快，且不會(huì)受檢材條件影響。實(shí)行表白8，0.5-1l奇怪血液就可以提取出足以樂(lè)成擴(kuò)增的dna。在差異的檢材，如奇怪腦構(gòu)造、皮膚、土壤上血跡、深色布血跡、火場(chǎng)遺體骨松質(zhì)、深色布混淆斑中提取的dna均可樂(lè)成擴(kuò)增，不受檢材種類的影響。同時(shí)，通過(guò)對(duì)h

6、elex法，酚-氯仿法和二氧化硅膜法3種dna提取法在污染嚴(yán)峻混淆斑分型中的應(yīng)用結(jié)果的比力2，創(chuàng)造二氧化硅膜純化技能可以有用去除pr按捺物，提取的dna擴(kuò)增結(jié)果顯著優(yōu)于helex法和酚-氯仿法，具有較高的應(yīng)用代價(jià)。2納米磁珠法納米科技是比年來(lái)國(guó)際上最為活潑的研究范疇之一，獲得了諸多環(huán)球矚目的成績(jī)，尤其是在辦理生物學(xué)、醫(yī)學(xué)困難上展示了遼闊的應(yīng)用遠(yuǎn)景。磁性納米技能是納米技能的一個(gè)分支，對(duì)付dna提取技能而言，磁性納米技能將具有通例提取要領(lǐng)所無(wú)法相比的奇特上風(fēng)，因此將磁性納米技能應(yīng)用在法醫(yī)學(xué)界將有著普及的遠(yuǎn)景。而磁珠提取法就是此中最常見(jiàn)的要領(lǐng)。磁珠的重要制作步調(diào)是如許的9：起首制備5-8n的磁性納米

7、粒子，使其具有很高的磁場(chǎng)相應(yīng)本領(lǐng)和超順磁特性，可以或許通過(guò)改變外磁場(chǎng)實(shí)現(xiàn)納米調(diào)控；然后使用包覆技能，對(duì)磁性納米粒子舉行包覆，為進(jìn)一步修飾成效團(tuán)提供載體，淘汰與生物構(gòu)造的非特異性作用，對(duì)內(nèi)部的磁性納米粒子起到庇護(hù)作用；接著使用外貌化學(xué)修飾技能，毗連可特異地與dna產(chǎn)生作用的成效團(tuán)10，修飾的成效團(tuán)必需具有對(duì)dna可逆吸附的特性，從而實(shí)現(xiàn)操縱dna吸附、解離和淘汰與別的雜質(zhì)非特異性吸附的目的；末了通過(guò)外貌修飾和溶液中離子強(qiáng)度、ph等條件的操縱，使每次操縱均能得到正確數(shù)目dna，包管后續(xù)檢測(cè)闡發(fā)的高樂(lè)成率。磁珠法提取純化dna的原理與硅珠相近11,13，先使用硫氰酸胍等猛烈卵白變性劑，粉碎細(xì)胞膜及核

8、膜卵白，開(kāi)釋dna，并使核酸酶失活；然后參加磁珠通過(guò)外貌的化學(xué)團(tuán)體與dna特異性吸附，而卵白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在容夜里；接著在磁場(chǎng)的作用下，磁性顆粒與液體脫離，接納顆粒；末了再用純水或te洗脫吸附的dna，在溶解液中舉行dna與磁珠的解離，將dna重新溶出。與其他常見(jiàn)提取要領(lǐng)比力，磁珠法有著明顯的上風(fēng)9,12:1納米質(zhì)料具有小尺寸效應(yīng)和外貌效應(yīng)，可以或許用于高效dna提取，滿意微量生物樣本dna提取的要求，實(shí)行表白，縱然是0.5l血仍能得到dna分型，而同樣的血量用helex提取dna上風(fēng)不克不及得到分型，乃至當(dāng)溶液中dna含量?jī)H為100pg時(shí)，dna接納率仍舊到達(dá)90%以上13；2納米質(zhì)料

9、外貌可以或許舉行化學(xué)修飾，從而與dna舉行特異性吸附，去除樣品dna溶液中的pr按捺物質(zhì)，如有機(jī)溶劑、去污劑、金屬離子、染料等；3納米粒子外貌成效團(tuán)數(shù)目可以操縱，得到所提取dna溶液的濃度信息，實(shí)現(xiàn)定量的要求；4磁性納米質(zhì)料可以通過(guò)特別的合成工藝，使其具有超順磁特性，因此可以或許通過(guò)儀器舉行主動(dòng)化操縱，滿意數(shù)據(jù)庫(kù)建立大批量樣本提取的必要，淘汰報(bào)酬因素影響14；5用時(shí)少，操縱簡(jiǎn)樸，有用于大多數(shù)生物檢材。對(duì)付履歷較少的初學(xué)者而言，根據(jù)簡(jiǎn)樸的步伐化操縱，也可以或許得到滿意的dna提取結(jié)果；6代價(jià)低廉，便于普及應(yīng)用。由于納米質(zhì)料合成接納的都是低價(jià)無(wú)機(jī)和有機(jī)質(zhì)料，無(wú)須特別的儀器裝備，使得終極的合成和研發(fā)

10、本錢(qián)都很自制。dna斷定技能作為法醫(yī)斷定的緊張本領(lǐng)，它的科學(xué)性和有用性已得到寬大司法部分和社會(huì)各界的同等成認(rèn)和高度器重。如今運(yùn)用dna技能在刑事案件以及種種案件中舉行查驗(yàn)已經(jīng)是常用本領(lǐng)之一。而以上先容的技能也只是整個(gè)斷定技能的一環(huán)，樣本的網(wǎng)絡(luò)、str分型等一系列步調(diào)的每個(gè)因素都大概影響dna闡發(fā)結(jié)果。不外信賴在科學(xué)技能迅猛生長(zhǎng)的本日，國(guó)表里學(xué)者會(huì)研究出更多更敏捷，更輕便，更經(jīng)濟(jì)的要領(lǐng)，來(lái)未法醫(yī)學(xué)界大概更大的范疇辦事。參考文獻(xiàn)1董林芳,裴黎,余政,彭健雄,馮濤.團(tuán)結(jié)應(yīng)用helex100和磁珠法檢測(cè)霉變皮上衣微量dna1例j.刑事技能.2022;6:68-69.2莫耀南,薛小琦,劉良.3種dna提取法在污染嚴(yán)峻混淆斑分型中的應(yīng)用比力j.中王法醫(yī)學(xué)雜志.2022;23(1):26-28.3alshps,etzgerda,higuhir.helex-100asaediufrsipleextratinfdnafrprbasedtypingfrfrensiaterialj.bitehniques.1991apr;10(4)