魚的急性毒性試驗

1、魚的急性毒性試驗一、實驗?zāi)康暮鸵螅和ㄟ^本試驗，熟悉和掌握魚類急性毒性試驗的設(shè)計、條件、操作步驟，以及試驗結(jié)果的計算、分析和報告等全過程。二、實驗原理：魚類對水環(huán)境的變化反應(yīng)十分靈敏，當(dāng)水體中的污染物達(dá)到一定程度時，就會引起一系列中毒反應(yīng)，例如行為異常、生理功能紊亂、組織細(xì)胞病變直至死亡。在規(guī)定的條件下，使魚接 觸含不同濃度受試物的水溶液，實驗至少進(jìn)行24h,最好以96h為一個實驗周期，在 24h、48h、72h、96h時記錄實驗魚的死亡率，確定魚類死亡50%寸的受試物濃度。魚類毒性試驗在研究水污染及水環(huán)境質(zhì)量中占重要地位。通過魚類急性毒性試驗可以評價受試物僅用于測定化學(xué)物質(zhì)毒性強(qiáng)度、測定水體

2、污染程度、檢查廢水處理的有效成都，也為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、 評價環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供環(huán)境依據(jù)。三、實驗材料：1.實驗魚的選擇和馴養(yǎng)12X6小錦鯉魚 體長7-12cm 體寬3-5cm 體重7-12g不同濃度白苯酚（mg/L） 0、24、48、96、192、3842、實驗儀器設(shè)備（1）實驗容器實驗容器一般用玻璃或其他化學(xué)惰性材質(zhì)制成的水槽。容器體積可以根據(jù)試驗魚的體重確定，通常以每升水中魚的負(fù)荷不得超過2g （最女子為1g）。一些小型魚類幼魚可選擇 500ml或1000ml燒杯為實驗容器。容器的深度必須超過16cm,水體表面積越大越好。同一實驗應(yīng)采用相同規(guī)格和質(zhì)量的容器。為防止魚類跳出容器，可在容

3、器上加上網(wǎng)罩。 實驗容器使用后，必須徹底洗凈，以除去所有毒性殘留物。（2）其他吸光光度計3、實驗用水： 曝氣水四、操作步驟：1、設(shè)置5個濃度組，1個空白對照組，選擇不同濃度的苯酚（mg/L） 0、24、48、96、192、384。每個濃度放入12條小錦鯉魚。采用直接投毒方式，將配制的苯酚溶液直接 倒入水槽中，攪拌均勻。分別分為1、2、3、4、5、6組。染毒后觀察其活動狀況，并精選資料，歡迎下載每隔兩個小時觀察其生長活動、記錄魚死亡數(shù)量。在72h后檢查受試魚的狀況。如果沒有任何肉眼可見的運(yùn)動，如鯉的山東、碰撞尾柄 后無反應(yīng)等，即可判斷該魚已死亡。觀察各處理組魚的狀況，并記錄試驗魚的異常行為（如魚

4、體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力減弱，色素沉積等）試驗結(jié)束時，對照 組的死亡率不得超過 10%2、在連續(xù)觀察72h后，對魚進(jìn)行解剖實驗，觀察魚身體內(nèi)部染毒狀況，將肝臟、腎、 膽分離，計算肝臟與魚體重之比3、提取肝臟酶液、，肝臟稱重，放入研缽，加入少量石英砂，加3mlPBS緩沖液勻漿,轉(zhuǎn)移至離心管，然后用 2mlPBS洗研缽2次，清晰并轉(zhuǎn)入離心管，上清液即為酶的粗提物，進(jìn)行酶促反應(yīng)，在 365nm波長下測量吸光值參比MAXSAMPLEBackground酶液0.30.3PBS32.42.12.7混勻，靜置12minH2O20.60.625攝氏度，避光保存 2060min終止顯色劑5ml 搖勻

5、 5min參比（調(diào)零）AMASASH根據(jù)解剖后的腎重和肝重計算出臟體系數(shù)（臟體系數(shù)=肝臟/體重X 100%；根據(jù)測出的吸光值計算： CATB的活性=（Am+Ash-As）/ （0.1 X 0.3 X 五、實驗報告1、數(shù)據(jù)處理以暴露濃度為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，在計算機(jī)或書概率紙上，繪制暴露濃度對死亡率的曲線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計程度計算出 72h的半致死濃度（LC50）的近似值, 即這兩個濃度的幾何平均值。2、化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級依據(jù)LC50值的大小，可以將化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒五級，如表1-1所示魚起始 LC50 (mg/L)小于111001001000100

6、010000大于10000精選資料，歡迎下載毒性分級劇毒局毒中等毒低毒微毒實驗結(jié)果與分析：(1)試驗中魚的情況投毒時間：2015年11月11日9: 40am1組，對照組，無投毒，集聚于池底角落。沒有死亡2組，投毒，剛開始大多浮于水面，運(yùn)動性加強(qiáng)，過了一會后開始加速運(yùn)動，然后見偶 有劇烈運(yùn)動現(xiàn)象，最后持續(xù)劇烈運(yùn)動。沒有死亡3組，投毒，先是劇烈運(yùn)動，然后開始側(cè)游，之后速度持續(xù)下降，最終沉于出池底，偶爾有運(yùn)動現(xiàn)象。死亡一條，其他大致恢復(fù)正常，聚集在箱底4組，投毒，23min開始劇烈運(yùn)動，然后開始側(cè)游，810min后停下來，然后沉于池底。死亡一條，瀕死一條，其他的大致正常。三點四十，瀕死的魚恢復(fù)正常。

7、5組，投毒，馬上開始劇烈運(yùn)動，然后開始側(cè)游，大概 5min后靜止，沉于池底。一條瀕 死，其他魚偶有發(fā)生側(cè)翻現(xiàn)象，大體正常。三點四十，瀕死魚恢復(fù)正常。6組，投毒，不到1min開始劇烈運(yùn)動，然后速度減緩，開始側(cè)游，5min接近靜止，沉于池底。死亡七條，其他瀕死側(cè)翻的魚有三條大致恢復(fù)正常，兩點五十五，再次死亡兩 條，三條能夠正常緩慢游動并聚集在一起。苯酚濃度對魚的生命活動影響較大，在加入高濃度苯酚溶液的水中，魚死亡較多，低濃 度苯酚溶液水中沒有出現(xiàn)魚的死亡(2)魚的體表特征、臟體系數(shù)及肝臟酶活性影響注：因第6組魚缺少，所以沒有第 6組的實驗結(jié)果1、各組魚解剖前體表特征、組別 描述12345色素沉積無

8、無輕度輕度明顯精選資料，歡迎下載出水無無有有鯉正常正常帶一點深色深色深色鱗片緊密較緊密有輕微脫落有脫落有脫落注：第5組樣本經(jīng)過冷凍保存，無法觀察出水2、魚肝、膽、腎稱重記錄（單位：g）7別 重量鼠 項目i2345肝0.030.060.080.070.04膽0.100.220.240.110.20腎0.040.040.040.040.023、肝臟系數(shù)組別 臟體系數(shù)項目12345精選資料，歡迎下載肝0.33%0.57%0.82%0.79%0.49%膽1.11%2.10%2.45%1.25%2.44%腎0.45%0.38%0.41%0.45%0.24%體重/g8.9610.469.818.828.184、吸光值(365m。以及 CATS的活性(CATS的活性=(Am+Ash-As)/ (0.1m X0.3 X7)_光值A(chǔ)sAshCAT