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1、第十三章分枝桿菌屬 是一類細長略帶彎曲的桿菌，含有分枝菌酸，有分枝生長的趨勢而得名。具有抗酸性，一般不易著色，經(jīng)加溫或延長時間才能著色，著色后能抵抗鹽酸酒精的脫色作用，故又稱抗酸桿菌，歸屬于放線菌科，已鑒定的有70余種。 第一頁，共三十頁。第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌 包括人結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌和田鼠分枝桿菌等，其中前三者對人類致病。人型結(jié)核分枝桿菌感染的發(fā)病率最高。 由于AIDS發(fā)病率呈上升趨勢，而AIDS極易患結(jié)核病，因此更使得結(jié)核病成為危脅人類健康的一個嚴重的全球性公共衛(wèi)生問題。 第二頁，共三十頁。一、臨床意義(一)致病物質(zhì)是莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。 1莢膜有助于粘附，能防止有害物質(zhì)

2、進入結(jié) 核分枝桿菌，還可抑制吞噬體與溶酶體融 合。2. 蛋白質(zhì) 有抗原性，和蠟質(zhì)D結(jié)合后能使 機體發(fā)生超敏反響，并在形成結(jié)核結(jié)節(jié)中 發(fā)揮作用。 第三頁，共三十頁。3脂質(zhì) 毒力與所含的脂質(zhì)，尤其是糖脂更為重要。索狀因子是分枝菌酸和海藻糖結(jié)合的一種糖脂，能損傷細胞線粒體和抑制氧化磷酸化過程，抑制粒細胞的游走，引起慢性肉芽腫。磷脂能促進單核細胞增生，使巨噬細胞轉(zhuǎn)變?yōu)轭惿掀ぜ毎?，從而形成結(jié)節(jié)。第四頁，共三十頁。硫酸腦甘酯是有毒株細胞壁的成分，能抑制溶酶體同吞噬體的結(jié)合，使細菌在細胞內(nèi)長期存活。蠟質(zhì)D：有佐劑作用，激發(fā)機體產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反響。 第五頁，共三十頁。(二)所致疾病 通過呼吸道、消化道和損傷的

3、皮膚等多途徑感染機體，引起多種臟器的結(jié)核病，其中以肺結(jié)核為多見。細菌能夠在巨噬細胞內(nèi)繁殖。為細胞內(nèi)寄生菌。第六頁，共三十頁。 結(jié)核的免疫為有菌免疫或稱傳染性免疫，指機體對細菌再次入侵有免疫力。細胞免疫在抗感染免疫中起重要作用，產(chǎn)生細胞免疫的同時，也產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反響。第七頁，共三十頁。二、微生物特性1.為分枝狀，略帶彎曲的抗酸桿菌，加溫苯胺染料染色后不易被3鹽酸酒精脫色，抗酸性染色法染色后結(jié)核分枝桿菌呈紅色，背景呈藍色。菌體外有莢膜。2.菌體含有脂質(zhì)、多糖和蛋白質(zhì)等成分。與 致病性免疫性有關(guān)。3.細胞壁骨架、蠟質(zhì)D和核酸等均有佐劑作用。 第八頁，共三十頁。4.為專性需氧，35CO2能促進生長。

4、營養(yǎng)要求較高，必須在含血清、卵黃、甘油以及含某些無機鹽類的特殊培養(yǎng)基才能生長良好。最適生長溫度為35，生長緩慢，1418h分裂1次， 25w才出現(xiàn)肉眼可見的如菜把戲粗糙型菌落。 第九頁，共三十頁。5.抵抗力 對理化因素抵抗力較強。耐枯燥，在枯燥的痰內(nèi)生存68個月，對化學(xué)消毒劑的抵抗力較強，在3HCl或6H2SO4中不被殺死，常用于處理有雜菌污染的檢材，對濕熱敏感，6030min可殺死細菌，在7075乙醇中數(shù)分鐘即被殺死。第十頁，共三十頁。三、微生物學(xué)檢驗 1標(biāo)本：清晨第一口痰送檢。無菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關(guān)節(jié)液等盛無菌試管送檢，腦脊液標(biāo)本靜置后，外表有細薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養(yǎng)。采集

5、膿液應(yīng)直接從潰瘍處取膿汁或分泌物。第十一頁，共三十頁。 2直接涂片染色鏡檢：是常用的簡易快速檢查方法。痰涂片要厚，經(jīng)自然枯燥和火焰固定后進行齊-尼抗酸染色，觀察至少100個視野，結(jié)核分枝桿菌抗酸染色后呈紅色，其他細菌和細胞為藍色。結(jié)果應(yīng)報告“找到或未找到抗酸性桿菌，而不能報告“找到結(jié)核分枝桿菌。第十二頁，共三十頁。 3.核酸檢測 用PCR法快速診斷結(jié)核分枝桿菌感染。設(shè)計特異rRNA片段進行擴增，然后用特異的DNA探針與之雜交。特異性與敏感性均大于95。 4.抗PPDIgG的檢測 用ELISA法檢測患者血清中抗PPDIgG，可作為活動性結(jié)核分枝桿菌感染的快速診斷方法，陽性率為8090。第十三頁，

6、共三十頁。5.別離培養(yǎng) 腦脊液、胸腹水等無雜菌污染的標(biāo)本可直接或離心后取沉渣接種等有雜菌污染的標(biāo)本在接種到培養(yǎng)基之前須做適當(dāng)?shù)奶幚恚韵s菌的干擾。 標(biāo)本接種于選擇性固體培養(yǎng)基中，常用羅琴培養(yǎng)基，所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長：37，510CO2培養(yǎng)8周，如果出現(xiàn)枯燥呈顆粒狀、灰白色菌落，涂片染色為抗酸陽性，多數(shù)是結(jié)核分枝桿菌。陰性繼續(xù)培養(yǎng)至12周方可報告。第十四頁，共三十頁。6.鑒定 菌種鑒定可為結(jié)核病和非典型分枝桿菌病的臨床鑒別和防治提供科學(xué)的依據(jù)。(1)PCR反向膜探針雜交EHSA法(PCR雜交梳)：該法是將PCR、分子雜交、酶聯(lián)免疫顯色技術(shù)有機結(jié)合，經(jīng)過兩次特異性雙向選擇，其特異

7、性相互補充和加強，對提高方法的特異性，消除假陽性起決定作用。第十五頁，共三十頁。(2)DNA探針：使用對分枝桿菌rRNA序列特異的DNA探針與分枝桿菌rRNA雜交，由于每個分枝桿菌細胞內(nèi)有10，000個rRNA拷貝，故為雜交提供了放大系統(tǒng)，提高了靈敏度，將熒光素或同位素標(biāo)記在探針上，可鑒定菌種。第十六頁，共三十頁。(3)16s rRNA基因序列測定：由于不同種的分枝桿菌其16srRNA基因序列是不同的，所以可通過測定16s rRNA基因序列鑒定菌種。(4)高效液相色譜(HPLC)檢測：由于不同種的分枝桿菌細胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC檢測分枝菌酸可鑒定菌種，第十七頁，共三十頁。7.藥

8、物敏感性試驗 耐藥株的增多，應(yīng)做藥物敏感性試驗，以指導(dǎo)臨床合理用藥。 將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基上，同時做不含藥物的對照組。經(jīng)過培養(yǎng)，含有藥物的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目是對照組的75以上，那么認為該菌對該藥物濃度為完全耐藥，如無菌落生長那么為敏感。第十八頁，共三十頁。四、結(jié)核菌素試驗(1)原理：舊結(jié)核菌素(OT)，主要成分是結(jié)核分枝桿菌蛋白。將其稀釋10000倍，使每01ml含1u。純蛋白衍生物(PPD)，是用三氯醋酸沉淀結(jié)核菌培養(yǎng)濾液后的純化物。每O00002mg為1U，注入皮內(nèi)后如受試者已感染結(jié)核，那么結(jié)核菌素與致敏淋巴細胞特異性結(jié)合，形成遲發(fā)型超敏反響性炎癥。(2)方法：取

9、5UPPD或OT0.1ml注射于前臂掌側(cè)皮下，經(jīng)4872h。注意局部有無硬結(jié)，不能單獨以紅暈為標(biāo)準(zhǔn)。第十九頁，共三十頁。 (3)結(jié)果分析：陽性注射部位硬結(jié)、紅腫直徑0.51.5cm之間。這說明機體曾感染過結(jié)核，出現(xiàn)超敏反響，但不表示正患結(jié)核病；強陽性 硬結(jié)直徑超過1.5cm以上，說明可能有活動性結(jié)核，應(yīng)進一步檢查；陰性 注射部位有針眼大的紅點或稍有紅腫，硬結(jié)直徑小于0.5cm，說明無結(jié)核感染，但應(yīng)考慮下述情況：如受試者處于原發(fā)感染的早期，或正患有其他傳染病。第二十頁，共三十頁。(4)應(yīng)用：選擇BCG接種對象及測定接種效果，結(jié)核菌素反響陰性者應(yīng)接種BCG；結(jié)核菌素試驗對嬰幼兒可做診斷結(jié)核病之用；

10、在末接種BCG的人群中作結(jié)核分枝桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查；可借用其測定腫瘤病人的細胞免疫功能。第二十一頁，共三十頁。五、動物接種 可用于結(jié)核分枝桿菌的別離和毒力測定：此法敏感可靠，但手續(xù)較繁瑣，不能列為常規(guī)。 常用的豚鼠。在接種后3-4周出現(xiàn)局部淋巴結(jié)腫大，身體消瘦，結(jié)核菌素試驗轉(zhuǎn)為陽性。剖檢時可看到淋巴結(jié)、肝、脾、腎、肺等臟器的典型結(jié)核病變，由病變處可查到抗酸桿菌或經(jīng)培養(yǎng)有結(jié)核分枝桿菌生長。 第二十二頁，共三十頁。第三節(jié) 非典型分枝桿菌 是指結(jié)核和麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌。因具有抗酸性，故又稱非典型抗酸性菌。 廣泛分布于外環(huán)境和人及動物的機體中。已發(fā)現(xiàn)17種以上能引起人類疾病，引起的肺部感染

11、,又難以與結(jié)核分枝桿菌感染區(qū)別，并對常用抗生素和抗結(jié)核藥物耐藥，所以區(qū)分鑒別非典型分枝桿菌具有重要的意義。第二十三頁，共三十頁。、光產(chǎn)色分枝桿菌 特點是在暗處不產(chǎn)生色素，光照1h后能在48h內(nèi)，菌落轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色。對人有致病性的是：1堪薩斯分枝桿菌廣泛分布于水和土壤中， 能引起肺內(nèi)外結(jié)核樣的病變。2海分枝桿菌為水中的腐生菌。通過皮膚微 小創(chuàng)口侵入，引起所謂的“游泳池肉芽腫。3猿分枝桿菌先后從猿和人體別離出此菌。第二十四頁，共三十頁。二、暗產(chǎn)色分枝桿菌有光或無光均能產(chǎn)生色素，呈黃色或橘黃色。對人有致病性的為：1瘰痢分枝桿菌 25-37均可生長，35最 為適宜，45那么不能生長。可引起人淋巴結(jié)

12、炎或肺部感染。2蘇爾加分枝桿菌 37時為暗產(chǎn)色，25 時 為光產(chǎn)色。本菌引起成人肺部的慢性感染。第二十五頁，共三十頁。三、不產(chǎn)色分枝桿菌不能產(chǎn)生色素。對人有致病性的是： 1鳥-胞內(nèi)復(fù)合分枝桿菌(MAC/MAIC) AIDS患 者易感染，對抗結(jié)核藥物不敏感或產(chǎn)生耐 藥。2潰瘍分枝桿菌通過創(chuàng)傷感染，四肢伸側(cè)形 成無痛性潰瘍，緩慢愈合或出現(xiàn)繼發(fā)感染。3蟾分枝桿菌為蟾蜍肉芽腫的病原菌。多引 起老年男性的慢性肺部感染。第二十六頁，共三十頁。四、迅速生長分枝桿菌 在普通培養(yǎng)基上生長速度快，生長溫度為25-45，對人有致病性的是：1偶發(fā)分枝桿菌可引起人局部或肺部感染， 對現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物均有耐藥性。2龜分枝

13、桿菌可引起人的軟組織病變及手 術(shù)后繼發(fā)感染，亦可引起肺部感染。第二十七頁，共三十頁。第四節(jié) 麻風(fēng)分枝桿菌 為麻風(fēng)病的病原菌，麻風(fēng)是一種慢性傳染病，主要表現(xiàn)為皮膚、粘膜和神經(jīng)末梢的損害。晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫。隨病人鼻分泌物、痰、汗液、乳汁、精液或陰道分泌物排出，通過自接接觸或由飛沫傳播，根據(jù)臨床表現(xiàn)、免疫病理變化和細菌檢查結(jié)果等將麻風(fēng)分為瘤型、結(jié)核樣型和界限類綜合征等三種病型。 第二十八頁，共三十頁。 為抗酸桿菌，呈束狀或團狀排列， G+無鞭毛、莢膜和芽胞。用藥后細菌可斷裂為顆粒狀、鏈桿狀等，著色不均勻，叫做不完全菌。 為典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)分枝桿菌存在的細胞胞質(zhì)呈泡沫狀。稱為麻風(fēng)細胞。 尚不能人工培養(yǎng)，微生物檢驗主要靠采集標(biāo)本抗酸染色鏡檢，依形態(tài)學(xué)特征結(jié)合臨床做診斷。用砜類藥物治療。 第二十九頁，共三十