高中生物競賽輔導(dǎo)生物化學(xué)一蛋白質(zhì)

1、高中生物競賽輔導(dǎo)生物化學(xué)一蛋白質(zhì)第1頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四一、什么是蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。第2頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四二、蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性1. 蛋白質(zhì)是生物 體重要組成成分分布廣：所有器官、組織都含有蛋白質(zhì)；細胞的各個部分都含有蛋白質(zhì)。含量高：蛋白質(zhì)是細胞內(nèi)最豐富的有機分子，占人體干重的45，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達80。第3頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四1）作為

2、生物催化劑（酶）2）代謝調(diào)節(jié)作用3）免疫保護作用4）物質(zhì)的轉(zhuǎn)運和存儲5）運動與支持作用6）參與細胞間信息傳遞2. 蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能3. 氧化供能第4頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四蛋 白 質(zhì) 的 分 子 組 成The Molecular Component of Protein第 一 節(jié)第5頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 組成蛋白質(zhì)的元素主要有C、H、O、N和S。 有些蛋白質(zhì)含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個別蛋白質(zhì)還含有碘 。第6頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平

3、均為16。 由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量：100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 ( g % )= 每克樣品含氮克數(shù) 6.251001/16% 蛋白質(zhì)元素組成的特點第7頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四一、氨基酸 組成蛋白質(zhì)的基本單位存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種，且均屬 L-氨基酸（甘氨酸除外）。第8頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式R第9頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四非極性疏水

4、性氨基酸（7）甘丙纈亮異苯脯極性中性氨基酸（8）色絲酪半蛋天谷蘇酸性氨基酸（2）天谷堿性氨基酸（3）賴精組（一）氨基酸的分類* 20種氨基酸的英文名稱、縮寫符號及分類如下:第10頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四甘氨酸 glycine Gly G 5.97丙氨酸 alanine Ala A 6.00纈氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸 leucine Leu L 5.98 異亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48脯氨酸 proline Pro P 6.30非極性疏水性氨基酸目 錄第11頁

5、，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四色氨酸 tryptophan Try W 5.89絲氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸 tyrosine Try Y 5.66 半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 蘇氨酸 threonine Thr T 5.602. 極性中性氨基酸目 錄第12頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷

6、氨酸 glutamic acid Glu E 3.22賴氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸 arginine Arg R 10.76組氨酸 histidine His H 7.593. 酸性氨基酸4. 堿性氨基酸目 錄第13頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四幾種特殊氨基酸 脯氨酸（亞氨基酸）第14頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 半胱氨酸 +胱氨酸二硫鍵-HH第15頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（二）氨基酸的理化性質(zhì)1. 兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。等電點(iso

7、electric point, pI) 在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點。第16頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性離子 陽離子陰離子第17頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四2. 紫外吸收 色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在 280 nm 附近。大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收第18頁，共89頁，20

8、22年，5月20日，16點58分，星期四3. 茚三酮反應(yīng) 氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍紫色化合物，其最大吸收峰在570nm處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關(guān)系，因此可作為氨基酸定量分析方法。第19頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四二、肽* 肽鍵(peptide bond)是由一個氨基酸的-羧基與另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。（一）肽(peptide)第20頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵第21頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四* 肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物

9、。* 兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽* 肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。* 由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。第22頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四N 末端：多肽鏈中有自由氨基的一端C 末端：多肽鏈中有自由羧基的一端多肽鏈有兩端* 多肽鏈(polypeptide chain)是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu)。第23頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四N末端C末端牛核糖核酸酶第24

10、頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（二） 幾種生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH)第25頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四GSH過氧化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH還原酶NADPH+H+ NADP+ 第26頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽 神經(jīng)肽(neuropeptide)2. 多肽類激素及神經(jīng)肽第27頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四三、蛋白質(zhì)的分類 * 根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分 單純蛋白質(zhì)結(jié)合蛋白質(zhì) = 蛋白質(zhì)部分 + 非蛋白質(zhì)

11、部分* 根據(jù)蛋白質(zhì)形狀 纖維狀蛋白質(zhì)球狀蛋白質(zhì)第28頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四蛋 白 質(zhì) 的 分 子 結(jié) 構(gòu)The Molecular Structure of Protein 第 二 節(jié)第29頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括 一級結(jié)構(gòu)(primary structure)二級結(jié)構(gòu)(secondary structure)三級結(jié)構(gòu)(tertiary structure)四級結(jié)構(gòu)(quaternary structure)高級結(jié)構(gòu)第30頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四定義蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指多肽

12、鏈中氨基酸的排列順序。一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)主要的化學(xué)鍵肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。 第31頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。目 錄第32頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四二、蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。定義 主要的化學(xué)鍵： 氫鍵 第33頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（一）肽單元參與肽鍵的6個原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(tra

13、ns)構(gòu)型，此同一平面上的6個原子構(gòu)成了所謂的肽單元 (peptide unit) 。第34頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要形式 -螺旋 ( -helix ) -折疊 ( -pleated sheet ) -轉(zhuǎn)角 ( -turn ) 無規(guī)卷曲 ( random coil ) 第35頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（二） -螺旋目 錄第36頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（三）-折疊第37頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（四）-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲-轉(zhuǎn)角無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確

14、定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)。 第38頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（五）模體在許多蛋白質(zhì)分子中，可發(fā)現(xiàn)二個或三個具有二級結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構(gòu)象，被稱為模體(motif)。第39頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體 鋅指結(jié)構(gòu) 第40頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（六）氨基酸殘基的側(cè)鏈對二級結(jié)構(gòu)形成的影響蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是以一級結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成-螺旋或-折疊，它就會出現(xiàn)相應(yīng)的二級結(jié)構(gòu)。 第41頁，共89頁，2022年，5月20日，16點

15、58分，星期四三、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 Van der Waals力等。 主要的化學(xué)鍵整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。（一） 定義 第42頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四目 錄第43頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 肌紅蛋白 (Mb) N 端 C端第44頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)域 （二）結(jié)構(gòu)域大分子蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)?？煞指畛梢粋€或數(shù)個球狀或纖維狀的區(qū)域，折疊得較為緊密，各行使其功能，稱為結(jié)構(gòu)域(domain) 。第45頁，共89

16、頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（三）分子伴侶分子伴侶(chaperon)通過提供一個保護環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級結(jié)構(gòu)。* 分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合隨后松開，如此重復(fù)進行可防止錯誤的聚集發(fā)生，使肽鏈正確折疊。 * 分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結(jié)合，使之解聚后，再誘導(dǎo)其正確折疊。 * 分子伴侶在蛋白質(zhì)分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。 第46頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四亞基之間的結(jié)合力主要是疏水作用，其次是氫鍵和離子鍵。四、蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋

17、白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結(jié)構(gòu)，稱為蛋白質(zhì)的亞基 (subunit)。第47頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四血紅蛋白的四級結(jié)構(gòu) 第48頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系The Relation of Structure and Function of Protein第 三 節(jié)第49頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（一）一級結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ) 一、蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 牛核糖核酸酶的一級結(jié)構(gòu)二硫鍵第50頁，共89頁，2022年，5月20日，

18、16點58分，星期四 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 -巰基乙醇 去除尿素、-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性第51頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（二）一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系例：鐮刀形紅細胞貧血N-val his leu thr pro glu glu C(146) HbS 肽鏈HbA 肽 鏈N-val his leu thr pro val glu C(146) 這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病，稱為“分子病”。第52頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu) 二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 目 錄第53頁，共89頁，202

19、2年，5月20日，16點58分，星期四Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數(shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧 第54頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線第55頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四* 協(xié)同效應(yīng)(cooperativity) 一個寡聚體蛋白質(zhì)的一個亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。 如果是促進作用則稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativit

20、y)如果是抑制作用則稱為負協(xié)同效應(yīng) (negative cooperativity)第56頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四第57頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四O2血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變小，就能進入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。第58頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。第59頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病 蛋白質(zhì)構(gòu)象疾?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一

21、級結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導(dǎo)致疾病發(fā)生。第60頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機理：有些蛋白質(zhì)錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。第61頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白

22、質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為-折疊的PrPsc，從而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折疊正常瘋牛病第62頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分離純化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein第63頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（一）蛋白質(zhì)的兩性電離 一、理化性質(zhì) 蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。 * 蛋白質(zhì)的等電點( isoe

23、lectric point, pI) 當?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時，蛋白質(zhì)解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點。第64頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至100萬之巨，其分子的直徑可達1100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。 * 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素顆粒表面電荷水化膜第65頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)水化膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水

24、作用溶液中蛋白質(zhì)的聚沉第66頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（三）蛋白質(zhì)的變性、沉淀和凝固 * 蛋白質(zhì)的變性(denaturation)在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。第67頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 造成變性的因素如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。 變性的本質(zhì) 破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。第68頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來

25、消毒及滅菌。此外, 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。 第69頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation) 。第70頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 -巰基乙醇 去除尿素、-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性第71頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四* 蛋白質(zhì)沉淀在一定條件下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，有時蛋

26、白質(zhì)發(fā)生沉淀，但并不變性。 * 蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation) 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 第72頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（四）蛋白質(zhì)的紫外吸收由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測定。第73頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（五）蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction) 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。 雙縮脲反應(yīng)(

27、biuret reaction)蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。第74頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四二、蛋白質(zhì)的分離和純化（一）透析及超濾法* 透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。* 超濾法 應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。第75頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（二）丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀 *使用丙酮沉淀時，必須在04低溫下進行，丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體

28、積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 *鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。 第76頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四* 免疫沉淀法：將某一純化蛋白質(zhì)免疫動物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識別相應(yīng)的抗原蛋白，并形成抗原抗體復(fù)合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。 第77頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（三）電泳蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通

29、過蛋白質(zhì)在電場中泳動而達到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù), 稱為電泳(elctrophoresis) 。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。 第78頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四幾種重要的蛋白質(zhì)電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質(zhì)分子量的測定。*等電聚焦電泳，通過蛋白質(zhì)等電點的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。*雙向凝膠電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。第79頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四（四）層析層析(chromatography)分離蛋白質(zhì)的原理待分離蛋白質(zhì)溶液（流動相）經(jīng)過一個固態(tài)物質(zhì)（固定相）時，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達到分離蛋白質(zhì)的目的 。第80頁，共89頁，2022年，5月20日，16點58分，星期四蛋白質(zhì)分離常用的層析方法* 離子交換層析：利用各蛋