DB13-T1384-1-2011飼料中4種β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的測(cè)定

1、ICS 65.120B 46DB13河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T 1384.12011飼料中 4 種內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的測(cè)定Determination of four kinds of -lactams in feed2011 - 05 - 10 發(fā)布2011 - 05 - 20 實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā) 布DB13/T 1384.12011I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北大學(xué)、河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人

2、：張巖、李揮、呂品、叢斌、盧曉宇、張敬軒、沈磊、米振杰、賈茜、張宏、楊立學(xué)、李志平、高振同、武英利。 PAGE 6飼料中 4 種內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的測(cè)定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林 4 種-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限：青霉素G、青霉素V為1.0 g/kg；氨芐西林、阿莫西林為2.0 g/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

3、GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。原理試樣中的 4 種 -內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留，用 Oasis HLB 或相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈鶅艋?，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑和材料除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。乙酸：優(yōu)級(jí)純。乙腈+水（13）：量取 25 mL 乙腈與 75 mL 水混勻。Oasis HLB 固相萃取柱或相當(dāng)者：500 mg，6 mL。使用前分別用 5 mL 甲醇和 10 mL 水預(yù)處理， 保持柱體濕潤(rùn)。青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林：純度99。青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)

4、儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用乙腈配制成濃度為 1.0 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。儲(chǔ)備液貯存在-18冰柜中。青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要吸取適量青霉素 G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用空白樣品稀釋成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。儀器液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。漩渦混勻器。固相萃取真空裝置。微量進(jìn)樣器：25 L，100 L?？潭葮悠饭埽? mL，精度為 0.1 mL。真空泵：真空度應(yīng)達(dá)到 80 kPa。pH 計(jì)：測(cè)量精度 0.01。氮吹儀。高速離心機(jī)。

5、測(cè)定步驟試樣溶液的制備稱(chēng)取 5 g 試樣（精確到 0.01 g）置于 100 mL 離心管中，加人 45 mL 去離子水，于漩渦混勻器上快速混合 5 min，以 5 000 r/min 離心 10 min，將上清液移至 Oasis HLB 柱中，以小于或等于 3 mL/min 的流速通過(guò)固相萃取柱后，用 5 mL 水洗柱，棄去全部流出液。在 65 kPa 的負(fù)壓下，減壓抽干 20 min，最后用 3 mL 甲醇洗脫，收集洗脫液于刻度樣品管中，于 40水浴中用氮吹儀吹干，用乙腈定容至 1 mL， 搖勻后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。測(cè)定液相色譜條件色譜柱：SunFireTM C18 3.5 m，

6、150 mm2.1 mm 或相當(dāng)者。流動(dòng)相及流速見(jiàn)表 1。柱溫：30。 進(jìn)樣量：20 L。表1液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間/min流速/（L /min）水（含 0.4乙酸）/（）乙腈/（）0.0020060.040. 015.0020035.065. 015.0120060.040. 025.0120060.040. 0質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI）。掃描方式：正離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。定性離子對(duì)、定量離子對(duì)，見(jiàn)表 2。其余質(zhì)譜條件見(jiàn)附錄 A。表2定性離子對(duì)與定量離子對(duì)青霉素G青霉素V氨芐西林阿莫西林定性離子對(duì)（m/z）335/160335/176351/160351/192350

7、/192350/160366/114366/208定量離子對(duì)（m/z）335/160351/160350/160366/208液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定定性測(cè)定在相同試驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物質(zhì)與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)物質(zhì)的保留時(shí)間偏差在2.5之內(nèi)； 樣品色譜圖中各定性離子對(duì)相對(duì)豐度與濃度接近的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖中離子相對(duì)豐度相比，若偏差不超過(guò)表 3 規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在該殘留。表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度502050102010允許的最大偏差20253050定量測(cè)定在儀器最佳工作條件下，用青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配成的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分

8、別進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林的總離子流圖與保留時(shí)間見(jiàn)附錄 B。平行試驗(yàn)按上述步驟，對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定?？瞻自囼?yàn)除不稱(chēng)取試樣外均按上述分析步驟進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到試樣中相應(yīng)的 -內(nèi)酰胺類(lèi)藥物濃度后，結(jié)果按公式(1)計(jì)算：c V 1000式中：X m 1000（1）X試樣中被測(cè)組分殘留量，單位為微克每千克（g/kg）。c從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測(cè)組分

9、的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。 V試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）。m最終試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。注：計(jì)算結(jié)果需將空白值扣除。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15。附錄A（資料性附錄） 參考質(zhì)譜條件A.1電噴霧電壓：5 500 V。A.霧化氣壓力：0.055 MPa。A.氣簾氣壓力：0.079 MPa。A.輔助氣流速：6 L/min。A.離子源溫度：400。A.去簇電壓（DP），聚焦電壓（FP）、碰撞能量（CE）及碰撞室出口電壓（CXP），見(jiàn)表A.1。表A.1去簇電壓，聚焦電壓、碰撞能量及碰撞室出口電壓名稱(chēng)定性離子對(duì)（m/z）定量離子對(duì)（m/z）碰撞能量v去簇電壓v聚焦電壓v碰撞室出口電壓/v青霉素G335/160335/176335/16020234520011青霉素V351/160351/192351/16020154020011氨芐西林350/192350