血清α-淀粉酶（AMS）測定

1、血清-淀粉酶（AMS）測定1. 實(shí)驗(yàn)原理AMS測定采用酶動態(tài)比色測定法。所用底物為4,6-亞乙基-,D-麥芽七糖苷-對硝基苯酚（EPSG7）。樣品中淀粉酶分解底物EPSG7，生成對硝基苯酚（PNP），在405nm處比色，吸光度的上升速率與樣品中-淀粉酶的活力成正比。 2 亞乙基G5 2 G2PNP5EPS-G75H2O -淀粉酶 2 亞乙基G4 2 G3PNP 亞乙基G3 G4PNP-葡萄糖苷酶2G2PNP2G3PNPG4PNP14H2O 5PNP14G（反應(yīng)式中PNP：對硝基苯酚；G：葡萄糖）2. 標(biāo)本采集與處理：2.1 病人準(zhǔn)備：無特殊要求。2.2 標(biāo)本類型：血清、肝素或EDTA處理的血漿

2、、尿液。2.3 血清分離 血清或血漿應(yīng)在收集后盡快分離出來。未酸化的尿液，隨機(jī)或限時收取。3. 標(biāo)本存放：不要用嘴吸取標(biāo)本或?qū)?biāo)本吹氣，以免唾液污染標(biāo)本唾液中的淀粉酶使結(jié)果升高。血清淀粉酶在2025穩(wěn)定一個星期，避免微生物降解作用；在28時穩(wěn)定一個月。尿液樣品在28可穩(wěn)定10天，在1525可穩(wěn)定2天。對于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的穩(wěn)定性減弱，因此，儲存前pH值應(yīng)調(diào)至大約7.0。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下運(yùn)輸5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血的不能做測定。6. 實(shí)驗(yàn)材料：6.1 AMS測定試劑盒 （試劑1 664 ml 試劑2 616 ml）6.1.1 試劑組成試劑1：GOODS 緩沖液pH

3、7.1 100mmol/L氯化鈉 50mmol/L氯化鎂 10mmol/L-葡萄糖苷酶 23KU/L試劑2：EPSG7 3mmol/L6.1.2 試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3 試劑穩(wěn)定性與貯存：原試劑避光保存于28，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑有效期為24個月。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有濁度時，表明有細(xì)菌污染則試劑不能使用。6.1.5注意事項(xiàng)：唾液和皮膚中含有-淀粉酶，應(yīng)避免用嘴吸取試劑，避免皮膚接觸試劑。試劑中含疊氮鈉，避免接觸皮膚及粘膜。6.2 校準(zhǔn)品：參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件6.3 質(zhì)控品：參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件7. 儀器：奧林巴斯AU2700生化

4、分析儀8. 操作步驟8.1 項(xiàng)目基本參數(shù)：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU2700生化分析儀項(xiàng)目測定參數(shù).SOP文件8.2 儀器操作步驟：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU2700生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9. 檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10. 質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11. 計算方法：無需手工計算，在37每個標(biāo)本的結(jié)果儀器自動以U/L報告。手工測定計算方法為：-淀粉酶(U/L) = A/ minF 反應(yīng)總體積（ml）1000 F = 毫摩爾消光系數(shù)樣品

5、體積（ml）比色杯光徑注：1000IU/ml到U/L的轉(zhuǎn)換系數(shù)PNP在405 nm處的毫摩爾消光系數(shù)：9.9012. 參考值范圍血清或血漿 16-108U/L隨機(jī)尿液 100-1200U/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13. 臨床意義：-淀粉酶是將淀粉降解為麥芽糖的水解酶類。人體內(nèi)的-淀粉酶來源于多種器官：胰淀粉酶由胰腺產(chǎn)生并釋放到腸道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由腎臟清除并經(jīng)尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。檢測血清、尿液中-淀粉酶活力主要用于診斷胰腺功能紊亂和監(jiān)測并

6、發(fā)癥的發(fā)展。急性胰腺炎發(fā)作病人在腹痛開始后的幾小時內(nèi)，血液淀粉酶活力升高，約12小時后達(dá)到峰值；并至少在5天后活力回復(fù)至參考范圍內(nèi)。由于多種非胰腺疾病如腮腺炎、腎功能不全等也會引起-淀粉酶的升高，所以-淀粉酶對胰腺功能紊亂的診斷特異性不高。因此，為了確診急性胰腺炎，還應(yīng)進(jìn)行脂肪酶檢測14. 操作性能14.1 線性范圍：32400U/L14.2 精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法7，AU2700批內(nèi)不精密度小于5%，總不精密度小于10%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)批間精密度n=20(U/L)s(U/L

7、)CV(%)樣品11842.001.08樣品11801.821.01樣品23982.670.67樣品23833.740.97樣品38414.960.59樣品38177.480.9214.3 方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時對100個樣品進(jìn)行AMY活力檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計結(jié)果如下：y=1.00 x+1.00U/L；r=0.998。14.4 靈敏度：本試劑的檢測限為3U/L。14.5 病人結(jié)果可報告范圍：32400U/L15. 超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為2400U/L。如樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用0.9氯化鈉溶液作1：10稀釋，重新測定，結(jié)果

8、乘以11。16. 病危報警值的處理 當(dāng)血清AMS300U/L時，在經(jīng)過復(fù)查等確認(rèn)手段處理后應(yīng)及時向臨床主管醫(yī)生匯報。17. 方法局限性17.1 本法線性上限為2400U/L。如樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用0.9氯化鈉溶液作1：10稀釋，重新測定，結(jié)果乘以11。17.2 干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，膽紅素濃度684mol/L，甘油三酯濃度11.3mmol/L時沒有觀察到干擾。即使極低濃度的血紅蛋白都會對檢測產(chǎn)生干擾。18. 補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19. 參考文獻(xiàn)：1.Friedman,R.B. and Young,D.S.Effects

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