獸醫(yī)微生物學

1、獸醫(yī)微生物學獸醫(yī)微生物學 (多媒體教學課件)課件002獸醫(yī)微生物學教學課件3緒言 共六部分，介紹微生物與微生物學的概念，微生物學發(fā)展簡史，微生物學理論與技術成就及應用，獸醫(yī)微生物學的地位、任務與貢獻。細菌總論 共七章，介紹細菌的形態(tài)、構造、生理，消毒與滅菌，細菌生態(tài)、致病機理、遺傳變異，細菌分類與命名等。免疫基礎 共七章，介紹抗原抗體，免疫系統(tǒng)，抗感染免疫，變態(tài)反應，免疫調節(jié)，免疫技術及應用等。細菌各論 共十二章，介紹各屬重要病原細菌的形態(tài)、生化特性、致病性、微生物學診斷和免疫防治等。真菌 共二章，介紹真菌的分類、形態(tài)、生化及致病特性，真菌病的診斷與防治等。病毒 共十四章，介紹病毒的形態(tài)、構造

2、、繁殖、遺傳、培養(yǎng)，病毒的致病性。各科屬重要病毒形態(tài)、生化及致病特性，微生物學診斷和防治等。實驗 共十多個，顯微鏡油鏡的使用，細菌形態(tài)及構造觀察，細菌抹片制備及染色，培養(yǎng)基的制備，細菌的分離培養(yǎng)、生長表現觀察、生化試驗、藥敏試驗，沉淀反應和凝集反應，重要病原菌的認識，真菌與病毒培養(yǎng)測定等。內容簡介課件002獸醫(yī)微生物學教學課件4第十五章 革蘭氏陽性球菌第十六章 腸桿菌科第十七章 弧菌科第十八章 巴氏桿菌科及相關屬第十九章 革蘭氏陰性需氧桿菌第二十章 革蘭氏陰性無芽孢微需氧和厭氧菌第二十一章 革蘭氏陽性無芽孢桿菌第二十二章 革蘭氏陽性產芽孢桿菌第二十三章 分支桿菌及相似屬第二十四章 螺旋體第二十

3、五章 霉形體第二十六章 立克次體及衣原體第三篇細菌學各論課件002獸醫(yī)微生物學教學課件5第二十二章 革蘭氏陽性產芽孢桿菌第一節(jié) 芽孢桿菌屬第二節(jié) 梭菌屬第三篇課件002獸醫(yī)微生物學教學課件6第一節(jié) 芽孢桿菌屬炭疽芽孢桿菌 炭疽芽孢桿菌又稱炭疽桿菌，是引起人類、各種家畜和野生動物炭疽的病原，在獸醫(yī)學和醫(yī)學上均占有相當重要的地位。一、形態(tài)及染色特性 本菌為革蘭氏陽性大桿菌，。無鞭毛，不運動。芽孢橢圓形，位于菌體中央，芽孢囊不大于菌體?？尚纬汕v膜。 在動物組織和血液中，此菌單在或呈短鏈，菌體直，菌端平截，呈竹節(jié)狀，圍繞以豐厚的莢膜。莢膜具有較強的抗腐敗能力，當菌體因腐敗而消失后，仍有殘留莢膜，稱為“

4、菌影”。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件7動物體內的炭疽桿菌只有當暴露接觸空氣中的氧氣之后，方能形成芽孢。 在培養(yǎng)基中，此菌常形成長鏈，并于培養(yǎng)18-24h后開始形成芽孢。在普通培養(yǎng)基中不形成莢膜，但若在血液、血清瓊脂上或在碳酸氫鈉瓊脂上，于10-20CO2環(huán)境中培養(yǎng)則形成莢膜。二、培養(yǎng)特性 此菌為需氧菌，最適溫度30-37。最適pH為。營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基中即能生長良好。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件8 在普通瓊脂上形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥、邊緣呈卷發(fā)狀的粗糙(R)型菌落(圖22-1)，無毒或弱毒菌株形成光滑(S)型菌落。在血瓊脂上一般不溶血。 于普通肉湯中培養(yǎng)

5、后，上部液體清朗透明，液面無菌膜或菌環(huán)，管底有白色絮狀沉淀，輕搖不消散。 在含青霉素0.51U/ml的培養(yǎng)基中，細胞壁肽聚糖合成抑制，形成原生質體串，稱為“串珠反應”。若青霉素加至10IU/ml，則完全不能生長或輕微生長。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件9三、抵抗力 本菌繁殖體的抵抗力不強，6030-60min即可殺死。常用消毒劑均能將其殺死，對青霉素等多種抗生素高度敏感，可用于臨床治療。在未解剖的尸體中，細菌可隨腐敗而迅速死亡。 芽孢的抵抗力特別強，在干燥狀態(tài)下可長期存活。需經煮沸15-25 min，121 滅菌5-10min，或160 干熱滅菌1h方被殺死。干燥保存40年以上的炭疽芽

6、孢仍有活力。炭疽芽孢對碘特別敏感，0.04碘液10 min即將其破壞，過氧乙酸、環(huán)氧乙烷、次氯酸鈉等效果較好，可用于皮毛等消毒。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件10四、抗原結構 已知本菌有莢膜抗原、菌體抗原、保護性抗原及芽孢抗原4種主要抗原成分。 莢膜抗原 僅見于有毒菌株，與毒力有關，是一種半抗原，無保護作用，可用于血清學鑒定。 菌體抗原 有兩種，一種是存在于本菌細胞壁及菌體內的半抗原，為多糖成分。與細菌毒力無關，但性質穩(wěn)定，經腐敗、加熱抗原性不被破壞。Ascoli反應，加熱處理抗原依據在此。 保護性抗原 是一種胞外蛋白質抗原成分，為炭疽毒素的組成成分之一，具有免疫原性，能使機體產生抗本

7、本菌感染的保護力。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件11 芽孢抗原 是芽孢的外膜層含有的抗原決定簇，它與皮質一起組成炭疽芽孢的特異性抗原，具有免疫原性和血清學診斷價值。五、致病性 本菌可引致各種家畜、野獸和人類的炭疽，牛、綿羊、鹿等易感性最強，馬、駝、豬、山羊等次之，犬、貓、食肉獸等則有相當大的抵抗力，禽類一般不感染。 通過消化道傳染，但也可經呼吸道及皮膚創(chuàng)傷或通過吸血昆蟲傳播。食草動物炭疽常表現為急性敗血癥。豬炭疽多表現為慢性的咽部局限感染，犬、貓和食肉獸則多表現為腸炭疽。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件12 人類對炭疽桿菌的易感性介于食草動物與豬之間，經消化道、呼吸道或皮膚創(chuàng)傷感

8、染而發(fā)生腸炭疽、肺炭疽或皮膚炭疽。 此菌毒力主要與莢膜和毒素有關。莢膜抗吞噬，使易于擴散，引起感染乃至敗血癥。炭疽桿菌的毒素稱為炭疽毒素，包括水腫毒素及致死毒素兩種。六、微生物學診斷 疑似炭疽的病畜尸體嚴禁剖檢，只能自耳根部采取血液，必要時可切開肋間采取脾臟。皮膚炭疽可采取病灶水腫液或滲出物，腸炭疽可采取糞便。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件131. 細菌學檢查 病料涂片以堿性美藍、瑞氏染色法或姬姆薩染色法染色鏡檢，如發(fā)現有莢膜竹節(jié)狀大桿菌，即可作出初步診斷。細菌分離可用普通瓊脂或血瓊脂平板。2. 血清學檢查 有多種血清學方法，多以已知抗體來檢查被檢的抗原。Ascoli氏沉淀反應 是用加

9、熱抽提待檢炭疽菌多糖抗原與已知抗體進行的沉淀試驗。適用于各種病料、皮張、嚴重腐敗污染尸體材料，方法簡便，反應清晰，故應用廣泛。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件14 間接血凝試驗 將炭疽抗血清吸附于炭粉或乳膠，制成炭粉診斷血清或乳膠診斷血清。檢查被檢樣品中是否含有炭疽芽孢。 協(xié)同凝集試驗 可快速檢測炭疽桿菌或病料中的可溶性抗原。 串珠熒光抗體檢查 將串珠試驗與熒光抗體法結合起來。 瓊脂擴散試驗、酶標葡萄球菌A蛋白間接染色法、熒光抗體間接染色法等。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件15七、免疫防治 炭疽痊愈動物可獲得堅強的免疫，再次感染者很少。抗炭疽血清也可用于治療和緊急預防，我國目前應

10、用的菌苗有兩種。1. 第號炭疽芽孢苗 此菌苗系將培養(yǎng)產生的炭疽芽孢，用30甘油蒸餾水混懸制成，有效期2年。適用牛、馬、驢、騾、駱駝、綿羊、山羊和豬，一般不引起接種反應。注射后14d即可產生堅強免度力，免疫期1年。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件162. 無毒炭疽芽孢苗 其殘余毒力較第號炭疽芽孢苗者強，可殺死小鼠及部分豚鼠，有效期2年。適用于牛、馬、驢、騾、綿羊和豬，免疫期1年。但是必須注意，此菌苗對山羊反應強烈，可引起嚴重局部反應，有的甚至發(fā)生死亡，故禁用于山羊。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件17第二節(jié) 梭菌屬 菌體呈桿狀、厭氧呼吸、不還原硫酸鹽成硫化物，這3項特性可與其他革蘭氏

11、陽性產芽孢桿菌相區(qū)別。一、屬的特征 菌體桿狀，兩端鈍圓或尖銳，常單在，革蘭氏染色陽性?？尚纬陕褕A形或圓形的芽孢，常使菌體膨大。由于芽孢的形狀和位置不同，芽孢體可表現為不同的形狀。當芽孢位于菌體中央而膨大時，則芽孢體形如梭狀，并非梭菌屬的細菌均為梭形。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件18二、梭菌分布 梭菌在自然界分布廣泛，常見于土壤、污水、腐爛的動植物，人和其他脊椎動物的腸道、人與動物的傷口及軟組織感染灶。三、病原梭菌及梭菌病的診斷原則 本屬有80多種，多為非病原菌，常見的致病菌約11種，多為人獸共患病病原(表22-4)。病原梭菌通常均能產生外毒素，其毒力強。由梭菌引起動勿的疾病，按性質和

12、癥狀可大致分為5類。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件19第22章1. 氣腫疽與惡性水腫 兩病皆為急性敗血性傳染病，而且均有氣性水腫的癥狀特征，在臨床上極為相似，應注意鑒別。氣腫疽病原為氣腫疽梭菌，主要通過消化道感染。惡性水腫由刨傷感染引起，其病原復雜多樣，在動物主要是腐敗梭菌、在人主要是A型產氣莢膜梭菌，此外還可能是A型諾維梭菌或其他，也可是兩種以上梭菌的混合感染。兩病的微生物學診斷主要衣靠病原菌檢查。課件002獸醫(yī)微生物學教學課件20第22章2. 快疫與類快疫 是一類病程極短的急性致死性傳染病，包括羊快疫、羊猝狙(ju)、腸毒血癥、黑疫及細菌性血紅素尿，在臨床上有許多相似之處，本質均為

13、毒血癥。 羊猝狙和腸毒血癥的病原為產氣莢膜梭菌，系在腸道內產生毒素，細菌不一定侵人體內，故微生物學診斷主要依靠腸內容物的毒素檢查。 羊快疫系腐敗梭菌經消化道感染所致，病菌雖最初在腸道內產生毒素，但其后則侵人體內造成敗血癥，故微生物學診斷為依靠病原菌檢查。課件002獸醫(yī)微生物學教學課件21第22章 黑疫的病原為B型諾維梭菌，細菌性血紅素尿的病原為溶血梭菌，二者均主要存在于肝臟，因肝組織損害，細菌乘機繁殖，產生毒素而引起發(fā)生。微生物學診斷主要依靠病原菌檢查，但也可檢查毒素。3. 痢疾與腸炎 是由產氣莢膜梭菌在腸道內產生毒素引起，包括羔羊痢疾、犢牛痢疾和人、禽壞死性腸炎，細菌不一定侵入體內，微生物學

14、診斷亦主要依靠腸內容物的毒素檢查。課件002獸醫(yī)微生物學教學課件22第22章4. 食物中毒 包括人畜肉毒中毒癥與人產氣莢膜梭菌食物中毒，都是由于病原菌在食物或飼料中生長繁殖，產生毒素被食人而致病。肉毒中毒癥的微生物學診斷主要檢測肉毒毒素，其次是細菌檢查。產氣莢膜梭菌食物中毒則須依靠由可疑食物分離細菌，并測定其毒素產生能力。5. 破傷風 系破傷風梭菌經創(chuàng)傷感染，在感染部位發(fā)育繁殖，產生毒素而引起疾?。ǘ狙Y）。此病癥狀極其特征，通常不需微生物學診斷。課件002獸醫(yī)微生物學教學課件23第22章四、分離鑒定 梭菌大多專性厭氧，培養(yǎng)須采用厭氧培養(yǎng)法。諾維梭菌、溶血梭菌等厭氧要求十分苛刻，所用培養(yǎng)基必須

15、新鮮制備或保存于厭氧環(huán)境之中。若在空氣環(huán)境中放置超過數小時，其中某些物質轉化為氧化型，雖再作厭氧培養(yǎng)，細菌亦不生長。這些細菌對氧極為敏感，僅在空氣中暴露20-30min即遭抑制而不再生長。因此劃線接種后應立即厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)物應迅速移植，不能久置于空氣之中。 課件002獸醫(yī)微生物學教學課件24 污染材料分得純培養(yǎng)，可根據梭菌芽孢耐熱性較強的特點，先經80 加熱20min以殺死不耐熱的細菌，然后再作分離培養(yǎng)。 腐敗梭菌、產氣莢膜梭菌易于死后侵入，諾維梭菌、溶血梭菌等存在于正常動物體中，由動物體內分出梭菌，并不能肯定是病原，應結合流行病學、病變及微生物學檢查。此時，細菌毒力測定極為重要。第22章課件

16、002獸醫(yī)微生物學教學課件25五、產氣莢膜梭菌 本菌舊名魏氏梭菌或產氣莢膜桿菌。在自然界分節(jié)極廣，可見于土壤、污水、飼料、食物、糞便以及人畜腸道等中，在一定條件下，也可引起多種嚴重疾病。1. 形態(tài)及染色特征 菌體直桿狀，兩端鈍圓，單在，革蘭氏陽性。芽孢大圓，位于菌體中央或近端，使菌體膨脹，但在一般條件下罕見形成芽孢。多數菌株可形成莢膜。2. 致病性 本菌致病作用主要在于它所產生的毒素。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件26 A型菌主要是引起人氣性壞疽和食物中毒，也引起動物氣性壞疽，還可引起牛、羔羊、新生羊駝、野山羊、馴鹿、仔豬等腸毒血癥；B型菌主要引起羔羊痢疾，還可引起駒、犢牛、羔羊、綿羊

17、和山羊的腸毒血癥或壞死性腸炎；C型菌主要是綿羊猝狙的病原，也能引起羔羊、犢牛、仔豬、綿羊的腸毒血癥和壞死性腸炎以及人的壞死性腸炎；D型菌引起羔羊、綿羊、山羊、牛的腸毒血癥；E型菌可致犢牛、羔羊腸毒血癥。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件273. 微生物學診斷 本菌A型所致氣性壞疽及人食物中毒的微生物學診斷，主要依靠細菌分離鑒定。其余各型所致的各種疾病，均系細菌在腸道內產生毒素所致，因止從病料中檢出該菌，并不能說明它就是病原。所以細菌學檢查只有當分離到毒力強大的此菌才具有一定的參考意義。 鑒定本菌要點：厭氧生長、菌落整齊、生長快、革蘭氏陽性粗干菌、不運動，有雙層溶血環(huán)，引起牛奶暴烈發(fā)酵，胸肌

18、注射鴿越夜死亡，胸肌涂片可見有莢膜的菌體。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件28 有效微生物學診斷方法是腸內容物毒素檢查。其方法為取回腸內容物，加適量生理鹽水，離心取上清液分兩分，一份不加熱，一份加熱(60C30min)，分別靜脈注射家兔(1-3m1)或小鼠(0.1-0.3m1)。如有毒素存在，不加熱組動物常于數分鐘至十數小時內死亡，而加熱組動物不死亡。4. 免疫防治 預防羔羊痢疾、猝狙、腸毒血癥以及仔豬腸毒血癥等，可用三聯菌苗或五聯菌苗。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件29六、肉毒梭菌 本菌廣泛分布于土壤，動物腸道，飼料以及食品中。不能在活的機體內生長繁殖。當有適宜營養(yǎng)和厭氧環(huán)境時

19、，即可生長繁殖并產生肉毒毒素。人畜食人含此毒素的食品、飼料或其他物品，即可中毒而發(fā)生肉毒中毒癥。1. 形態(tài)及染色特性 本菌多呈直桿狀， 單在或成雙，革蘭氏陽性。著生周鞭毛，能運動。芽孢卵圓，位于菌體近端，大于菌體直徑，使細胞膨大，易于在液體和固體培養(yǎng)基上形成芽孢。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件302. 培養(yǎng)特性 本菌專性厭氧。最適溫度30-37。產毒素的最適溫度為25-30。營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中均能生長。 在血平板上，可形成直徑1-6mm，圓形到扇狀、裂葉狀或根狀邊緣的不規(guī)則菌落，常帶有斑狀或花葉狀的中心結構， 溶血。3. 抵抗力 本菌繁殖體抵抗力中等，加熱80C30min或1

20、00C10min能將其殺死，但芽孢抵抗力極強。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件31 芽孢在濕熱1005-7h、高壓105100min或120 5-20min、干熱18015min可被殺死。肉毒毒素的抵抗力：耐酸，但對堿敏感，pH8.5以上破壞。0.1高錳酸鉀、加熱8030min或100 10min，均能破壞毒素。4. 抗原性及分型 根據毒素抗原性的差異，可將該菌分為A、B、C、D、E、F、G7個型，用各型毒素(或類毒素)免疫動物，只能獲得中和相應型毒素的特異性抗毒素。各型菌雖產生其型特異性毒素，但型間尚存在交叉現象。 第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件325. 肉毒毒素 是一類鋅結合

21、蛋白質，具蛋白酶活性，性質穩(wěn)定，是毒性最強的神經麻痹毒素之一。如A型毒素，每克含毒食品可致死十幾萬至幾十萬只小鼠。純化肉毒毒素lmg可殺死2億只小鼠，對人的致死量約為0.1ug 。 A-G型肉毒毒素合成時均為無毒性的毒素前體，由神經毒及非毒性兩個亞單位組成。非毒性亞單位保護毒素前體的免受胃蛋白酶的水解。在小腸吸收后兩個亞單位分解，神經毒亞單位通過淋巴、血流作用于靶器官細胞，阻斷乙酰膽堿的釋放，導致肌肉弛緩型麻痹。G型毒素須胰酶激活后才有毒性。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件336. 致病性 所有溫血動物和冷血動物對肉毒毒素均有感受性，在家畜中馬、牛、羊、水貂、禽類、豬，小鼠、大鼠、豚鼠、

22、家兔、貓、犬、猴等實驗動物以及雞、鴿等各種禽類都敏感。7. 微生物學診斷 從可疑媒介物或患病人畜胃腸內容物及血清中檢查肉毒毒素，是主要的微生物學診斷手段。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件34肉毒毒素檢測 A. 材料處理 被檢材料，稀釋、研磨成乳狀，室溫浸泡數小時、離心。取上清液分為兩份，一份按1/10量加入10胰酶液混勻，于37作用60min，然后進行檢測。另1份不處理。B. 檢出試驗 取兩種處理液，分別腹腔注射小鼠2只（0.5mL/只），觀察4d 。若有毒素存在，小鼠多在注射后24h內發(fā)病、死亡。主要表現為豎毛、四肢癱軟、呼吸困難，呼吸呈風箱式，腰部凹陷，宛若蜂腰，最終死于呼吸麻痹。則

23、判定可能有肉毒毒素存在。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件35C. 證實試驗 分3組進行。各取l mL被檢液，第1組(毒素中和組)，加等量多型混合肉毒抗毒素，混勻后置37 作用30min；第2組(毒素滅活對照組)，加等量緩沖液，混勻后煮沸10min；第3組(毒素對照組)，加等量緩沖液混勻即可。3組混合液分別腹腔注射小鼠各2只（0.5mL/只），觀察4d 。若1和2組的小鼠均獲保護存活，而第3組小鼠以特有癥狀死亡，則可確定有肉毒毒素的存在。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件36D定型試驗 可先進行毒力測定，取含10-100MLD/ml的毒素液，分別與各型肉毒抗毒素及明膠磷酸鹽緩沖液等量混合，37作用30min后依上法進行試驗，能保護小鼠免于死亡的抗毒素組，即為所含肉毒毒素的型別。8. 免疫防治 在常發(fā)地區(qū)，可用明礬沉淀類毒素預防注射，有效免0.5-1年。人畜一旦出現肉毒中毒癥，可立即用多價抗毒素（或同型抗毒素）血清進行治療。第22章課件002獸醫(yī)微生物學教學課件37七、破傷風梭菌 本菌又名破傷風桿菌，是引起人畜破