茅蒼術(shù)藥材高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測指紋圖譜的研究

1、茅蒼術(shù)藥材高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測指紋圖譜的研究賈曉東趙興增王鳴郭可躍趙交情馮煦【摘要】目的研究茅蒼術(shù)的HPL-ELSD指紋圖譜。要領(lǐng)高效液相色譜法，蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)，水0.25%乙酸-乙腈梯度洗脫；流速0.6l/in；柱溫30。ELSD條件：不分流；漂移管溫度112.8；氣氛流量3.1L/in。結(jié)果共有10個共有峰，接納?中藥色譜指紋圖譜相似度評價體系2022A版?得出了茅蒼術(shù)藥材的比較指紋圖譜。細(xì)密度、不變性、重復(fù)性實行中各共有峰相對保存時間和相對峰面積的RSD均3。結(jié)論該指紋圖譜要領(lǐng)輕便、重復(fù)性好，為有用地操縱茅蒼術(shù)藥材的內(nèi)涵質(zhì)量提供了科學(xué)根據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】茅蒼術(shù)指紋圖譜高

2、效液相色譜蒸發(fā)光散射蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atratyldeslanea(Thunb.)D.或北蒼術(shù)Atratyldeshinensis(D.)KidZ.的枯燥根莖1。始載于?神農(nóng)本草經(jīng)?，蒼術(shù)性辛、苦、溫，歸脾、胃、肝經(jīng)，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目作用。主治脘腹脹滿、泄瀉、水腫、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒傷風(fēng)等，中醫(yī)臨床利用汗青久長。此中尤以產(chǎn)于江蘇茅山地域的茅蒼術(shù)品格最好。茅山地域是茅蒼術(shù)的道地產(chǎn)區(qū)。但比年來國際市場對蒼術(shù)的需求量日益增長，茅蒼術(shù)被打劫性采挖，加之對茅蒼術(shù)生態(tài)環(huán)境的報酬粉碎，造成茅蒼術(shù)資源的枯竭，使其瀕于滅盡2。為了庇護這一貴重資源，需對其精良品格舉行闡發(fā)。查閱相干文獻創(chuàng)造對茅蒼術(shù)傳統(tǒng)

3、意義上的活性部位揮發(fā)油的研究，未創(chuàng)造與道地性的直接接洽，以是我們拔取了茅蒼術(shù)的水溶性部門舉行開端的指紋圖譜的研究。由于茅蒼術(shù)水溶性部位含有的重要身分為無紫外汲取單萜苷類，應(yīng)選用蒸發(fā)光散射檢測器，得到了精良而不變的結(jié)果。根據(jù)國度藥品監(jiān)視辦理局2000年公布的“中藥注射劑指紋圖譜技能要求的有關(guān)劃定3，對產(chǎn)于江蘇茅山地域的差異網(wǎng)羅所在的10批茅蒼術(shù)舉行了HPLELSD指紋圖譜要領(lǐng)的創(chuàng)立。創(chuàng)立其指紋圖譜是為了反響其質(zhì)量環(huán)境，為創(chuàng)立不變、可靠、全面的質(zhì)量操縱要領(lǐng)提供科學(xué)根據(jù)。1質(zhì)料與儀器1.2比較品蒼術(shù)苷A，3，4，11，14-四羥基愈創(chuàng)-9-烯-11-D-吡喃葡糖苷，純度98，本課題組分得。1.3試劑

4、及儀器乙腈：HPL級；乙酸：AR級；去離子水。Agilent1100液相色譜儀，HPhestatin色譜事情站，AlltehELSD2000ES蒸發(fā)光檢測器，AgilentINTERFAE35900E數(shù)模轉(zhuǎn)換器，XK-無油氣氛泵，PhenxenexSynergiHydr-RP80A柱4.6250，4加18預(yù)柱。2要領(lǐng)2.1色譜條件經(jīng)要領(lǐng)學(xué)研究確定色譜條件，活動相A：水含0.25%乙酸，B：乙腈。梯度洗脫步伐見表2。柱溫30；流速0.6l/in；進樣量：30l。ELSD接納不分流形式，漂移管溫度112.8，氣氛流量：3.1L/in。表1植物樣品的網(wǎng)羅環(huán)境略表2梯度洗脫步伐略2.2供試液制備取如上

5、枯燥植物樣品，粉碎，過40目篩。細(xì)密稱定2g，置索氏提取器中，加80l正己烷水浴加熱回流脫脂8h。棄去正己烷液，取出樣品紙包待正己烷揮發(fā)至干，再加80l甲醇提取8h。將甲醇提取液減壓蒸至小體積，甲醇定容至10l，用0.45微孔濾膜濾事后備用。2.4不變性實行取茅蒼術(shù)04號樣品供試液，別離在0，4，8，12，24h檢測指紋圖譜。結(jié)果各色譜峰的相對保存時間和峰面積比值根本同等，RSD3，供試品溶液在24h內(nèi)不變，切合指紋圖譜技能要求。2.5細(xì)密度實行取茅蒼術(shù)03號樣品供試液，一連進樣5次，檢測指紋圖。比力各共有指紋峰的相對保存時間和相對峰面積，結(jié)果表白各共有指紋峰的相對保存時間和相對峰面積根本同等

6、，RSD3，切合指紋圖譜的檢測要求。2.6重復(fù)性實行取茅蒼術(shù)09號樣品5份，按供試品溶液制備要領(lǐng)制備供試品，檢測指紋圖。并別離按上述液相條件測定，對共有峰的相對保存時間和相對峰面積舉行統(tǒng)計，5份供試品溶液的RSD3，切合指紋圖譜的要求。2.7樣品測定細(xì)密汲取供試品溶液各30l，注入液相色譜儀，按“2.1中色譜條件測定，記載色譜圖。以蒼術(shù)苷AS峰的保存時間及峰面積為1，盤算各共有指紋峰的相對保存時間和峰面積比值。并按“中藥注射劑指紋圖譜研究的技能要求創(chuàng)立茅蒼術(shù)藥材的指紋圖譜檢測尺度。3結(jié)果3.1相對保存值指紋譜的創(chuàng)立接納相對保存時間標(biāo)定指紋峰，記載80in的色譜圖，以圖譜中蒼術(shù)苷A3號峰為參照物

7、S，將各指紋峰保存時間與同一圖譜中參照物的保存時間設(shè)定為1比力，其比值為各指紋峰的相對保存時間。盤算10批藥材指紋圖譜中各指紋峰的技能參數(shù)見表3，標(biāo)定茅蒼術(shù)的特性指紋峰為10個見圖1。各特性指紋峰的保存時間為：峰-123.432in；峰-226.383in；峰-330.468in；峰-443.478in；峰-544.682in；峰-650.365in；峰-752.176in；峰-863.336in；峰-965.065in；峰-1070.435in。此中峰6為3，4，11，14-四羥基愈創(chuàng)-9-烯-11-D-吡喃葡糖苷。表3茅蒼術(shù)指紋圖譜的技能參數(shù)略3.2共有指紋峰面積的比值通過10批藥材測定，

8、以圖譜中蒼術(shù)苷A為參照物S，將各特性指紋峰面積與同一圖譜中參照物的峰面積比力，其比值為特性指紋峰的相對峰面積。據(jù)“中藥注射劑指紋圖譜研究的技能要求劃定，各共有指紋峰的面積比值必需相對結(jié)實。峰-4單峰面積占總峰面積百分比20，其差值20；峰-3單峰面積占總峰面積百分比10，而20，其差值25；別的單峰面積比均10，峰面積比值不做要求。切合指紋圖譜的要求。3.3非共有峰面積通過10批藥材供試品的測定，統(tǒng)計非共有峰與總峰面積的百分比，其結(jié)果為非共有峰面積百分比7.07，切合指紋圖譜研究的10的檢測要求。3.4相似度接納?中藥色譜指紋圖譜相似度評價體系2022A版?對百般品色譜圖的原始文件輸特別式為a

9、ia舉行闡發(fā)，主動匹配并以10批樣品天生的比較譜圖中位數(shù)法作為比較模版，盤算各色譜圖的團體相似度介于0.5640.887之間。見表4。表410批藥材相似度略3.5別的藥材和茅蒼術(shù)HPL-ELSD尺度指紋圖譜的比力在同樣條件下別離測定了產(chǎn)于湖北和安徽的南蒼術(shù)、北蒼術(shù)、白術(shù)藥材的色譜圖，并與茅蒼術(shù)HPL-ELSD尺度指紋圖譜比力相似度。結(jié)果見表5。圖1典范茅蒼術(shù)HPL-ELSD色譜圖略4討論蒼術(shù)為中醫(yī)常用藥，臨床應(yīng)用汗青久長，具有健脾燥濕、祛風(fēng)散寒的成果，尤以產(chǎn)于江蘇茅山地域的茅蒼術(shù)品格最好，向來以為茅山是茅蒼術(shù)的道地產(chǎn)區(qū)。對茅蒼術(shù)道地性的研究會合在對其揮發(fā)油的研究。大量實行證實道地產(chǎn)區(qū)與非道地產(chǎn)

10、區(qū)茅蒼術(shù)含油量有明顯性差異，且道地產(chǎn)區(qū)低于非道地產(chǎn)區(qū)，這提示我們茅蒼術(shù)的道地性大概不是表如今揮發(fā)油上，而是在水溶性身分中。日本學(xué)者在對茅蒼術(shù)的研究中，從其水溶性部門分得了大量的單萜苷類身分，且表現(xiàn)具有較好的藥理活性?；谶@種緣故原由，我們對茅蒼術(shù)的水溶性化學(xué)身分舉行了體系的化學(xué)分散，并對其指紋圖譜舉行研究。實行創(chuàng)造，蒼術(shù)水溶性部門身分多為沒有紫外汲取的單萜苷類身分，接納紫外檢測器在圖譜中根本看不到汲取峰，故本實行選用ELSD檢測器并得到了滿足的結(jié)果。表5與別的藥材的比力結(jié)果略4.1提取條件探究比力了甲醇、95乙醇、50甲醇、50乙醇等對樣品的提取結(jié)果，以甲醇提取的樣品液出峰較多，應(yīng)選定甲醇做為

11、提取溶劑。4.2液相條件探究本實行接納ELSD檢測方法，ELSD檢測器能檢測到任何揮發(fā)性低于活動相的化合物，因此溶劑中極微量的殘留身分也能檢測出來，造成峰的滋擾或基線不穩(wěn)。在液相洗脫條件的探究中，實行了利用甲醇水，乙腈水兩種溶劑體系?？v然在利用高純度甲醇溶劑時，譜圖中仍有含量較大的雜峰，而在選用乙腈時雜峰較少，應(yīng)選擇乙腈水做為梯度洗脫的溶劑體系。茅蒼術(shù)所含身分較龐大，給液相分散帶來了很大的困難，通過參加必然的緩沖溶液可以大大的改進峰形，進步分散度。對幾種揮發(fā)性的緩沖溶液舉行比力，選定參加0.25%的乙酸。所網(wǎng)羅的10批藥材均為野生茅蒼術(shù)藥材，生常年限等因素大概會對藥材的內(nèi)涵質(zhì)量產(chǎn)生必然的影響，

12、所研究的指紋圖譜所表達(dá)的信息，僅代表茅蒼術(shù)藥材的團體環(huán)境，故而10批茅蒼術(shù)藥材的指紋圖的相對峰面積值變異較大。10批茅蒼術(shù)藥材圖譜與茅蒼術(shù)尺度指紋圖譜的相似度介于0.9650.855之間，產(chǎn)于湖北的南蒼術(shù)與茅蒼術(shù)尺度指紋圖譜的相似度為0.867，表現(xiàn)兩者有較靠近的化學(xué)身分構(gòu)成。產(chǎn)于安徽的南蒼術(shù)與茅蒼術(shù)尺度指紋圖譜的相似度為0.73，顯著不如產(chǎn)于湖北的茅蒼術(shù)近，這與別的實行證實的結(jié)論符合。茅蒼術(shù)在茅山地域生長具有較好的道地性上風(fēng)，引種于湖北地域的茅蒼術(shù)道地性上風(fēng)優(yōu)于別的地域。產(chǎn)于北京的北蒼術(shù)與茅蒼術(shù)尺度指紋圖譜的相似度為0.236，表現(xiàn)二者之間化學(xué)身分相差大，不克不及混用。白術(shù)與茅蒼術(shù)尺度指紋圖譜的相似度為0.062，相似度最低。本實行創(chuàng)立的HPL-ELSD指紋圖譜為快速斷定蒼術(shù)類藥材提供了根據(jù)。本實行在中藥色譜指紋圖譜相似度評價體系20