天然產(chǎn)物的合成生物學(xué)研究

1、PAGE 11 -天然產(chǎn)物的合成生物學(xué)研究葉少杰秦嘉豪路斯博魏岱旭合成生物學(xué)是21世紀(jì)誕生的一門(mén)交叉學(xué)科，它結(jié)合了傳統(tǒng)的生物工程和系統(tǒng)生物學(xué)概念，旨在建立人為設(shè)計(jì)的生物系統(tǒng)，即將基因連接成網(wǎng)絡(luò)，利用宿主細(xì)胞（底盤(pán)細(xì)胞）完成設(shè)想的相關(guān)任務(wù)，具體過(guò)程一般包括底盤(pán)細(xì)胞的構(gòu)建、合成元件的挖掘與采用、合成途徑的設(shè)計(jì)以及細(xì)胞合成工廠(chǎng)的創(chuàng)建。由于微生物具有代謝速率高、培養(yǎng)條件易控制、可通過(guò)生化反應(yīng)器放大其規(guī)模等諸多優(yōu)點(diǎn)，所以目前普遍將微生物作為底盤(pán)細(xì)胞。利用合成生物學(xué)技術(shù)生產(chǎn)目的產(chǎn)物具有高效、經(jīng)濟(jì)、環(huán)境友好等一系列優(yōu)點(diǎn)，因此，運(yùn)用該手段針對(duì)各種化學(xué)品、新型非天然藥物、天然產(chǎn)物等的研發(fā)與應(yīng)用正在如火如荼地展開(kāi)

2、。有研究團(tuán)隊(duì)利用轉(zhuǎn)錄組和代謝組的關(guān)聯(lián)分析，確定并全面解析了黃芩素的整個(gè)生物合成途徑，再用生物合成技術(shù)生產(chǎn)產(chǎn)品1；有研究人員以嗜鹽單胞菌為研究對(duì)象，實(shí)現(xiàn)了聚羥基脂肪酸等高分子材料、化學(xué)品和燃料的生物制造，其可應(yīng)用于醫(yī)療、環(huán)境等領(lǐng)域2-5；另有研究團(tuán)隊(duì)長(zhǎng)期以深海、極地等極端環(huán)境的微生物和動(dòng)植物共生生物為研究對(duì)象，克隆并鑒定了多種抗生素的基因簇，開(kāi)展關(guān)于非天然抗生素藥物的合成生物學(xué)研究，獲得了大量新型的抗生素衍生物，推動(dòng)了我國(guó)微生物藥物生物合成領(lǐng)域的發(fā)展6；還有實(shí)驗(yàn)室利用邏輯門(mén)的概念（指具有與計(jì)算機(jī)所用電路邏輯門(mén)類(lèi)似信息處理能力的基因線(xiàn)路組件），成功設(shè)計(jì)并構(gòu)建了基因線(xiàn)路，實(shí)現(xiàn)了對(duì)于膀胱癌細(xì)胞的識(shí)別和

3、治療7。合成生物學(xué)的不斷發(fā)展和完善為能源、材料、醫(yī)療、食品、日化等行業(yè)提供了更多的產(chǎn)品支撐。結(jié)構(gòu)多樣的天然產(chǎn)物天然產(chǎn)物具有很好的生物學(xué)活性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、香料、化妝品等方面。然而，從植物或動(dòng)物本身提取天然產(chǎn)物的步驟十分煩瑣，且收益低，同時(shí)由于其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，利用化學(xué)合成天然產(chǎn)物也會(huì)帶來(lái)很大的困難，因此生物合成法就成為一個(gè)值得考慮的新方法。萜類(lèi)化合物萜類(lèi)化合物是自然界廣泛存在的一大類(lèi)異戊二烯衍生物，主要從植物、微生物及海洋生物中分離得到。萜類(lèi)通式是（C5H8）n（n是異戊二烯的單元數(shù)）。其目前已鑒定得到的種類(lèi)有55000多個(gè)，占所有天然化合物的60%8。萜類(lèi)不但具有廣泛的抗癌功效9，還有消炎

4、、降糖等藥理作用。三萜皂苷類(lèi)能夠消炎、抗過(guò)敏、抗病毒、降血糖、治療白血病，以及防治心腦血管等疾病10。此外，很多植物源萜類(lèi)化合物是芳香性揮發(fā)性物質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于香料、香水、調(diào)味劑及化妝品等行業(yè)11。萜類(lèi)結(jié)構(gòu)的多樣性還使其成為汽油、柴油等燃料的高級(jí)替代物。例如單萜蒎烯、檸檬烯、半萜異戊烯醇、異戊醇等均是公認(rèn)的燃料及燃料的前體物。萜類(lèi)在植物中的含量通常很低，且植物提取法還存在野生資源稀缺、分離效果不佳、產(chǎn)量極低的問(wèn)題。化學(xué)合成法雖解決了植物提取法中的諸多問(wèn)題，但仍存在原料昂貴、工藝流程復(fù)雜、立體選擇性低、污染大、總收率偏低等問(wèn)題。而生物合成法則不受原料的限制，具有生產(chǎn)過(guò)程綠色清潔、產(chǎn)物單一、產(chǎn)率提

5、升空間大等優(yōu)勢(shì)。生物合成法有兩種，一種是通過(guò)代謝工程手段直接在植物中促進(jìn)萜類(lèi)化合物的合成，然而由于植物生長(zhǎng)緩慢且體內(nèi)代謝過(guò)程錯(cuò)綜復(fù)雜，所以這種萜類(lèi)合成方法面臨著目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量有限、后期分離困難、生產(chǎn)周期長(zhǎng)等問(wèn)題；另一種是通過(guò)合成生物學(xué)的方法在微生物等底盤(pán)細(xì)胞中合成目標(biāo)產(chǎn)物。目前，對(duì)于萜類(lèi)合成生物學(xué)的設(shè)計(jì)策略一般可以分為兩部分：一是底盤(pán)細(xì)胞的選擇及改造；二是萜類(lèi)合成途徑的挖掘。底盤(pán)細(xì)胞的選擇及改造是實(shí)現(xiàn)合成生物學(xué)方法用以生產(chǎn)萜類(lèi)化合物的基礎(chǔ)。選取不同的底盤(pán)細(xì)胞對(duì)于萜類(lèi)的生物合成有關(guān)鍵性的影響，例如大腸桿菌主要用于酮、醇、酸等化學(xué)品而非萜類(lèi)的生物合成。另外，由于細(xì)菌缺少翻譯后修飾而難以表達(dá)細(xì)胞色素，

6、且很多萜類(lèi)化合物具有抗細(xì)菌活性，因此多采用釀酒酵母等真核生物進(jìn)行萜類(lèi)的生物合成。利用酵母細(xì)胞的好處是酵母能夠直接合成較多的二甲基丙烯基二磷酸和異戊烯焦磷酸，從而為萜類(lèi)合成提供大量的前體物。其優(yōu)勢(shì)有三點(diǎn)：一是選用酵母作為底盤(pán)細(xì)胞可以通過(guò)酵母基因組的必需基因分析，保留最小基因組，從而在萜類(lèi)的生物合成過(guò)程中減少其內(nèi)源消耗；二是所有基因工程操作都可以通過(guò)染色體融合完成，這樣可以保證酵母工程菌株的遺傳穩(wěn)定性；三是可以通過(guò)對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行耐高溫、耐酸、耐鹽等抗逆改造。萜類(lèi)合成途徑的挖掘是從自然中尋找合適的萜類(lèi)化合物生成與表達(dá)的相關(guān)基因，并將其加入人工設(shè)計(jì)的基因表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)，從而直接或間接實(shí)現(xiàn)對(duì)萜類(lèi)物質(zhì)的生物生

7、產(chǎn)流程的優(yōu)化或創(chuàng)造。無(wú)論何種產(chǎn)物，其相關(guān)合成途徑的挖掘是合成生物學(xué)快速發(fā)展的保障。隨著全基因組測(cè)序、第二代DNA測(cè)序技術(shù)以及宏基因組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的天然產(chǎn)物代謝途徑被挖掘出來(lái)，并且植物萜類(lèi)化合物的合成往往伴隨著基因表達(dá)簇結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)。隨著對(duì)異源基因的密碼子優(yōu)化、啟動(dòng)子終止子的選取和搭配組合優(yōu)化、合成途徑的標(biāo)準(zhǔn)化組裝、發(fā)酵條件摸索及發(fā)酵工藝優(yōu)化等方面的深入研究，萜類(lèi)合成關(guān)鍵酶的異源高效表達(dá)以及萜類(lèi)的合成能力已經(jīng)得到了很大的提高。當(dāng)前通過(guò)對(duì)萜類(lèi)的生物合成途徑的鑒定研究，設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)出越來(lái)越多的組合調(diào)控萜類(lèi)合成途徑的功能模塊，并在底盤(pán)細(xì)胞中創(chuàng)建合成工廠(chǎng)，已可實(shí)現(xiàn)萜類(lèi)的體外合成。因此，合成生物學(xué)的發(fā)

8、展為實(shí)現(xiàn)微生物發(fā)酵生產(chǎn)萜類(lèi)提供了有力的支撐。生物堿生物堿是一類(lèi)含負(fù)電荷氮離子的、具有環(huán)狀或非環(huán)狀結(jié)構(gòu)的次生代謝產(chǎn)物，廣泛存在于諸多生物分泌物中。植物界中的罌粟科、豆科、蘭科以及麻黃科等普遍會(huì)分泌生物堿；動(dòng)物界中有蟾蜍分泌的蟾蜍堿、麝香中的麝香吡啶、加拿大海貍香腺中的海貍堿等。生物堿普遍具有抗菌、抗癌、鎮(zhèn)痛等作用，也是當(dāng)今抗腫瘤、心血管疾病相關(guān)藥物研發(fā)生產(chǎn)的重要資源。然而，由于植物生長(zhǎng)緩慢且體內(nèi)生物堿含量較低，無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。因此用合成生物學(xué)的方法實(shí)現(xiàn)生物堿的規(guī)?；a(chǎn)是很好的方法。青蒿素是我國(guó)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)被國(guó)際公認(rèn)的抗瘧首選天然藥物，其結(jié)構(gòu)為含過(guò)氧橋基團(tuán)結(jié)構(gòu)的倍半萜內(nèi)酯類(lèi)化合物。眾多科研人員

9、通過(guò)接力式的研究，先后實(shí)現(xiàn)了將青蒿中的紫穗槐-4，11-二烯合酶在酵母中過(guò)表達(dá)（實(shí)現(xiàn)了青蒿素合成前體紫穗槐-4，11-二烯的合成）、啟動(dòng)子和代謝流優(yōu)化、整合細(xì)胞色素酶、脫氫酶，再通過(guò)添加過(guò)程代謝物等手段，目前已使得酵母中青蒿酸的含量達(dá)到25克/升，初步達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)水平?？梢哉f(shuō)，青蒿素是目前利用合成生物學(xué)技術(shù)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化最為成功的典范之一。然而，實(shí)現(xiàn)低成本工業(yè)化生產(chǎn)青蒿素等眾多生物堿的探索道路仍然任重道遠(yuǎn)。目前，利用合成生物學(xué)手段實(shí)現(xiàn)實(shí)際社會(huì)生產(chǎn)中的天然產(chǎn)物合成仍然存在著諸多挑戰(zhàn)。例如原核表達(dá)系統(tǒng)、細(xì)胞內(nèi)無(wú)高級(jí)細(xì)胞器、缺乏轉(zhuǎn)錄后修飾，而酵母作為真核表達(dá)系統(tǒng)必須人為地將內(nèi)含子從蛋白質(zhì)編碼序列中刪除

10、。越來(lái)越多的生物技術(shù)，如構(gòu)建基因庫(kù)、蛋白質(zhì)工程、高通量篩選以及CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)等的發(fā)明與應(yīng)用可解決上述難題。這些不斷完善的新生物合成工具正隨著具有重要藥用價(jià)值的生物次生代謝物的生產(chǎn)成本與資源協(xié)調(diào)等相關(guān)問(wèn)題的解決，逐步創(chuàng)造著更加可觀(guān)的未來(lái)。參與生物合成的工具酶天然產(chǎn)物的生物合成過(guò)程離不開(kāi)一個(gè)關(guān)鍵物質(zhì)酶。對(duì)于我們?nèi)祟?lèi)自身來(lái)說(shuō)，情緒波動(dòng)、思維跳動(dòng)、身體運(yùn)動(dòng)都離不開(kāi)各種酶類(lèi)。酶在各種生物體內(nèi)含量雖微小但卻起著舉足輕重的作用。天然產(chǎn)物的合成更離不開(kāi)它們。參與天然產(chǎn)物生物合成的這些酶類(lèi)被稱(chēng)為工具酶。顧名思義，就是合成天然產(chǎn)物的“工具”。主要包含途徑酶和后修飾酶12。途徑酶途徑酶，即合成天

11、然產(chǎn)物相關(guān)生化反應(yīng)途徑過(guò)程中的酶類(lèi)，是由底物生成某種產(chǎn)物的先決條件。氧化還原酶（催化氧化還原反應(yīng)的一類(lèi)酶）就是一大類(lèi)關(guān)鍵的途徑酶，其在生物體的氧化產(chǎn)能、解毒以及某些生理物質(zhì)形成等過(guò)程中起重要的作用，屬于第一大類(lèi)酶，在生物界中存在且數(shù)量龐大。而在催化作用中，一般都需要輔酶或輔基參加，其通?？煞譃?個(gè)亞類(lèi)：脫氫酶，催化從底物上脫氫反應(yīng)的酶；氧化酶，催化底物脫氫，并把氫交給氧氣生成過(guò)氧化氫或水的酶；過(guò)氧化物酶，催化以過(guò)氧化氫或其他過(guò)氧化物為氧化劑反應(yīng)的酶；氧合酶，催化氧原子直接參與有機(jī)分子反應(yīng)的酶。目前，天然產(chǎn)物的生物合成中主要的困難是氧化還原酶結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有輔酶和底物等多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，且往往由多個(gè)亞

12、基組成，因此在反應(yīng)過(guò)程中容易失活。而提高氧化還原酶的穩(wěn)定性主要有酶分子結(jié)構(gòu)改造和固定化兩種途徑13。氧化還原酶的固定化需要在材料選取和固定化方法選擇方面，例如酶固定化載體的化學(xué)組成、界面性質(zhì)以及微觀(guān)結(jié)構(gòu)等對(duì)酶的穩(wěn)定性、電子傳遞、底物和產(chǎn)物擴(kuò)散過(guò)程的影響等多做考慮。目前廣泛使用的載體材料分為高分子材料、碳材料、聚合物無(wú)機(jī)復(fù)合材料、金屬有機(jī)框架材料等。這些材料具有穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度高、化學(xué)惰性、孔隙率高、比表面積大等優(yōu)勢(shì)，并可通過(guò)表面可控修飾獲得生物相容性好的固定化載體。另外一大類(lèi)途徑酶即限速酶。在天然產(chǎn)物的生物合成中，要想控制產(chǎn)率和產(chǎn)速，應(yīng)從反應(yīng)途徑入手。而調(diào)節(jié)反應(yīng)途徑中對(duì)酶的調(diào)控在很大程度上是

13、對(duì)限速酶的調(diào)控。如果把人體內(nèi)的生化反應(yīng)過(guò)程想象成道路上行駛的汽車(chē)，那么限速酶就如同限速攝像頭，超速行駛的車(chē)輛遇到攝像頭便會(huì)放緩速度，通過(guò)這樣的方式達(dá)到提高安全系數(shù)的目的。人體的基礎(chǔ)代謝，如糖酵解、糖異生、三羧酸循環(huán)中都有限速步驟，限速酶能夠影響反應(yīng)的速度及進(jìn)行與否。后修飾酶后修飾酶可以對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，豐富天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)多樣性，改善天然產(chǎn)物的性質(zhì)，增加篩選獲得活性天然產(chǎn)物的概率。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，后修飾酶就是對(duì)途徑酶催化后的產(chǎn)物進(jìn)一步優(yōu)化，使其具有更強(qiáng)的效能。后修飾酶包括甲基轉(zhuǎn)移酶、?；D(zhuǎn)移酶、脂肪酶、氧化酶、糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷水解酶等。目前非常熱門(mén)的表觀(guān)遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的就是環(huán)境因素導(dǎo)致生物的基因

14、表達(dá)不同的問(wèn)題?；虮磉_(dá)的不同與基因修飾密不可分，當(dāng)然也就與后修飾酶密不可分了。如果我們把途徑酶比作一個(gè)熟練的工匠，那么后修飾酶就是精巧的刻刀，兩種酶之間只有熟練地配合，才能實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物的生物合成。合成生物學(xué)技術(shù)的新發(fā)展構(gòu)建大腸桿菌工程菌研究者通常可參考生物合成天然產(chǎn)物的相關(guān)研究，尋找到天然產(chǎn)物合成中所需要的酶，并通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物，擴(kuò)增獲得其DNA全長(zhǎng)片段，然后用相應(yīng)的限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)其進(jìn)行酶切，再用DNA連接酶將其插入載體獲得重組質(zhì)粒。將獲得的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，并在對(duì)應(yīng)的抗性平板上培養(yǎng)，利用各基因特異性引物進(jìn)行菌落PCR，篩選驗(yàn)證后構(gòu)建大腸桿菌工程菌。姜黃素是從姜科、天南星科等植物的

15、根莖中提取的一種二酮類(lèi)化合物，具有良好的抗炎和抗癌特性。在利用合成生物學(xué)方法合成姜黃素的研究中，研究者利用姜黃素生物合成關(guān)鍵酶-酮酰輔酶A合酶基因和姜黃素合酶基因構(gòu)建非天然融合基因，并將其與4-香豆酰輔酶A連接酶和乙酰輔酶A羧化酶基因共同引入大腸桿菌中，構(gòu)建合成姜黃素的大腸桿菌工程菌，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)姜黃素的大量生產(chǎn)。CRISPR-Cas9基因編輯系統(tǒng)與核糖體工程目前，在生物合成過(guò)程中，工程菌經(jīng)過(guò)多輪的遺傳改造和誘變育種會(huì)產(chǎn)生新的基因，以至于難以通過(guò)抗性基因?qū)ζ溥M(jìn)行遺傳操作。而CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)不僅可以對(duì)靶向基因進(jìn)行特定修飾，包括敲除、修復(fù)和替換等，同時(shí)還具有成本低、操作簡(jiǎn)便、效率高、

16、功能多樣等優(yōu)點(diǎn)，因此近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于合成生物學(xué)、代謝工程和醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。核糖體工程技術(shù)可對(duì)核糖體、RNA聚合酶及轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行修飾改造，進(jìn)而提高次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物合成。該方法常用靶向核糖體或RNA聚合酶的抗生素來(lái)篩選抗性突變株。當(dāng)?shù)玫降墓こ叹l(fā)酵水平無(wú)法達(dá)到工業(yè)水平時(shí)，可以通過(guò)核糖體工程技術(shù)來(lái)篩選出高產(chǎn)菌株，進(jìn)而提高產(chǎn)量?？衫顾厥俏覈?guó)首次利用合成生物學(xué)技術(shù)研發(fā)的具有中國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的一類(lèi)新藥。合成可利霉素的工程菌因多次基因改造已獲得了兩種抗性基因，難以再進(jìn)行基因改造。然而CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)可以通過(guò)向?qū)NA指導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)靶基因進(jìn)行剪切，然后完成對(duì)DNA的編輯，之后再通過(guò)

17、核糖體工程技術(shù)篩選得到可利霉素的高產(chǎn)工程菌株。截至目前，利用合成生物學(xué)方法合成天然產(chǎn)物已取得了一定的成果。然而在生物合成的過(guò)程中，工程菌的重構(gòu)隨著基因簇的增大而變得愈發(fā)復(fù)雜，最后生成的產(chǎn)物也難以達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。因此，設(shè)計(jì)更好的基因編輯系統(tǒng)和構(gòu)建更加適合的底盤(pán)細(xì)胞是未來(lái)發(fā)展的一個(gè)方向。原始宿主的調(diào)控對(duì)原始宿主的調(diào)控主要通過(guò)調(diào)控子（存在于基因旁側(cè)序列中，能影響基因表達(dá)的序列），以及改變代謝途徑中的加工酶或轉(zhuǎn)運(yùn)酶等來(lái)增加天然產(chǎn)物的產(chǎn)量。研究者在有關(guān)糖多孢紅霉菌TetR家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控子SACE7301調(diào)控紅霉素產(chǎn)量的研究中，通過(guò)敲除SACE7301基因構(gòu)建了SACE7301突變體。在之后的對(duì)比實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，糖多

18、孢紅霉菌中TetR家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控子SACE7301可正向增加紅霉素的產(chǎn)量，但對(duì)糖多孢紅霉菌的形態(tài)分化影響不大。研究者進(jìn)一步通過(guò)凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SACE7301蛋白可在細(xì)菌體外與eryAI啟動(dòng)子結(jié)合，進(jìn)而推測(cè)SACE7301可能直接調(diào)控紅霉素的合成。此外，在調(diào)控萜類(lèi)合成途徑的基因表達(dá)，進(jìn)而提高-胡蘿卜素的產(chǎn)量時(shí)，研究人員將-胡蘿卜素合成途徑基因?qū)氪竽c桿菌，并用多個(gè)調(diào)控元件對(duì)大腸桿菌甲基赤蘚糖醇磷酸途徑的7個(gè)基因和ispA基因進(jìn)行調(diào)控。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)dxr、ispG和ispH基因進(jìn)行調(diào)控，同時(shí)對(duì)dxs和idi基因進(jìn)行組合調(diào)控，將-胡蘿卜素的產(chǎn)量提高了8倍。基因表達(dá)的調(diào)控在天然產(chǎn)物合成方面獲得

19、了很大的突破。目前，原始宿主內(nèi)的調(diào)控主要集中在正向調(diào)控元件或生物傳感器的引入、負(fù)調(diào)控因子的刪除或沉默，從而實(shí)現(xiàn)未知基因簇的激活和過(guò)表達(dá)。因此，建立可通用的生物傳感器、發(fā)明快速準(zhǔn)確的基因編輯手段是基于原始宿主調(diào)控天然產(chǎn)物合成產(chǎn)量的重要策略。合成生物學(xué)對(duì)天然產(chǎn)物的實(shí)際生產(chǎn)將會(huì)產(chǎn)生顛覆式的影響。自合成生物學(xué)誕生至今的20多年來(lái)，其發(fā)展成果只是冰山一角，還有許多問(wèn)題等待科研人員繼續(xù)挖掘和研究。合成生物學(xué)在化合物生產(chǎn)、組織醫(yī)療、食物生產(chǎn)、甚至是寵物娛樂(lè)行業(yè)都有理論上的應(yīng)用，這是一門(mén)前沿的、將科幻變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)的、應(yīng)用型交叉學(xué)科，同時(shí)它帶來(lái)的相關(guān)社會(huì)倫理問(wèn)題也需要進(jìn)行深入討論。1ZhaoQ，CuiMY，Levs

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