纖維素酶活力

1、纖維素酶活力的測定、目的學(xué)習(xí)和掌握3,事一肖罐水闕酸(DNS)由測定纖維素酶活力的愫理和方法，了解蚌舞素酶的作用特性口一、原理纖雄素能是一神多組分酹 包括G酶、Cx酣和|A-荷葡械昔酶三種主要組分“其中”酶的作用是將 天然纖維素水解成無定形纖維素.危酶的作用是將無定形纖維素蔬續(xù)水解成纖維慕替，IA-MOTSF 的作用是將纖維寡新水解成葡萄糖:纖維素酶水解纖維素產(chǎn)生的纖維二.勘、荷痢銷等還原輔能將械性條 件下的&5-二硝基水楊酸(DNS)還原，生成棕紅色的基基化剖虬 在540nm波長處有最火光吸收， 在一定范闈內(nèi)還原糖的圣與反應(yīng)液的.顏色強(qiáng)度呈比例關(guān)贏 利用比色法測定其還原槽生成的臣就可測定 虹

2、雄素醇的活土匚f 12加章液管或加洛群0.5mL; 2mL7C13&d麗 1O0mL瞄r lOOOrtiL曲址筒 50100 mLI ； SOO mLM貌杯 100 mLS： 5aOfnL*3r 1 OOOrnL*13.試劑r均為分析純)(1)誼度為ImgFmL的茍煢赭掠準(zhǔn)液將有蜘糖克恒溫干燥箱中105T下干躁至恒重，推瓣彌取100rng T 100mL小燒杯皿 川少耐蒸慌水 辯解局 移入ItMmL容址值中用蒸錦水定客皇OOrrL,充分捆勻M甌箱中保存【可用12-15天，(2二?；畭u酸CDNSJ溶推準(zhǔn)確稱取DN&.豹T- StWJmL大燒杯申.用小弘恭懦末藻解后.KASmol/L Ns OH

3、辯版隊2mL,再 場到與MeL育專1fi5g活石楹鉀削tCAKNaUO, MW=28222)的熱水群液叫 再加知站 制SKCQHr MW=94.11)和5g無水亞磕瞄 (NSp MW= 126.04),攪外辯姑 者卻后移入 1 OOOmL容訕械中用籬孺水定容至1 OOOmL.充分暮岑黔丁揀色瓶中室霞放置一周后仲用，0.05 incili- pH4.5的檸質(zhì)酸媛抻液A (0.1 mWL檸康酸都能席準(zhǔn)確滁取 5心、HjO (MW=21C.U) 21.014g 丁 5O0mL大燒杯中-用少址蒸佛水溶解后，移八1 MOmL容M曲用蒸俏水定容至1 OCOmL.充分濯勻4T旅箱中保存?zhèn)溆肂 波 0.1 m

4、ol/L 籽微酸鈉溶斜 帝確禰取 NasCeHECh -SHaO MW=29412) 29.412g T 50CmL 大 燒杯中用少h蒸惴水溶麗后，A1 000mL容地氐U 戡后山蒸儒成定容至1 OOCmL-充分泡勻.4誡箱申保存?zhèn)鋁L氫氧化鈉溶液，c (NaOH) =2mol/Lm=8g, V=100ml以上試劑配制均縮小10倍職上述A液27.12eL, B液22.38nL.充脊氾勻.日移入100mL容扯裾中即蒸懦水定容至1O0mLP充 分氾句，限為。.瀝曲土呻尋曲栓段釀覆沖魂、4冰箱中保存?zhèn)溆?，用丁祖定慮知酶活方 0.&5mnin_pH5.a的檸檬稻緩沖漁職上燃A眼2EeLB泳器.5m充分

5、翻勻后移入1OOmL容址低中用蒸慚水定容至何51L,充分 混乳即為A.05M pH50的忤媛晚受沖液4 41CM+保存?zhèn)浼∮肨測定G響柄如（5） 0.61蠕殃叩基鼾維素鈉CCMC?薛液精碑稱0.519CMC 丁仲OmL小煽杯叫0.05 mol/LpH5.C的檸瞟砌圳熱辯懈后 格入100mL容扭胞中并用0.05mol pH5.0的籽建酸蹬補(bǔ)液定容至100mL,用前充分挽凱耳冰箱 申保存番用.用于測定Ck醇活力。8）。.泌水物槌停溶液淮曲稱取。一弛水揚(yáng)酸背丁 1d0mL小燃杯電 kli0.05nlol/LpH4.5的檸檬曜沖波溶麗后，粉入 100面L容站席中并用0.05mMLfH4_5的符糠酸侵沖

6、被定窖至lOOmL充分漏勻。甲C冰籍中保存者 用.用于測定席葡柚融昔醇沽力=纖雅泰酷淹的配制乖函襪取鮮魏訴陞制剖5。附口 T 100mL小魂杯中，用小扯蒸孺水贛解后，暮入100mL.#）ffiq-f 用蒸增求定容至100吊此釀波的浪度為4幻冰箝中堤存?zhèn)溆?四.操作方法祁步驟四.操作方法科步驟葡勘笛（C）標(biāo)脫曲絨的制作眠H支洗凈烘干惘2加1L具塞刻度試管，蛹卻后接衰1加入標(biāo)推葡萄構(gòu)潞蔽和蒸惘4C配削慶 一粟列不同濃度的茍糊新辯蔽.充丹摭句后，向試管中加入1.號011_口河陶能，48勻峪澆水潛Emin, 聯(lián)出抻卻啟擔(dān)蒸懦木定容至20mL,充分混勻，在54如m波長下，快1號試曾辟波作為空白對照，調(diào)

7、零總測為此各管科液的光密度值并記錄結(jié)果。以荷苛糖告舟（叫）為橫坐標(biāo)，或?qū)?yīng)的光醪度恨 為娜.坐標(biāo)，在坐標(biāo)城匕繪制出荷啪糖標(biāo)準(zhǔn)仙姓，表1篇袖密既曲踐制作表一標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定管號012345葡萄糖/mL0.00.020.040.060.080.1蒸餾水/mL0.10.080.060.040.020.0顯色液/mL0.30.30.30.30.30.3沸水浴中煮沸顯色10min,冷卻蒸餾水/ml2.1以葡萄糖量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程。線性回歸系數(shù)應(yīng)在0.9990 以上時方可使用（否則須重做）。表二樣品的測定編號空白樣品酶液/mL0.1 （煮沸 5-10min）0.1C

8、MC/mL0.30.350C恒溫 30min顯色液/mL0.30.3沸水浴中煮沸顯色10min,冷卻蒸餾水/ml1.8圖一：標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖光吸收曲線結(jié)果分析：擬合所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=7.439X10-4X-0.00243。擬合度為0.99917。由樣品的A值，可得 三份溶液的葡萄糖含量分別為：652.5ug，648.5ug，653.9ug。所以平均含量：651.6ug。纖維素酶活力單位=651.6/0.01X30=2172 ug/mgXmin4.計算酶活力：在上述條件下，每分鐘催化纖維素水解生成L微克葡萄糖的酶量定為一個活力單位，N X0D值封應(yīng)的葡氧植量纖誰素酶活力單位=N液的稀釋倍數(shù)30 精化所用時間1一反應(yīng)酶液毫升數(shù)【思考與討論】1、在測定時為使各樣品和空白管處理一致，應(yīng)同時加入試劑，同時放入水浴中，同時取出水浴，以使反應(yīng) 得進(jìn)行程度一致。2、在測溶液的OD值之前，應(yīng)將溶液搖勻，搖勻的方法是用保鮮膜蒙住試管口，然后來回震蕩試管。DNS溶液配制時，將含DNS的NaOH溶液加到含酒石酸鉀鈉的熱水溶液中時，一定要慢倒，