妊娠子宮肌中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體的分析

1、妊娠子宮肌中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體的分析【關(guān)鍵詞】妊娠人類妊娠是一個(gè)復(fù)雜而又需機(jī)體各部分協(xié)調(diào)運(yùn)轉(zhuǎn)的過程。子宮肌層由靜息到收縮的機(jī)制很復(fù)雜，目前還在探究中。妊娠期眾多激素的變化引起人們廣泛的關(guān)注，其中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素rh近年來成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。rh是腦腸肽家族中的一種，于1955年最早發(fā)現(xiàn)于下丘腦室旁核，之后在許多外周組織中，如免疫和炎癥細(xì)胞、心臟、骨骼饑甲狀腺、皮膚、生育組織中發(fā)現(xiàn)了它的存在13。胎盤是妊娠期母體rh的主要來源。人們發(fā)現(xiàn)母體血漿rh程度隨著妊娠繼續(xù)而逐漸升高，分娩前到達(dá)頂峰，產(chǎn)后迅速下降；早產(chǎn)患者的rh峰較正常婦女提早，提示母體血漿rh程度與分娩親密相關(guān)4。rh

2、可能通過與雌激素、腎上腺皮質(zhì)激素、前列腺素和縮宮素等的互相作用，建立分娩啟動的正反響環(huán)2，5。在妊娠子宮宮底部rh發(fā)揮收縮作用，而在下段舒張子宮平滑肌，這可能與受體和或傳導(dǎo)通路不同有關(guān)6，7。本研究通過對子宮下段平滑肌層中rh受體和或亞型的研究，進(jìn)一步提醒rh在分娩過程中的作用機(jī)制。1對象與方法1.1研究對象1宮縮組：隨機(jī)抽取足月因產(chǎn)科因素行剖宮產(chǎn)、已有宮縮者，排除合并惡性腫瘤者，共15例，平均27.552436歲。2無宮縮組：隨機(jī)抽取足月因產(chǎn)科因素行剖宮產(chǎn)、無宮縮者，排除合并惡性腫瘤者，共14例，平均30.642541歲。3未妊娠組：隨機(jī)抽取因子宮肌瘤行子宮切除患者，排除合并惡性腫瘤者，共1

3、5例，平均46.594054歲。1.2主要試劑與儀器無水乙醇上海試劑一廠，三氯甲烷、異丙醇中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司，焦炭酸二乙酯dep、trizl上海華舜生物公司，dntp、lig(dt)上海生工生物工程，-lv反轉(zhuǎn)錄酶、tapdna聚合酶prega公司，核糖核酸酶抑制劑takara公司，illi-q純水制備裝置illipre公司，pr儀eppendrf公司，dna電泳槽ealte公司。1.3主要溶液的配制1dep-h2:雙蒸水1000l加dep1l，37搖動過夜，然后高壓滅菌。275%酒精：125ldeph2加375l無水乙醇，混勻至終體積500l。350tae電泳緩沖液：tris242g、

4、100l0.5l/ledtaph=0.8，加冰醋酸57.1l，用蒸餾水定容至1000l，臨用前按需用蒸餾水稀釋成1倍的工作液。1.4研究方法1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均以中位數(shù)四分位間距表示。以spss10.0軟件進(jìn)展anva方法行兩獨(dú)立樣本方差分析，以p0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1子宮肌組織rna甲醛變性凝膠電泳見圖1。圖1子宮肌組織rna甲醛變性凝膠電泳略2.2子宮肌組織gapdhrt-pr產(chǎn)物的瓊脂凝膠電泳見圖2。2.3子宮肌組織rhr1rt-pr產(chǎn)物的瓊脂凝膠電泳見圖3。2.4子宮下段肌組織rhr2rt-pr產(chǎn)物的瓊脂凝膠電泳見圖4。圖2圖5略2.5實(shí)時(shí)定量pr結(jié)果1未

5、妊娠子宮肌中rhr1rna顯著高于足月有宮縮、無宮縮子宮p0.05；足月妊娠有宮縮、無宮縮子宮肌中rhr1rna表達(dá)無明顯差異p0.05見圖5。2妊娠婦女子宮肌中rhr2rna程度較未妊娠時(shí)顯著降低p0.01；足月有宮縮、無宮縮子宮肌中rhr2rna表達(dá)無明顯差異p0.05見圖6。圖6略3討論隨著分娩啟動機(jī)制的研究進(jìn)展，人類生殖系統(tǒng)中rh及其受體的研究越來越受到關(guān)注。rh受體rhr是一種g蛋白耦聯(lián)受體。目前三種rh受體：rhr11h3和rhr22，2和2，2001年在二倍體atfish中發(fā)現(xiàn)了第三種rh受體rhr38。在人類子宮肌層中發(fā)現(xiàn)有rhr1和r2受體。胎盤中表達(dá)rhr1，而不表達(dá)rhr

6、2rna7。既往人們發(fā)現(xiàn)妊娠子宮中存在rh受體1、1、2和變異的9，非妊娠子宮中存在1和16。子宮下段rhr1rna妊娠期下降，分娩時(shí)顯著升高；宮底無變化。rhr1、rhr2蛋白定位于未妊娠及分娩子宮平滑肌上。妊娠子宮中，rhr定位于平滑肌及纖維原細(xì)胞中5，7。在本研究中，與未妊娠子宮相比，足月妊娠無宮縮、有宮縮子宮肌中rhr1rna、rhr2rna顯著降低p0.05，足月妊娠有宮縮與無宮縮子宮肌層rhr1rna、rhr2rna表達(dá)差異無顯著性p0.05。妊娠期與非妊娠期子宮平滑肌rhr1rna與rhr2rna表達(dá)有顯著差異，提示rhr1rna、rhr2rna與妊娠關(guān)系親密。妊娠期血漿rh的升

7、高，正調(diào)節(jié)子宮肌組織中的rhr蛋白表達(dá)。rhr蛋白的表達(dá)增加抑制子宮肌中rhrrna的表達(dá)。研究證明rhrrna表達(dá)下降是由環(huán)磷酸腺苷-蛋白激酶a(yliadensinenphsphate-prteinkinasea,ap-pka)旁路介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后途徑如rna降解引起的，與細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)絲裂原激活蛋白酶itgen-ativatedprteinkinase,apk旁路無關(guān)10。有學(xué)者提出，rhr1對rh的親和力比rhr2強(qiáng)，rhr2的配體是un，而不是rh，提示rhr2不直接調(diào)節(jié)分娩時(shí)母體血漿rh的變化7?？傊瑀hr1和rh、rhr2和un及它們與妊娠、分娩啟動的聯(lián)絡(luò)及其作用機(jī)制尚待更深一步的

8、研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】2diitrisgraatpuls,yaleidai,jinghen,etal.huanrtitrpinreleasinghrnereeptr:differenesinsubtypeexpressinbeteenpregnantandnnpregnantyetrial.jlinendrinletab,1998,83:2539-2544.5graatpulsdk,hillhusee.basalandinterleukin1betastiulatedprstaglandinprdutinfrultruedhuanyetrialells:differentialregulatinbyrtitrpinreleasinghrne.jlinendrinletab,1999,84:2204-2211.6alexanderpisarhik,andrzejtslinski.alternativespliingfrhr1reeptrsinhuananduseskin:identifiatinfnevariantsandtheirdifferentialexpressin.fasebj，2001，15:2754-2756.7ekarteris,dgraatpuls,