乙肝表面抗原測定課件

1、乙肝表面抗原測定組員:王安娜、李婷玉、羅夢嬌、翁博文乙肝表面抗原測定組員:王安娜、李婷玉、羅夢嬌、翁博文綜述乙型肝炎病毒：機(jī)體感染HBV后血清中首先出現(xiàn)的標(biāo)志物，可作為乙肝的早期診斷和普查HBsAg無傳染源性而有免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBs通過血液檢測是唯一檢測是否感染乙肝病毒的唯一途徑乙肝病毒是通過血液傳播，主要通過母嬰，血液和性傳播。日常生活和工作接觸不會傳播乙肝病毒。如果HBsAg、HBeAg和抗HBc三項(xiàng)陽性（即為大三陽），其血液就有高度傳染性綜述乙型肝炎病毒：凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)2.間接凝集反應(yīng)：反向間接凝集 基本原理： 將抗體致敏的紅細(xì)胞與樣本中相應(yīng)抗原作血凝試驗(yàn)，觀察紅細(xì)胞凝集

2、現(xiàn)象，用以判斷樣本中相應(yīng)抗原的有無及其效價(jià)。 凝集反應(yīng)2.間接凝集反應(yīng)：反向間接凝集 基本原理： 凝集反應(yīng)3.協(xié)同凝集反應(yīng)基本原理：以金黃色葡萄球菌為載體；將特特異性抗體先結(jié)合至金黃色葡萄球菌表面；其Fab段游離與菌體表面，遇到相應(yīng)抗原時(shí)與之結(jié)合；即可導(dǎo)致金黃色葡萄球菌凝集成塊，稱為協(xié)同凝集試驗(yàn)。 凝集反應(yīng)3.協(xié)同凝集反應(yīng)基本原理： 凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液、細(xì)胞裂解上清液及血清蛋白等）與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。參與沉淀反應(yīng)的抗原稱為：沉淀原參與沉淀反應(yīng)的抗體稱為：沉淀素 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 可溶性抗原（如細(xì)

3、菌浸出液、細(xì)凝膠沉淀試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)： 抗原或抗體這兩種成分中只有一種擴(kuò)散，將已知抗體與瓊脂混合，將抗原置于凝膠孔中，抗原則呈輻射狀擴(kuò)散，在孔的周圍與抗體結(jié)合，在比例合適的地方形成肉眼可見的沉淀環(huán)。當(dāng)抗體的濃度一定時(shí)，抗原的濃度與形成沉淀環(huán)的直徑成正比。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)： 雙向免疫擴(kuò)散是指抗原和抗體在同一凝膠內(nèi)部擴(kuò)散，彼此相遇后形成特 異性的沉淀線。該反應(yīng)是將抗原和抗體加入同一凝膠中兩個(gè)相隔一定間距的小孔內(nèi)，使兩者進(jìn)行相互擴(kuò)散。當(dāng)抗原和抗體濃度之比相適宜時(shí)，彼此相遇形成一白色弧型沉淀線。 沉淀反應(yīng)凝膠沉淀試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)： 沉淀反應(yīng)免疫電泳技術(shù)對流免疫電泳：雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)+電泳火箭免

4、疫電泳：單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)+電泳免疫電泳：雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)+區(qū)帶電泳 沉淀反應(yīng)免疫電泳技術(shù)對流免疫電泳：雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)+電泳 沉淀反應(yīng)酶標(biāo)記免疫測定技術(shù)酶標(biāo)記免疫測定技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附劑測定法簡稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。是固相酶免儀測定中最具代表性的一種既可檢測抗原又可檢測抗體3種必要的試劑：固相的抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體酶作用的底物酶聯(lián)免疫吸附劑測定法簡稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附劑測定法基本原理： 將已知抗體包被到固相載體上，使待測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原與抗體結(jié)合，然后再與酶標(biāo)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗去多余未結(jié)和成分，加底物后的顯色，根據(jù)顯

5、色反應(yīng)的強(qiáng)度確定待檢抗原的含量。雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附劑測定法基本原理：2.雙位點(diǎn)一步法 基本原理： 在雙抗體夾心法基礎(chǔ)上使用針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體，分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。測定時(shí)將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應(yīng)，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗滌后，即可加入底物，顯色后進(jìn)行抗原的定性或定量測定。酶聯(lián)免疫吸附劑測定法2.雙位點(diǎn)一步法 基本原理：酶聯(lián)免疫吸附劑測定法3.競爭法基本原理： 酶標(biāo)抗原和待檢抗原對固相抗體具有相同的結(jié)合力，在同一反應(yīng)體系中兩者競爭結(jié)合固相抗體。 若將固相抗體和酶標(biāo)抗原固定限量，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)和非酶標(biāo)抗原的分子數(shù)量和，免疫反應(yīng)后

6、，結(jié)合與固相酶標(biāo)抗原量與標(biāo)本中待檢抗原含量成反比。酶聯(lián)免疫吸附劑測定法3.競爭法基本原理：酶聯(lián)免疫吸附劑測定法熒光免疫分析技術(shù)熒光免疫分析技術(shù)熒光免疫顯微技術(shù)用熒光素標(biāo)記抗體；與特異性抗原作用；除去游離的熒光抗體，借助顯微鏡觀察；檢測固定組織上的相遇抗原或者血清中的相應(yīng)抗體。熒光免疫顯微技術(shù)1.直接法基本原理： 將特異性熒光抗體直接滴加于待檢抗原標(biāo)本上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)，檢測未知抗原。熒光免疫顯微技術(shù)1.直接法基本原理：熒光免疫顯微技術(shù)2.間接法基本原理：用熒光素標(biāo)記抗球蛋白抗體，鑒定未知抗原或未知抗體；先是未標(biāo)記抗體（一抗）與標(biāo)本中的抗原反應(yīng)；再用已標(biāo)記的二抗與一抗反應(yīng)；通過觀察熒光現(xiàn)象，

7、從而達(dá)到檢測未知抗原或抗體的目的。熒光免疫顯微技術(shù)2.間接法基本原理：熒光免疫顯微技術(shù)3.補(bǔ)體結(jié)合法基本原理：利用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的原理，用熒光素標(biāo)記抗補(bǔ)體的抗體，測定未知抗原或抗體先是標(biāo)本中的抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體復(fù)合物后，加入補(bǔ)體與之結(jié)合。再加上抗補(bǔ)體的熒光素標(biāo)記抗體，通過熒光現(xiàn)象檢測抗原或抗體熒光免疫顯微技術(shù)3.補(bǔ)體結(jié)合法基本原理：熒光免疫顯微技術(shù)放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)放射免疫基本原理： 標(biāo)記抗原（Ag*）和非標(biāo)記抗原（Ag）對特異性抗體（Ab）的競爭結(jié)合反應(yīng)放射免疫基本原理：免疫放射基本原理：以過量的放射性核素標(biāo)記抗體與待測抗原進(jìn)行的非競爭性結(jié)合反應(yīng)；待充分反應(yīng)后，除去游離的標(biāo)記抗

8、體；Ag-Ab*復(fù)合物的放射性強(qiáng)度與待測抗原呈正比關(guān)系。免疫放射基本原理：免疫放射技術(shù)類型1、單位點(diǎn)IRMA 過量標(biāo)記抗體與待測抗原反應(yīng)，形成抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合體 反應(yīng)平衡后分離剩余的標(biāo)記抗體 測定上清液的放射量（放射強(qiáng)度與待測抗原的量呈正比關(guān)系）2、雙位點(diǎn)IRMA（雙抗原夾心法） 固相抗體與待測抗原結(jié)合， 形成固相抗體-待測抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物 分離游離的標(biāo)記抗體，測定固相上的放射性強(qiáng)度免疫放射技術(shù)類型金標(biāo)記免疫技術(shù)金標(biāo)記免疫技術(shù)斑點(diǎn)免疫金層析試驗(yàn)免疫金測試區(qū)：特異抗體參照區(qū)：抗免疫金抗體斑點(diǎn)免疫金層析試驗(yàn)免疫金測試區(qū)：特異抗體參照區(qū)：抗免疫金抗體發(fā)光免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定基

9、本原理用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶來標(biāo)記抗原或抗體與固相化的抗體或抗原試劑反應(yīng)形成固相包被抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物洗滌后加入發(fā)光底物，酶催化和分解底物發(fā)光傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算出測定物的濃度 發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定基本原理 發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定 發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定 發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫測定基本原理用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體（化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物）；與待測標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原、磁顆粒性的抗原或抗體反應(yīng)；通過磁場把結(jié)合狀態(tài)（沉淀部分）和游離狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑 標(biāo)記物分離開來；加入發(fā)光促進(jìn)劑進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)；通過對發(fā)光強(qiáng)度的檢測進(jìn)行定量或定性檢測。 發(fā)光免

10、疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫測定基本原理 發(fā)光免疫技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫測定 是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。 發(fā)光免疫技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫測定 是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)新 技 術(shù)新 技 術(shù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR） FQ-PCR是一種實(shí)時(shí)定量檢測技術(shù),融匯了PCR的靈敏性、DNA雜交的特異性和光譜技術(shù)的精確定量等優(yōu)點(diǎn)?；驹硎抢肨aqDNA聚合酶的5-3外切核酸酶活性,在擴(kuò)增的同時(shí)降解雜交于擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)的探針,使連接于雜交探針的熒光淬滅基團(tuán)和熒光發(fā)射基團(tuán)分離而產(chǎn)生熒光,因此熒光強(qiáng)度的變化能反映擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR） 基因芯片 基因芯片是近幾年生命科學(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)新檢測技術(shù)，它是指固定基質(zhì)上集成各種可以作為受體的生物信息，利用受體與連接物間的反應(yīng)來進(jìn)行生物學(xué)的檢測。主要包括蛋白芯片和基因芯片。蛋白芯片是將位置和結(jié)構(gòu)已知的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原、抗體按預(yù)先設(shè)計(jì)好的方式固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上組成密集的分子排列，當(dāng)熒光、免疫金等標(biāo)記的靶分子與芯片上的探針分子結(jié)合后，通過一些定量檢測方法對標(biāo)記信號的強(qiáng)度進(jìn)行檢測，從而判斷樣品中的靶分子的數(shù)量，達(dá)到一次實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測多種生物樣品的目的?；蛐酒?基因芯片是近幾年生命34寫在最后成功的基礎(chǔ)在于好的學(xué)習(xí)習(xí)慣The foundation of success lies in