青蒿琥酯抗腫瘤作用研究課件

1、前 言前 言1.青蒿類藥物簡介青蒿素是1972年我國中醫(yī)研究院從青蒿中分離出的活性物質(zhì)以后我國科學家成功研制了比青蒿素抗瘧疾作用更強的雙氫青蒿素和青蒿琥酯等多種青蒿素類藥物。近年研究發(fā)現(xiàn)青蒿素類藥物具有抗腫瘤作用。1.青蒿類藥物簡介青蒿素是1972年我國中醫(yī)研究院從青蒿中分青蒿素類藥物的化學結(jié)構(gòu)特點：含有過氧化物橋結(jié)構(gòu)(C-O-O-C)。青蒿素類藥物的化學結(jié)構(gòu)特點：含有過氧化物橋結(jié)構(gòu)(C-O-O-Molt-4: 人淋巴母細胞白血病細胞株 Molt-4: 人淋巴母細胞白血病細胞株 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究課件我們設(shè)想：全鐵轉(zhuǎn)鐵運蛋白 + 青蒿琥酯 進行抗腫瘤實驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究課件實 驗 目

2、 的觀察全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白與青蒿琥酯聯(lián)合在體內(nèi)、體外的抗腫瘤作用。 實 驗 目 的觀察全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白與青蒿琥酯聯(lián)合在體內(nèi)、體外的抗實驗分為兩個部分： 體外-細胞學 體內(nèi)-動物學實驗分為兩個部分：細胞學實驗-材料腫瘤細胞株：HCT-8（人結(jié)腸癌細胞株）K-562（人紅白血病細胞株）MCF-7（人乳腺癌細胞株）試劑： RPMI 1640胰蛋白酶MTT（噻唑蘭）DMSO（二甲基亞砜） 5-氟脲嘧啶（5-Fu） 青蒿琥酯細胞學實驗-材料腫瘤細胞株：細胞學實驗-技術(shù)路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細胞株青蒿琥酯 空白對照全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白 計算生長的抑制率全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白測定OD值加入DMSO加入MTT氟尿嘧

3、啶青蒿琥酯細胞學實驗-技術(shù)路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細胞學實驗-統(tǒng)計學處理 IC50計算 使用SPSS軟件包的概率單位法(Probit) 組間比較 t 檢驗。細胞學實驗-統(tǒng)計學處理動 物 學 實 驗動 物 學 實 驗動物實驗-材料瘤株：小鼠肉瘤S-180。動物：昆明種小鼠（BALB/cnu裸小鼠）,體重1822g,雌雄不限，在同一批試驗中使用性別相同的小鼠。藥物：青蒿琥酯環(huán)磷酰胺(CTX)動物實驗-材料瘤株：動物學實驗-技術(shù)路線給裸鼠接種S180瘤株空白對照靜脈注射全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白計算抑瘤率加剝離瘤塊，稱瘤重處死動物CTX腹腔注射青蒿琥酯腹腔注射青蒿琥酯動物學實驗-技術(shù)路線給裸鼠

4、接種S180瘤株空白對照靜脈注射全動物學實驗-統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)分析 使用SPSS V10.0各實驗組與陰性對照組及CTX組間比較采用成組t檢驗。 動物學實驗-統(tǒng)計學處理細胞學 實驗結(jié)果與討論細胞學 實驗結(jié)果與討論結(jié)論 1 1mg/ml濃度全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白具有促進HCT-8、K562及MCF-7細胞生長的作用結(jié)論 1 1mg/ml濃度全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白具有促進HCT-8、統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05P0.05P0.05各劑量組間t檢驗：P

5、0.05各劑量組間t檢驗：P0.05各劑量組間t檢驗：P0.05與Henry等的研究結(jié)果不一致與Henry等的研究的相似點：藥物類似：化學結(jié)構(gòu)、抗瘧疾作用、毒副作用以及抗腫瘤作用細胞株：同為人惡性腫瘤細胞株使用的培養(yǎng)液相同： RPMI 1640加入的全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度相同- 1ug/ml=12.6uM結(jié)果不同，Why？與Henry等的研究結(jié)果不一致與Henry等的研究的相似點：我們的分析青蒿琥酯的抗腫瘤作用機制可能不是鐵離子介導的過氧基斷裂產(chǎn)生大量的氧自由基而殺死腫瘤細胞，而可能是其他機制。 全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白為腫瘤細胞提供了生長繁殖所需的Fe2+-促進生長 青蒿琥酯殺傷腫瘤細胞-抑制生長 聯(lián)合使用-

6、作用相互抵消我們的分析青蒿琥酯的抗腫瘤作用機制可能不是鐵離子介導的過氧基理由 一人骨髓中的造血細胞、粘膜上皮細胞均生長快、代謝旺盛，其細胞內(nèi)Fe2+的含量高。而動物學研究及臨床實踐發(fā)現(xiàn)青蒿素類藥物很安全，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯的骨髓抑制和粘膜損傷。說明青蒿素類藥物不是直接與Fe2+發(fā)生反應(yīng)而釋放出大量氧自由基。理由 一人骨髓中的造血細胞、粘膜上皮細胞均生長快、代謝旺盛，理由 二至今只有兩篇報道全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白顯著增強雙氫青蒿素對腫瘤細胞的殺傷作用的文獻，分別是： 1、1995年Henry Lai和Narendra P. Singh的 Selective cancer cell cytotoxicity f

7、rom exposure to dihydroartemisinin and holotransferrin. 2、2001年Narendra P. Singh和Henry Lai的Selective toxicity of dihydroartemisinin and holotransferrin toward human breast cancer cells.而上述2篇文獻的作者均相同。近10年未再見有類似報道。理由 二至今只有兩篇報道全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白顯著增強雙氫青蒿素對腫瘤結(jié)論4 青蒿琥酯在體內(nèi)對S180肉瘤有明顯的抗腫瘤作用結(jié)論4 青蒿琥酯在體內(nèi)對S180肉瘤有明顯的抗腫與陰性對照組比

8、較P0.05P0.05P0.05P0.05P0.01結(jié)果與文獻報道一致結(jié)果與文獻報道一致結(jié) 論 1 濃度為1mg/ml的全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白有促進HCT-8、K562和MCF-7腫瘤細胞生長的作用。 2 青蒿琥酯對人腫瘤細胞株HCT-8、K562和MCF-7具有一定的體外抑瘤作用，IC50值為1.9910.54g/ml。3 我們發(fā)現(xiàn)加用濃度為1mg/ml的全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白不能增強青蒿琥酯對HCT-8、K562和MCF-7瘤株的生長抑制作用。4 腹腔注射青蒿琥酯對小鼠S180肉瘤具有一定的抑制作用。結(jié) 論 致 謝感謝xxxxxxxx致 謝感謝xxxxxxxx謝 謝 ！謝 謝 ！細胞學實驗-技術(shù)路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細胞株青蒿琥酯 空白對照全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白 計算生長的抑制率全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白測定OD值加入DMSO加入MMT氟尿嘧啶青蒿琥酯只有細胞沒有藥物本底孔測試孔OD需減去本底OD4h，使用96孔板培養(yǎng)3h終濃度1mg/ml終濃度1mg/ml培養(yǎng)96h培養(yǎng)4h5mg/ml的MTT 10ul150ul震蕩3分鐘用全自動酶標儀于550nm波長細胞學實驗-