動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)(問題)

1、第一頁，共二十八頁。動(dòng)物細(xì)胞工程221動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第一課時(shí)第二頁，共二十八頁。動(dòng)物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞核移植是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。第三頁，共二十八頁。 注意關(guān)鍵詞: 細(xì)胞貼壁 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng)閱讀課文4446頁相關(guān)內(nèi)容第四頁，共二十八頁。 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？ 從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和繁殖。 原理是細(xì)胞增殖 （有絲分裂） 。聚焦一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程第五頁，共二十八頁。 簡述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程分離組織（低幼動(dòng)物）分散細(xì)

2、胞（胰蛋白酶）原代培養(yǎng)（細(xì)胞增殖）傳代培養(yǎng)（細(xì)胞增殖）分裝聚焦一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程第六頁，共二十八頁。動(dòng)物細(xì)胞生長特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求： 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 第七頁，共二十八頁。細(xì)胞貼壁過程那么什么是接觸抑制？第八頁，共二十八頁。接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動(dòng)物細(xì)胞生長特性部分細(xì)胞突

3、變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。第九頁，共二十八頁。無菌操作培養(yǎng)箱第十頁，共二十八頁。1、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？2、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？ 成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖，也不利于細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝廢物的排出。先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理。思考題3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mpH不同，第十一頁，共二十八頁。4、幼齡與老齡動(dòng)物的組織細(xì)胞比較，分化程度低的與分化程度高的組織細(xì)胞比較，哪一種更易于培

4、養(yǎng)？思考一下，這是什么道理？一般來說幼年動(dòng)物的組織細(xì)胞比老年動(dòng)物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力越強(qiáng)，所以更容易培養(yǎng)思考題第十二頁，共二十八頁。5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？6、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？7、如此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？易于培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，進(jìn)行生長增殖當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。將貼滿細(xì)胞壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題第十三頁，共二十八頁。8、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？9、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？10、有

5、些為何能一直傳下去？11、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展不全是思考題第十四頁，共二十八頁。12、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?050部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展思考題13、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體第十五頁，共二十八頁。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液原代

6、培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變第十六頁，共二十八頁。細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。解答概念第十七頁，共二十八頁。 多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識(shí)，思考并討論以下問題：討論1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)2.體外培

7、養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境 無菌、無毒的環(huán)境。 第十八頁，共二十八頁。1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH 36.5 +0.5度 ；PH為。4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件？第十九頁，共二十八頁。細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增

8、殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目試一試第二十頁，共二十八頁。大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）培養(yǎng)作為基因工程中的受體細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)應(yīng)用：第二十一頁，共二十八頁。1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化嗎？為什么？課后習(xí)題第二十二頁，共二十八頁。 動(dòng)物細(xì)胞特點(diǎn)？分化潛能變窄：隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細(xì)胞而言。細(xì)胞核仍具有全能性：細(xì)胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒有因細(xì)胞分化而丟失基因，因此高度分化細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有全能性想一想第二十三頁，共二十

9、八頁。 根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)? 再想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)第二十四頁，共二十八頁。 動(dòng)物核移植： 將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的 ，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的 中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。 用核移植的方法得到的動(dòng)物。克隆動(dòng)物：記一記細(xì)胞核卵母細(xì)胞第二十五頁，共二十八頁。胚胎移植細(xì)胞核移植第二十六頁，共二十八頁。供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（M中期：供質(zhì)）去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操