高效液相色譜法測(cè)定牛黃清胃丸中綠原酸的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定牛黃清胃丸中綠原酸的含量【摘要】目的：建立牛黃清胃丸的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱：AgilentTehnlgiesZRBAXExtend-184.6250,5，流動(dòng)相：甲醇-0.1l/L磷酸二氫鈉緩沖液pH=2.770：30，V/V，流速：1.0lin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：328n，柱溫：室溫22。結(jié)果：綠原酸在0.010.25gl-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好r=0.9998；平均加樣回收率為98.3%，RSD=1.4%n=6。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可適用于牛黃清胃丸的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜法牛黃清胃丸綠原酸含量測(cè)定Deterinatinfhl

2、rgeniAidinNiuhuangqinEipillsbyHPL【Abstratbjetive】TsetupaethdfrqualityntrlfNiuhuangqingeipills.ETHDHPLethdasdevelpedtquantitativedeterinatin.AgilentTehnlgiesZRBAXExtend-184.6250,5).Thebiliphaseasethanl-0.1lphsphriNaH2P4(70:30V/V).Thelunteperatureas22,theavelengthfrdetetinas328n,flrateas1.0lin-1.RESUL

3、TSThehlrgeniAid;averagefreveryrateas98.3%,andRSDas1.4%(n=6).NLUSINTheethdissiple,aurateandsuitablefritsassaying.【Keyrds】HPL;Niuhuangqingeipills;hlrgeniAid;deterinatin牛黃清胃丸為?衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)?第一冊(cè)中藥成方制劑收載的品種，由牛黃、菊花、黃芩、黃柏、桔梗、麥冬等17味中藥組成，具有清胃瀉火，潤燥通便之成效。臨床用于心胃火盛、頭暈?zāi)垦?、口舌生瘡、牙齦腫痛、乳蛾咽痛、便秘尿赤1，療效良好。處方中菊花為君藥之一，綠原酸為其主要有效成分

4、，原標(biāo)準(zhǔn)中只有顯微鑒別。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定牛黃清胃丸中綠原酸的含量，以期為該制劑的質(zhì)量提供快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)告如下。1儀器與試藥L2022A高效液相色譜儀，LASSVP色譜工作站；綠原酸對(duì)照品批號(hào)：110753-200212，由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用；牛黃清胃丸為市售樣品北京同仁堂股份同仁堂制藥廠，規(guī)格6g/丸，批號(hào)：7013189，6015504，7011172。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：AgilentTehnlgiesZRBAXExtend-184.6250

5、,5；流動(dòng)相：0.1l/L磷酸二氫鈉緩沖液取磷酸二氫鈉NaH2P42H215.6g，加水至1000l，制成0.1l/L的溶液，參加磷酸適量，使pH值為2.7-甲醇70：30，V/V；檢測(cè)波長(zhǎng)：328n；流速：1.0l.in-1；柱溫：室溫22。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)應(yīng)不低于2500。2.2溶液制備2.2.1對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取經(jīng)五氧化二磷減壓枯燥12小時(shí)以上的綠原酸對(duì)照品適量置棕色量瓶中，加水制成0.1gl-1的對(duì)照品溶液10以下保存，即得。2.2.2供試品溶液的制備取重量差異項(xiàng)下的牛黃清胃丸，剪碎，混勻，取約6g，精細(xì)稱定，置錐形瓶中，精細(xì)參加甲醇20l，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，冷卻，再

6、稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精細(xì)量取續(xù)濾液10l，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?l，浸漬3分鐘，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)鼡]去三氯甲烷，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至2l量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.45微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液2。2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備取除菊花以外的處方中其余藥材的非常之一量，按法制成大蜜丸，再按供試品溶液制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。2.3專屬性試驗(yàn)分別精細(xì)汲取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖圖1。由圖1可見，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有一樣保存時(shí)間綠原酸9.707in的色譜峰，陰性試驗(yàn)無干擾，證明本法可行。2

7、.4線性關(guān)系考察精細(xì)汲取綠原酸對(duì)照品貯備液濃度：1.0gl-1各適量，分別置于10l量瓶中，加水定容，配成濃度分別為0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25gl-1的溶液6份，搖勻，用0.45微孔濾膜過濾。精細(xì)汲取續(xù)濾液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積。以峰面積A為縱坐標(biāo)，其濃度為橫坐標(biāo)，得綠原酸的回歸方程為：A=2.1910-21.8210-2，r=0.9998n=6。結(jié)果說明，綠原酸在0.010.25gl-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系。2.5精細(xì)度和穩(wěn)定性試驗(yàn)精細(xì)汲取綠原酸對(duì)照品溶液0.10gl-110l，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，求得綠原酸溶液峰面積的相

8、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD為0.6%，說明精細(xì)度較好。取同一對(duì)照品溶液，在0、4、8、10、12h分別進(jìn)展測(cè)定，結(jié)果說明黃芩苷對(duì)照品溶液的峰面積在12h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.8%n=5。2.6重復(fù)性試驗(yàn)取供試品批號(hào)7013189，共5份，分別按“2.2.2供試品溶液的制備方法制備供試品溶液進(jìn)展測(cè)定，求得綠原酸含量的RSD為1.7%n=5，說明重復(fù)性良好。2.7加樣回收率試驗(yàn)精細(xì)稱取含量的樣品批號(hào)7013189，綠原酸含量0.0472gg-1，平均丸重5.932g丸-1適量，共6份，分別精細(xì)參加綠原酸對(duì)照品溶液適量，照“2.2.2供試品溶液的制備方法操作，得回收率試驗(yàn)溶液，依法測(cè)定，結(jié)果見表1。2.8樣品含量測(cè)定分別精細(xì)汲取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10l注入液相色譜儀，測(cè)定三批樣品中綠原酸峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算其含量n=5，結(jié)果見表2。根據(jù)三批樣品所測(cè)結(jié)果，暫定每丸牛黃清胃丸的綠原酸含量質(zhì)控定量限為0.20g。表1綠原酸加樣回收率試驗(yàn)表23批樣品含量測(cè)定結(jié)果3討論3.1通過對(duì)3批樣品中綠原酸的測(cè)定，結(jié)果說明最高含量為0.30g丸-1，最低為0.28g丸