櫻花的花粉培養(yǎng)課件

1、櫻花的花粉培養(yǎng) 班級(jí)：園藝1102小組：第八組成員：寧鑫、楊興、嚴(yán)吉、宋明昶、張智偉、李俊華一研究的目的與意義1.選材的依據(jù) 櫻花（Prunus serrulata ）原產(chǎn)北半球溫帶環(huán)喜馬拉雅山地區(qū)，在世界各地都有栽培。花每支三五朵，成傘狀花序，花瓣先端有缺刻，花色多為白色、紅色。花于3月與葉同放或葉后開花。櫻花花色幽香艷麗，櫻花花朵極其美麗，盛開時(shí)節(jié)，滿樹爛漫，如云似霞。 櫻花可以做壽司，也具有藥用、護(hù)膚和觀賞等作用。 櫻花壽司2、采用植物細(xì)胞工程方法的依據(jù)櫻花以嫁接繁殖為主，播種、扦插也可。嫁接一般選用櫻桃、山櫻桃實(shí)生苗作砧木，以優(yōu)良品種櫻花作接穗。主要采用切接，芽接則很少采用。切接在3月

2、進(jìn)行。選生長(zhǎng)健壯的1年生櫻花枝條作接穗，剪成長(zhǎng)8厘米左右的小段，每段帶2-3個(gè)飽滿的芽。砧木多取山櫻花、杏樹、櫻桃樹的實(shí)生苗。枝接在春季進(jìn)行，芽按在秋季進(jìn)行。嫁接苗約經(jīng)3-4年，即可移栽、定植。 櫻花繁殖，以往一般在春季用櫻桃作砧木，此法繁殖較費(fèi)工料費(fèi)，不適合迅速發(fā)展的園林綠化對(duì)種苗的大量需求。植物繁殖分二種，一種是營(yíng)養(yǎng)繁殖，又叫無性繁殖，包括了扦插、壓枝、嫁接和分株等四類，其優(yōu)點(diǎn)是能保持原品種的優(yōu)良品質(zhì)，生長(zhǎng)快、開花結(jié)果早。缺點(diǎn)是數(shù)量有限，需一定技術(shù)。另一種是種子繁殖，又叫有性繁殖，就是用植物的種子播種。其優(yōu)點(diǎn)是數(shù)量大，繁殖簡(jiǎn)單。其缺點(diǎn)是易發(fā)生變異、生長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)、開花結(jié)果時(shí)間慢。而且有的品種不

3、易甚至不會(huì)產(chǎn)生種子。3、國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展自從Guha和Maheshwari(1964)首次報(bào)道毛蔓陀羅（Datura MetelL）花藥培養(yǎng)獲得單倍體植株以來，花粉培養(yǎng)已成為獲得單倍體及純合體的有效途徑?；ǚ叟囵B(yǎng)是在花藥培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的技術(shù)。它無論對(duì)遺傳基礎(chǔ)理論的研究，還是對(duì)單細(xì)胞育種實(shí)踐以及植物遺傳工程，都有重要意義。植物花藥/花粉培養(yǎng)歷史Guha和Maheshwari （1964） 曼陀羅花藥培養(yǎng)Nitsch 和 Norreel (1973) 煙草花粉培養(yǎng)（游離小孢子培養(yǎng)） Chu（1973）小麥花粉培養(yǎng)（早期花藥培養(yǎng)主要依靠小孢子的自然胚胎發(fā)生產(chǎn)生單倍體，能自發(fā)形成胚胎發(fā)生的基因頻

4、率較低，效率極低）80年代后期到90年代期間，花培技術(shù)迅速發(fā)展。許多作物小孢子培養(yǎng)已經(jīng)成功。十字花科、麥類、水稻、玉米等。90年代，一些先前被認(rèn)為是不易進(jìn)行小孢子培養(yǎng)的基因型也相續(xù)成功Konzak (1999) 。材料與方法3、消毒4、接種和誘導(dǎo)培養(yǎng)：將花藥接種到的花藥培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下培養(yǎng)。有時(shí)需要對(duì)花藥進(jìn)行短時(shí)間的預(yù)培養(yǎng)，然后再轉(zhuǎn)入花藥培養(yǎng)基5、分化培養(yǎng)6、加倍7、移栽花藥和花粉培養(yǎng)基本流程：預(yù)處理花藥（物理或生理逆境）收集具胚性小孢子的花藥，或離心收集胚性小孢子培養(yǎng)（充足的營(yíng)養(yǎng)、合適的溫光、或條件培養(yǎng)）形成胚狀體胚狀體轉(zhuǎn)移至固化培養(yǎng)基上”萌發(fā)”形成小植株。選擇合適的供體植株（F1？

5、）倍性鑒定或染色體加倍花粉培養(yǎng)(一)花粉的分離與純化 1、自然散落法(漂浮培養(yǎng)散落小孢子收集法) 將花藥接種在預(yù)處理液或液體培養(yǎng)基上，待花粉自動(dòng)散落后，收集培養(yǎng)。2、擠壓法 在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養(yǎng)。3、機(jī)械游離 （1）磁攪拌法 用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)液中的花藥，使花粉游離出來；（2）超速旋切法 通過攪拌器中的高速旋轉(zhuǎn)刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小孢子游離出來（此法應(yīng)用最廣）。4、小孢子純化 對(duì)上述方法獲得的小孢子混合物進(jìn)行分級(jí)過篩、梯度離心處理純化小孢子用體積分?jǐn)?shù)1的12-KI鏡檢花粉發(fā)育時(shí)期，用體積分?jǐn)?shù)70酒精和01升汞消毒后，將不同發(fā)育時(shí)期的花蕾在47的低溫下處理311

6、 d后,在超凈臺(tái)上剝離出花藥，置于加有少許經(jīng)細(xì)菌過濾器(O22m)過慮滅菌的03 toolL_1甘露醇溶液的50 mI。三角瓶中，用無菌注射器內(nèi)徑輕輕擠壓出花粉粒，5 000g離心收集花粉粒后，根據(jù)試驗(yàn)要求將收集的花粉粒在03 molL_1的甘露醇中饑餓處理13 d，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)整花粉粒密度到11045104mL-1后移入MS+1 mgL一2，4一D+2 mgL一1 NAA+05 mgL一1 KT+i00mgL-1絲氨酸+800 mgL叫谷胺酰胺+5gL-1肌醇-+-100 mgL-1馬鈴薯提取液+3蔗糖的液體培養(yǎng)基中，(251)，光照300 Ix弱光下培養(yǎng)Olympus(AH-2型)顯微鏡

7、下觀察花粉發(fā)育動(dòng)態(tài)并做統(tǒng)計(jì)和顯微照相，每處理設(shè)3次重復(fù)所用器皿和培養(yǎng)液均需高壓滅菌，試驗(yàn)在無菌操作臺(tái)上進(jìn)行具體操作影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素1花粉發(fā)育時(shí)期是影響培養(yǎng)效果的重要因素； 2花藥植株供體的生長(zhǎng)條件對(duì)花藥培養(yǎng)反應(yīng) 的影響是很大的 ； 3培養(yǎng)基是花藥培養(yǎng)中影響花粉啟動(dòng)和再分 化的重要條件，培養(yǎng)基成分是否合適往往是 花藥培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵之一。 4培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)物質(zhì)的種類會(huì)影響花粉 發(fā)育的途徑（形成愈傷組織或胚狀體）以及 影響到花藥不同倍性組織還是抑制。結(jié)果與分析21預(yù)處理對(duì)馬鈴薯花粉粒培養(yǎng)的影響黃斌181和王敬駒193分別報(bào)道了大麥和水稻花粉小孢子培養(yǎng)前，低溫和甘露醇預(yù)處理對(duì)愈傷組織的影響

8、本試驗(yàn)的研究結(jié)果表明，低溫預(yù)處理7 d和甘露醇預(yù)處理3 d的效果明顯優(yōu)于其他處理時(shí)間，其分裂頻率分別達(dá)到132和136(表1)不同時(shí)間的低溫預(yù)處理(47)、甘露醇(03toolL-1)預(yù)處理培養(yǎng)效果差異顯著，這種差異性也影響了分裂細(xì)胞后期的培養(yǎng)效果，其中低溫預(yù)處理7 d的花粉得到了6塊小細(xì)胞團(tuán)，甘露醇預(yù)處理3d的材料獲得了5塊小細(xì)胞團(tuán)新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)表明，低溫和甘露醇預(yù)處理所獲得的細(xì)胞團(tuán)數(shù)均達(dá)到1極顯著水平，花粉分裂頻率低溫處理達(dá)5顯著水平，甘露醇處理達(dá)1極顯著水平22不同發(fā)育時(shí)期的花粉粒培養(yǎng)效果供試花粉的發(fā)育時(shí)期嚴(yán)重影響著培養(yǎng)效果，選擇合適的發(fā)育時(shí)期是花粉培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵試驗(yàn)對(duì)個(gè)品種四分體時(shí)期

9、、單核期、成熟時(shí)期花粉進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個(gè)品種四分體時(shí)期的花粉都不能啟動(dòng)分化，培養(yǎng)15 d后大量褐化死亡，存活的繼續(xù)培養(yǎng)后只有極少數(shù)花粉膨大，有孢子體發(fā)育跡象，但最終沒能分裂；而成熟期花粉培養(yǎng)后活力高、膨大花粉比例高，但脫分化的比例較單核期花粉低，在培養(yǎng)后期易萌發(fā)花粉管向胚子體方向發(fā)育(表2)3個(gè)品種單核期花粉都表現(xiàn)出了孢子體發(fā)育潛力，其中唐113脫分化率達(dá)41 oA3個(gè)品種單核期與四分體、成熟期花粉的脫分化率相比具有極顯著的差異水平，試驗(yàn)說明，單核期花粉具有孢子體發(fā)育的巨大潛力品種問比較發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育時(shí)期的花粉除四分體時(shí)期外，其他發(fā)育時(shí)期的花粉其花粉脫分化頻率、培養(yǎng)30 d后膨大花粉頻率都存在差異，說明花粉培養(yǎng)存在基因性差異參考文獻(xiàn)1.觀察花的基本結(jié)構(gòu)的好材料-冬櫻花期刊論文 中學(xué)生物學(xué) -2001年6期賀燕青李學(xué)東 2.細(xì)葉美女櫻花粉培養(yǎng)液篩選的研究期刊論文 遼寧林業(yè)科技 PKU -2009年1期楊宏光孫曉梅尚德郁王亞斌 3.用櫻花粉做點(diǎn)心期