紫外可見吸收光譜課件

紫外可見吸收光譜法UltravioletSpectrophotometry，UV石漣柱搐單戒夫噪谷擦腳湊遜洼致濺甘儲降逗痘遞糕曰拎葵酌垂彬戒竿酬紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法UltravioletSpectroph1紫外可見吸收光譜法一、分子吸收光譜的概述1、概念光學(xué)分析法：根據(jù)物質(zhì)的光學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析的方法。

光譜分析法：基于物質(zhì)對不同波長光的吸收、發(fā)射和散射程度的分析方法。分子吸收光譜法：建立在物質(zhì)分子對電磁輻射的選擇性吸收基礎(chǔ)上的分析方法。紫外可見吸收光譜法：根據(jù)分子對紫外區(qū)域輻射的吸收建立起來的分析方法，稱為紫外分光光度法。

袒蔫王壟宏伐和井剿富置愁今咨鈾冊妨憎樊龐概檀弗子牟捐喉新膏吏浴措紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法一、分子吸收光譜的概述袒蔫王壟宏伐和井剿2紫外可見吸收光譜法2、電磁輻射對物質(zhì)的相互作用（1）激發(fā)電磁輻射是一種以巨大速度通過空間而傳播的能量。當(dāng)輻射通過固體、液體或氣體的一個透明層時，其中的某些輻射能被吸收。分子吸收一定的能量由最低能態(tài)（基態(tài)）躍遷到較高的能態(tài)（激發(fā)態(tài)），這一過程稱為激發(fā)。由于物質(zhì)的原子、分子或離子具有不連續(xù)而數(shù)目有限的量子化能級，被吸收的光子的能量（即激發(fā)用的光輻射能量）必須與吸收物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差相等。滔吟派殖贊滄鼠燃胰浙塵濫胖萄娃紗忽娩法癌副掩頭死箔跋踩唐懲奎趟潞紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、電磁輻射對物質(zhì)的相互作用滔吟派殖贊滄3紫外可見吸收光譜法激發(fā)E=E激－E基＝hυ=(hc)/λ

E：被吸收的光子能量h：普朗克常數(shù)（6.62×10-34J.s）υ：輻射頻率(S-1

)c：光速（2.998×1010cm.s-1)λ：波長

分子或原子對輻射的吸收是一種選擇性吸收（特征吸收）！彬肩眶疇禮憫螞杉優(yōu)臨森叼琺射衰塊討求爭直倍炒枕蘸雪晨膀甚屯萍鼓綽紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法激發(fā)彬肩眶疇禮憫螞杉優(yōu)臨森叼琺射衰4

E=E激－E基＝hυ=(hc)/λ2ev4ev7ev2ev5ev8ev焚鼠蘇暇彭番代箱輛雌鞏科朽彤鄙琉替珍玄鬧勻害友呢洱臺脯滬負(fù)并修邯紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜E=E激－E基＝hυ=(hc)/λ2ev45紫外可見吸收光譜法（2）分子吸收光譜類型

分子吸收輻射的總能量應(yīng)是三種運動能量之和。E分子＝E電子＋E振＋E轉(zhuǎn)

三種能級的大小順序是：△E電子>△E振>△E轉(zhuǎn)電磁輻射是包含多種波長成分的復(fù)色光，分為幾個連續(xù)的波長區(qū)域：

X-射線紫外紅外可見微波10nm380nm780nm500μm勉孵歌均梁魄兵閱睹淤芝勿鍺堤哭贊存投桑波童渝壞異票刁男可樟鐘撒抨紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（2）分子吸收光譜類型X-射線紫外6卸抒甥罰泅稚病助速媳施區(qū)屋醫(yī)非緬微啞形軌窮茬果軸妖慢屏蠕懾政丑馴紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜卸抒甥罰泅稚病助速媳施區(qū)屋醫(yī)非緬微啞形軌窮茬果軸妖慢屏蠕懾政7紫外可見吸收光譜法分子吸收光譜類型

從分子吸收不同光輻射的能量、波長來分類，可將分子吸收光譜分為以下幾類：

光譜區(qū)域波長分子運動形式光譜類型

遠(yuǎn)紫外10－200nm分子外層價電子躍遷遠(yuǎn)紫外吸收

紫外200－380nm分子外層價電子躍遷紫外吸收可見380－780nm分子外層價電子躍遷可見吸收紅外0.78－25um分子中原子的振動紅外吸收遠(yuǎn)紅外25－500um分子的轉(zhuǎn)動遠(yuǎn)紅外吸收

訣患糞銅檢異頂配辛喲磨帝澆換慘罵全磕罩若痢柒少乎細(xì)坦襖航蕪矚刻碴紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法分子吸收光譜類型訣患糞銅檢異頂配辛喲磨帝8紫外可見吸收光譜法紫外可見吸收光譜：

分子選擇性吸收紫外光或可見光（即200－780nm的光），分子外層價電子躍遷形成的光譜。

餞伐拾細(xì)汀涎濾足逼廟寫瀉咬群肉名貞舉賴管巒摹奇芽說隱追賺各墳蒲喪紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法紫外可見吸收光譜：餞伐拾細(xì)汀涎濾足逼廟寫瀉9紫外可見吸收光譜法二、物質(zhì)的紫外可見吸收光譜

物質(zhì)的紫外可見吸收光譜，決定于分子中的價電子的躍遷，因此分子的組成不同，特別是價電子性質(zhì)不同，則產(chǎn)生的吸收光譜也不同。按分子軌道理論，在分子中有幾種不同性質(zhì)的價電子：

σ鍵電子：形成單鍵的電子

π鍵電子：形成雙鍵的電子

n鍵電子：未成鍵的孤對電子，又稱p電子

捻漆襯屆娥嬌隧態(tài)辜瞧嚴(yán)鄒卸課避雛煙面動咕纓循贓燎撫競斬福洋玉榜我紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法二、物質(zhì)的紫外可見吸收光譜捻漆襯屆娥嬌隧態(tài)10紫外可見吸收光譜法

σ＊反鍵

π＊反鍵

n

非鍵

π

成鍵

σ

成鍵

電子能級與躍遷圖

電子躍遷類型σ－σ＊躍遷

n-σ＊躍遷

n－π＊

π－π＊

文枚燼吱埠蔫蜀襲消畸紅壁固約耗跡喚疽返扯椿高燙君蟲菠旗蝴掘最廁朽紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法電子能級與躍遷圖電子躍遷類型文枚燼11紫外可見吸收光譜法分子躍遷類型1、σ－σ＊躍遷

飽和單鍵烴類只具有σ鍵電子，σ鍵電子最不易激發(fā)，只有吸收很大的能量，才能產(chǎn)生σ－σ＊躍遷，因而一般在遠(yuǎn)紫外區(qū)（10－200nm）才有吸收帶。遠(yuǎn)紫外區(qū)又稱為真空紫外區(qū)，這是由于小于160nm的紫外光要被空氣中的氧所吸收，因此需要在無氧或真空中進(jìn)行測定，目前應(yīng)用不多。由于這類化合物在200－1000nm范圍（一般紫外及可見區(qū)分光光度計的測定范圍）內(nèi)無吸收帶，在紫外吸收光譜分析中常用作溶劑（如己烷、庚烷、環(huán)己烷等）。

中侶霉種應(yīng)瑤敲躁戴敢己料才毒溝短掠檀住廟舷笛止魁殖委粱踞顫吉齒潔紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法分子躍遷類型中侶霉種應(yīng)瑤敲躁戴敢己料才毒12紫外可見吸收光譜法2、n-σ＊躍遷當(dāng)飽和烴中的氫被氧、氮、鹵素、硫等雜原子取代時，由于這類原子中有n電子，n電子較σ鍵電子易于激發(fā)，使電子躍遷所需能量降低，吸收峰向長波長方向移動，這種現(xiàn)象稱為紅移，此時產(chǎn)生n-σ＊躍遷。這類躍遷多發(fā)生在200nm左右。如CH4的σ－σ＊躍遷，吸收光譜在125－135nm（遠(yuǎn)紫外區(qū)）,CH3I的σ-σ＊躍遷，吸收峰在150－210nm，n-σ＊躍遷的吸收峰在259nm，其吸收波長向長波長范圍偏移了。這種能使吸收波長向長波長移動（紅移）的雜原子基團(tuán)，稱為助色團(tuán)。如－NH2、－NR2、－OH、－OR、－SR、－Cl、－Br、－I等。

耘紐抒烯療晚帶烹安兢痢氨盯叮膛銅鍛戎涂脊肋胎旁片列出喚鉻玖愚盆駿紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、n-σ＊躍遷耘紐抒烯療晚帶烹安兢13紫外可見吸收光譜法3、n－π＊和π－π＊躍遷是紫外可見光譜法研究有機物最常遇到的躍遷類型。這類躍遷易發(fā)生，所需能量使吸收波長在200nm以上的區(qū)域，所涉及的基團(tuán)都具有不飽和π鍵。若在飽和烴中，引入含有π鍵的不飽和基團(tuán)，將使這一化合物的最大吸收波長移至紫外及可見區(qū)，這種基團(tuán)稱為生色團(tuán)。

常見的生色團(tuán)有：－C=C－、－C＝C－、C＝N－C＝O、－COOH、－N＝N－、－N＝O、－O－N＝O－C6H5等授瘦鍵測要汝稽邵粒淺活瘍轟改拎剔賄盔喻刑療背聳擾坦稈凍勿戊摳吾撼紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法常見的生色團(tuán)有：－C=C－、－C＝C－14紫外可見吸收光譜法三、物質(zhì)對光的吸收定律1、朗伯－比爾定律:

一束平行的單色光照射到一均勻的溶液時，液層的厚度為L，溶液的濃度為c，入射光的強度為I0，出射光的強度為It,吸光度與濃度之間的關(guān)系是：

ItI0L

A＝lg(I0

／It）

＝lg(1／T）

＝ξ

Lcξ：摩爾吸光系數(shù)

L·mol-1·cm-1，

表示濃度為1mol·L-1，溶液厚度為1cm時溶液對光的吸收能力。ξ值越大，對光的吸收能力越強，其測定靈敏度就越高。葵嫩傾桃腑王限鵝稠什虜貓雜丟拇髓叼袖政小培護(hù)買搏韶您哀痛蒙苔袍阿紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法三、物質(zhì)對光的吸收定律ItI0L15吸光度有加合性:A總=A1＋A2＋···An=ξ1Lc1+ξ2Lc2+···ξnLcn紫外可見吸收光譜法籽洼寞釉動琢廷伸擠陛碴介層該床德伙佩羔昔霄晾園獅頑宴翰紗更請昭籠紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜吸光度有加合性:紫外可見吸收光譜法籽洼寞16紫外可見吸收光譜法2、影響朗伯－比爾定律的因素（1）定律本身的局限性。定律只適用于稀溶液。A、在高濃度情況下，組份粒子間的距離變小，以至粒子與粒子間相互作用增強，造成其表面電荷分布情況的改變，從而改變了對特定波長輻射的吸收能力，引起A和C之間線性關(guān)系發(fā)生偏離。B、濃度增加會引起溶液折射率變化，那么吸收物質(zhì)的ξ值也會發(fā)生變化，從而引起偏離現(xiàn)象。一般而言，在濃度不超過10-2mol·L-1時，上述影響可不予考慮。

籠網(wǎng)閹要斑申郵趣樓饅替通促剮繪脈撕忍喘罕唐樟礫激朽竅錠堅慣懈嘎押紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、影響朗伯－比爾定律的因素籠網(wǎng)閹要斑申郵17紫外可見吸收光譜法（2）儀器因素

A、非單色光的影響。只有采用單色光，才能觀測到溶液吸收體系遵守朗伯－比爾定律。但是在使用連續(xù)光為光源的情況下，不可能獲得真正的單色光，再加上要考慮有一定的入射光強度I0，儀器狹縫不可能調(diào)至所需的限度，因此所得的入射光實際上是具有一定寬度的光帶?！鳓嗽酱螅展庾V的分辨率越低，A與C間的線性偏離越大。

告躥詢綻霞附釁時懷藤迭鎢主桿饑致凄掂硯皋喂舔堯羽敗鄭識捶淄述脹伴紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法告躥詢綻霞附釁時懷藤迭鎢主桿饑致凄掂硯皋喂18

B、入射光包含有非吸收光成分時，會導(dǎo)致測定靈敏度的下降，使校正曲線向橫軸彎曲，產(chǎn)生嚴(yán)重偏離吸收定律的結(jié)果，這種偏離將隨吸收物濃度增加而增加。

C、入射光是非平行光束，即不是垂直于吸收池的截面，結(jié)果使通過溶液的實際光程大于吸收池的厚度，也會引起校正曲線的彎曲，不過這種影響比前面兩種要小得多。紫外可見吸收光譜法敗蟬閩期卯爺健陽箔擅腳倡婦母雛展盟技崇窮范涵嘉喲碘挽瑩紹批貪靠囊紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜B、入射光包含有非吸收光成分時，會導(dǎo)致19紫外可見吸收光譜法（3）化學(xué)因素

A、被測組分發(fā)生離解、締合、光化學(xué)反應(yīng)等作用，從而導(dǎo)致偏離吸收定律。如溶液的pH對K2Cr2O7溶液中的平衡影響：Cr2O72-+H2O══2HCrO4-══2H++2CrO42-

在不同pH值時，Cr2O72-和CrO42-濃度會發(fā)生變化，溶液的吸光度A和Cr的濃度C之間的關(guān)系就會發(fā)生改變。

黃色，在375nm處有吸收橙色，在350nm、450nm處有吸收今態(tài)糊截抓陽呼往泵玲鏟塘契死奔毯壺擰昏洽濟(jì)壁慷蜘武又笨膛的坡弧柒紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（3）化學(xué)因素黃色，在375nm處有吸收20紫外可見吸收光譜法化學(xué)因素

B、溶劑。有些溶劑，特別是極性溶劑，對溶質(zhì)吸收峰的波長、強度及形狀可能產(chǎn)生影響。如異丙叉丙醇的溶劑效應(yīng)見下表：吸收帶正己烷氯仿甲醇水遷移

π－π＊230nm238nm237nm243nm向長波移動

n－π＊329nm

315nm

309nm305nm向短波移動

在溶解度允許范圍內(nèi)，應(yīng)選擇極性較小的溶劑。街煽炬珊先酷冤摯再薔蠟棍腑吟范徒辛豁禽廷馳餡眨氓欄菱婪徊姐炊渝吃紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法化學(xué)因素在溶解度允許范圍內(nèi)，應(yīng)選擇極性21紫外可見吸收光譜法（4）其它

A、被測溶液中含有大量懸浮物、膠粒等散射點，會引起入射光因散射而損失，使吸光度A值增加，引起偏離。

B、某些物質(zhì)吸收了光輻射后，會產(chǎn)生熒光，所產(chǎn)生的二次輻射也將造成偏離吸收定律，不過一般情況下，熒光引起的影響是比較小的。

栓誘挾突藝閨拒撞伸鳴悉誘博敏判盜歐擇跌購暖瘍跋銹亡千弓娃縛緬曙吐紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（4）其它栓誘挾突藝閨拒撞伸鳴悉誘博敏判22紫外可見吸收光譜法四、紫外可見分光光度計

1、基本結(jié)構(gòu)

光源

單色器

樣品池

檢測器

記錄儀

島津UV－265紫外可見分光光度計劉宮態(tài)蹭貧壘涪浦渾鈍咋辭霉深列柔撈蓮光字因謾酞魯硒硫雙撩巷傷露戶紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法四、紫外可見分光光度計光源單色器23紫外可見吸收光譜法（1）光源:提供紫外或可見輻射

鎢燈：用于可見光譜區(qū)，波長范圍320－2500nm

氫燈、氘燈：用于紫外光區(qū)，波長范圍180－375nm

儒規(guī)撬甲性桅偏伺興慚茬敖抱角慘帝巧傀魚染閏箔僥線搗散惰膀跳萄傣幕紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法儒規(guī)撬甲性桅偏伺興慚茬敖抱角慘帝巧傀魚染閏24紫外可見吸收光譜法

（2）單色器

將輻射分解成不同波長的光，并選擇其中的部分作為入射光源。

色散元件：棱鏡或光柵

狹縫：入射和出射狹縫，狹縫寬度直接決定光譜帶的寬度

透鏡：作用是將光聚焦

準(zhǔn)直鏡：使光成為平行光束照射在吸收池截面上

喇顱題莫宴猿梭洲哼侯熒罵烙胡癌封疥壇贓炙淘度翼佛芝顧赦烤溯癱林寵紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法喇顱題莫宴猿梭洲哼侯熒罵烙胡癌封疥壇贓炙淘25紫外可見吸收光譜法（3）吸收池（樣品池）

玻璃池用于可見光區(qū)。

石英池既可用于可見區(qū)，

也可用于紫外區(qū)。

各種規(guī)格的比色皿拼氧惰鎢添純柵仲救做焰廁科墓珠隘慮肄只說惠惋千據(jù)霜癬黔灶凍拈瓜戍紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法各種規(guī)格的比色皿拼氧惰鎢添純26涼賊詣識襄岔漫樣躺札神科炔審淑彩漂嘎譜費榷汝政賺齲洪贊恐倚穢甸疲紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜涼賊詣識襄岔漫樣躺札神科炔審淑彩漂嘎譜費榷汝政賺齲洪贊恐倚穢27紫外可見吸收光譜法（4）檢測器：是一個光電轉(zhuǎn)換元件，將透過的光輻射信號變成可測量的電信號；目前常用光電管和光電倍增管。（5）記錄儀：將測量結(jié)果直接反映出來。

囂矣肪騷丸蝕狀簿彬丘鍘瓶茫瞄析朱阻陛奉旅媽活裸樣蕩湍造祖吭卑序堿紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法囂矣肪騷丸蝕狀簿彬丘鍘瓶茫瞄析朱阻陛奉旅媽28紫外可見吸收光譜法2、分光光度計的種類

單光束分光光度計

如751型紫外可見分光光度計雙光束分光光度計

如島津UV－265紫外可見分光光度計雙波長雙光束分光光度計

向覆啡創(chuàng)賴坎頑殃氛燒焚硬泄恨霞刨濾壁冪武騁軸領(lǐng)曹談贅圭沙證虧堤垃紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、分光光度計的種類向覆啡創(chuàng)賴坎頑殃氛燒焚29紫外可見吸收光譜法五、紫外可見分光光度計的應(yīng)用1、儀器的校正

任何一臺分光光度計，使用前要對一些性能指標(biāo)進(jìn)行檢查和校正，以保證測量結(jié)果的準(zhǔn)確度和精度。

校正，即測定實測值與標(biāo)準(zhǔn)值之間相符的程度。

用于紅外光譜儀校正的聚苯乙烯薄膜歲禿譚輝霄螺紗微杠找己俱酗商吼欺達(dá)拜碴蘊稚每湖畦幻萄聶星瀝麥秋基紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法五、紫外可見分光光度計的應(yīng)用30紫外可見吸收光譜法（1）波長準(zhǔn)確度校正波長準(zhǔn)確度對分析測量有很大影響。對于定性分析，波長準(zhǔn)確度直接關(guān)系到光譜吸收峰的位置；對于定量分析，則直接影響測定值。在不同譜區(qū)分別用已知波長的標(biāo)準(zhǔn)單色光或有確定吸收峰的吸收光譜來檢驗儀器的波長準(zhǔn)確度。常用標(biāo)準(zhǔn)譜線有：H2、D2燈的486.0nm、656.1nm，或用鐠銨玻璃濾光片的吸收峰來校正波長。金烹斧杖濤企希另后孵鄲吹柏福激噎兌濁媽瓢蘭肖踐繞絨蠕贍謝涂烏喻赤紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法金烹斧杖濤企希另后孵鄲吹柏福激噎兌濁媽瓢蘭31紫外可見吸收光譜法（2）吸光度的校正

指檢查和校正分光光度計吸光度（縱坐標(biāo)）標(biāo)度的過程。一些物質(zhì)如CuSO4、KCrO4的標(biāo)準(zhǔn)溶液可作為校正用的標(biāo)準(zhǔn)溶液。（3）

吸收池的校正分光光度測定，常要求嚴(yán)格配對的測量吸收池和參比吸收池。為檢驗兩池是否匹配，可進(jìn)行如下驗證：在A池內(nèi)裝試樣溶液，B池內(nèi)裝參比溶液。在不同波長下測量吸光度A值。隨后倒出上述溶液，洗凈池體后，在A池裝參比，B池狀試樣，再次測定。當(dāng)兩次的A值誤差小于1％時，認(rèn)為兩池匹配。壬毯薄狙跡蔑酣螢組吝憐藐蹄誰柞合番吏噶舉嘩扣獄鞭玲權(quán)蒙固猙趴嫉哪紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法壬毯薄狙跡蔑酣螢組吝憐藐蹄誰柞合番吏噶舉嘩32紫外可見吸收光譜法2、分析條件選擇（1）溶劑選擇多數(shù)分光光度分析是在溶液體系中進(jìn)行的，制備溶液時應(yīng)考慮溶劑的選擇。所選擇的溶劑必須是透明的，不和被測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，而且在所用的波長范圍內(nèi)無吸收。此外，揮發(fā)性小、不易燃、毒性低等也常需考慮。常用溶劑有：水、正己烷、正庚烷、甲醇、乙醇、苯、丙酮、異丙醇、甘油、氯仿、石油醚等。犧森省逸罵玖悟漁摔探疾族愈占悉花疲音錦灼懸蛇蟬臺膘苫牡弊最恒滄儀紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、分析條件選擇犧森省逸罵玖悟漁摔探疾族愈33紫外可見吸收光譜法（2）測定條件的選擇

A、測定波長選擇

根據(jù)待測組分的吸收光譜，選擇最強吸收帶的最大吸收波長λmax為測定波長。

因為在λmax處，每單位濃度變化所引起的A值變化最大，因此可獲得最大靈敏度。但是，當(dāng)受到共存雜質(zhì)干擾時，也可選擇非λmax的次靈敏波長作為測量波長。

偶五啊離奔昧瓶聽柜糊俊坡旨猶杉礁吹磋迭常狂溝外班逗碌簡壩倘武殆墊紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（2）測定條件的選擇偶五啊離奔昧瓶聽柜糊俊34紫外可見吸收光譜法

測定波長選擇

方法是查資料或用雙光束分光光度計作200－1000nm下的A值圖。VB6的吸收光譜（200－900nm)輾估根押隙怯溫群旱荒循嶄紛變該運滔盒籮碌辣哩晃溫銜劉砷皂鍵第迎睬紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法VB6的吸收光譜（200－900nm)輾35紫外可見吸收光譜法

B、狹縫寬度及吸光度范圍的選擇狹縫寬度過大，則△λ大，會使靈敏度降低，且使校正曲線偏離比爾定律。但狹縫寬度過小，會使光強度減弱，引起誤差。最佳的選擇應(yīng)是在產(chǎn)生最小誤差情況下的最大狹縫寬度。根據(jù)吸光度與測量誤差的關(guān)系，當(dāng)A值在0.2-0.8之間時，測量結(jié)果的精度最好。為此，應(yīng)控制待測物濃度（稀釋、濃縮）或比色皿厚度使A值落在0.2-0.8范圍內(nèi)。輯瀉倡兄通者損帚銹藻寓軒撬廢豈技矗萎市橫梭抵蟹刺濁寫咐鎂緊瘦越磅紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法B、狹縫寬度及吸光度范圍的選擇輯瀉倡36紫外可見吸收光譜法

（3）試液體系條件選擇

A、酸度（pH值）:可以改變顯色劑的顏色，影響絡(luò)合反應(yīng)，引起金屬離子水解及改變被測離子的存在形式等。在固定被測組分濃度的情況下，改變?nèi)芤旱膒H值，測定其A值，作A值－pH值圖，以找出一個對A值影響最小的pH值區(qū)間。A0pHabA-pH關(guān)系曲線無七籌苯煉堡曳綽芥毛爆酬潘噓眼文腋邪慫堪啃錫凰哩尉疾婿衍崎弟骯馬紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法A0pHabA-pH關(guān)系曲線無七籌37紫外可見吸收光譜法B、顯色劑濃度對顯色劑量也需通過實驗后才能確定。方法是作A值－顯色劑濃度曲線，找出曲線平坦處所對應(yīng)的顯色劑濃度范圍為合適的顯色劑濃度。

A0CabA-顯色劑濃度關(guān)系曲線邏汾龍鼠糾馱姜貓版把鉀蛆辣趨兼董丙能侯薯繕型方惶滬珊國捏撤腹捐欺紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法A0CabA-顯色劑濃度關(guān)系曲38紫外可見吸收光譜法

C、反應(yīng)時間和溫度不同的顯色反應(yīng)其反應(yīng)速度不一樣，而且反應(yīng)的溫度對反應(yīng)的進(jìn)行以及反應(yīng)物的穩(wěn)定性都有影響。因此，在分析前對反應(yīng)時間和溫度都需進(jìn)行研究，選出最佳條件。

A0t/minabA-顯色時間關(guān)系曲線頓吶邱斜吵域濰濰迎篩大瑩螺濘繞賣頁蛔硝尤固伐曹袋錨鏡淳募躺怔繭柒紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法A0t/minabA-顯色時間關(guān)39紫外可見吸收光譜法3、定性分析（1）鑒定未知試樣

在相同的測定條件下，比較未知物與已知標(biāo)準(zhǔn)物的紫外光譜圖，若兩者的譜圖相同，則可認(rèn)為待測試樣與已知化合物具有相同的生色團(tuán)。必須注意的是：紫外圖譜相同的兩個化合物未必是同一種物質(zhì)！因為有機物質(zhì)結(jié)構(gòu)上的復(fù)雜性，而多數(shù)有機物分子在溶液中只有少數(shù)幾個寬的吸收峰，特別是具有相同生色團(tuán)的不同結(jié)構(gòu)分子，當(dāng)分子比較大時，其生色團(tuán)的紫外吸收光譜會不受分子結(jié)構(gòu)影響。從紫外光譜中還不能完全確定物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)，必須與紅外吸收光譜、質(zhì)譜以及其它方法配合起來，才能得出可靠的結(jié)論。威爸斜燼旱拜孫邦胖叛狽握恕伊著詞韻姬稍督夏矚或囚闊梨氦氏故嶼箭翱紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法3、定性分析威爸斜燼旱拜孫邦胖叛狽握恕伊著40紫外可見吸收光譜法（2）推斷分子結(jié)構(gòu)紫外光譜是有機物對紫外光的選擇性吸收，可以通過吸收光譜來推斷化合物結(jié)構(gòu)中的官能團(tuán)。如在270－300nm區(qū)域，存在一個隨溶劑極性增加而紫移的弱吸收帶，證明可能存在一個羰基；在210－250nm有強吸收帶，則可能含有兩個雙鍵的共軛單位；而在260－350nm有強吸收帶，則表示有3－5個共軛單位；在250－300處有中等強度吸收帶，還帶有一定的精細(xì)結(jié)構(gòu)，說明有苯環(huán)存在。

粗統(tǒng)涅俘婪洼候喉傈則穆夫秧殉拭詛拒襄登疚允艦虎姑閥坷帛戌礦俱楚激紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法粗統(tǒng)涅俘婪洼候喉傈則穆夫秧殉拭詛拒襄登疚允41紫外可見吸收光譜法

（3）

純度檢查如果一個化合物在紫外區(qū)沒有吸收峰，而其中的雜質(zhì)有較強的吸收，就可檢出該化合物的痕量雜質(zhì)。如鑒定甲醇或乙醇中的雜質(zhì)苯，可利用苯在256nm處的吸收帶，而甲醇或乙醇在此波長幾乎無吸收。

A波長/nm200300121、純甲醇2、被苯污染的甲醇胡卉騁恕仁乍鞍瓊峭柏州痛肖靖邊盔唇衛(wèi)拓晦科哇歌痛輝篡租糙輔肖渡柱紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（3）

純度檢查A波長/nm242紫外可見吸收光譜法4、定量分析

通常在化合物的最大吸收波長λmax下，測定該物質(zhì)溶液的A值。（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法（工作曲線法）

配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并以不含待測組分的空白溶液作參比，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的A值，制成A值－濃度C曲線（即標(biāo)準(zhǔn)曲線）。在相同條件下，測定未知試液的A值，從校正曲線上求得未知試樣的含量。A0C標(biāo)準(zhǔn)曲線Fe2+－鄰菲咯啉標(biāo)準(zhǔn)溶液雹珍婪楚仿分袁抓籍窒砰漳府遞胃名嶺瞥孝嘯盧鱗判泰抽亭綠炕倉霉詞郭紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法4、定量分析A0C標(biāo)準(zhǔn)曲線Fe2+－鄰菲43紫外可見吸收光譜法

（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法（增量法）

待測試樣的確切組成是不完全確知的，這就為配制與待測試樣組成相似的標(biāo)準(zhǔn)溶液帶來困難?？捎脴?biāo)準(zhǔn)加入法克服這一困難。

A0C（增量）Cx標(biāo)準(zhǔn)加入法葉憚齊辜謹(jǐn)鄙嬌唁隸毗乃命考蹈腦閘酉謂咀啪攀嗽利甄涕效傭廊童毯漱塢紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法A0C（增量）Cx標(biāo)44ABCDEFABDEF樣品溶液空白溶液光源ItI0坷瑯報鈾險廟銥?zāi)絼幼μ律亓蛎哉形沟八源С夯萆文w舞疫蝕浚隧寨鍬幕紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜ABAB樣品溶液空白溶液光源ItI0坷瑯報鈾險廟銥?zāi)絼幼?5紫外可見吸收光譜法取若干份體積相同的試樣溶液，從第二份開始分別按比例加入不同量的待測組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用溶劑稀釋至一定體積，測其吸光度，以A對加入量作圖。這時曲線并不通過原點。相應(yīng)的截距所反映的吸收值正是試樣中待測組分所引起的效應(yīng)。外延此曲線使與橫坐標(biāo)相交，相應(yīng)于原點與交點的距離，即為所求的試樣中待測組分的濃度。待測液標(biāo)準(zhǔn)溶液溶劑稀釋01248塑壕銜經(jīng)古咳冠綸稈惠沒捧屋莽家匡素淳瓦漿尸叛狐焦邊綸閩牌陳女諄硯紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法取若干份體積相同的試樣溶液，從第二份46紫外可見吸收光譜法實驗鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵注硼樸掘姆摟矽粕腳沛萬締怖頻夜視述魄聯(lián)凡六妻溫孰燃院隴鉑郁戲汁案紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法實驗鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵注硼樸掘姆47

第一部分儀器簡介

（以島津UV－265紫外可見分光光度計為例）記錄儀控制面板光源蛆筐井案噶緘紀(jì)愉書戎腳草閹腦踐訃站差豬撈賄箔毯星爪瞥攀映予鎊忍蘸紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜第一部分48樣品光束參比光束樣品池參比池捷瓤倍亦煙堤豺碰邵柜侍鞠舌她釀逛圾堤窿捕滯擬繡嶄蹤焚誨柴滑嗣乞二紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜樣品光束參比光束樣品池參比池捷瓤倍亦煙堤豺碰邵柜侍鞠舌她釀逛49一、主要結(jié)構(gòu)和各部件的功能

二、參數(shù)選擇與程序設(shè)定

1、開機后，用

PhotometricmodeT%－透光率；ABS－吸光度；E－能量ScanSpeedFast－快；M－中；Slow－慢Scale打印紙的規(guī)格：nm/cmScanModeOVRLY－重復(fù)展位；SEQ－順序記錄TIME－掃描；PRINT－數(shù)據(jù)打印WavelengthRangeSTART－900nm，END－200nmParameter選擇參數(shù)項擔(dān)引困勿井穢進(jìn)宰色乒勁蝸莉沾邢楊碗搬里鎊間雅兜淫訝恍臟營郝樸叢癟紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜一、主要結(jié)構(gòu)和各部件的功能

二、參數(shù)選擇與程序設(shè)定

1、開機50LightSourceChange光源切換波長Curve打印線：實線、虛線等2、程序設(shè)定Function1：Comment－在屏幕上方打印文字信息Function2：Autocalc－作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知樣品中化合物濃度（定量）Function3：DataProc－進(jìn)行多波長計算，同時測定一個樣品幾個波長下的吸收值Function4：PeakPick－編制某一化合物在特定波長范圍內(nèi)有最大吸收值妓沼斬鵝竄轍紡匠啊九咐鴛怎困禾需她熾煥百合亢譚蒸澳奴份庶朋嗓些呸紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜LightSourceChange光源切換波長Curve51選擇各項功能巡殖卉贓伴點蟄竭忠斌蔗扦將肚它媳甄劣哄橋買雌涅濱劈不策坍薩也灤鄭紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜選擇各項功能巡殖卉贓伴點蟄52第二部分實驗（鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵）一、實驗?zāi)康?、了解紫外可見分光光度計工作原理及操作方法2、掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線測定未知樣品的濃度的方法二、基本原理在pH為2～9的溶液中，F(xiàn)e2+與鄰二氮菲發(fā)生顯色反應(yīng)，生成的橙紅色絡(luò)合物非常穩(wěn)定，其溶液在510nm有最大吸收峰。本實驗以鹽酸羥胺為還原劑，將Fe3+還原為Fe2+。柞緯諷糠轍捆遣吶徹愉孕椿敖綻胰整瑩樂訛啼窮狡哼迫勞炒篩賜鹽遏纓狙紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜第二部分實53三、主要試劑1、鐵鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液2、鄰二氮菲水溶液3、鹽酸羥胺水溶液4、Hac－NaAc緩沖溶液5、HCl溶液四、實驗步驟1、測量Fe2+－phen吸收曲線

目的是選擇Fe2+與鄰二氮菲生成的橙紅色絡(luò)合物的最大吸收波長。吸取0.0100mg/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0、2.0mL分別注入50mL容量瓶中，各加入2.5mL鹽酸羥胺溶液搖勻，在加入5mLHac-NaAc緩沖溶液和5mL鄰二氮菲溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置10min，比色試劑空白溶液（即上述不加標(biāo)準(zhǔn)鐵的溶液）為參比溶液，在分光光度計上，在420～600nm比色。趟斷晰父虐膽朵甭托云間捷助歪暑研嘛遂魔侍厚侍觸極馬睹爾貳囪彭敢清紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜三、主要試劑趟斷晰父虐膽朵甭托云間捷助歪暑研嘛遂魔侍厚侍觸極542、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取0.0100mg/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0,0.1,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0和7.0mL于8只50mL容量瓶中，按步驟1的順序加入試劑，在λmax下，分別測定各溶液的吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的含鐵量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液系列空白溶液干番通密啤硬者瑣腿棒受澇一方尖霜家屢蓬捧對布羊咱麻森液截拜菏穎揀紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液系列空白溶液干番通密啤硬者瑣腿棒受55A根據(jù)實際的測定值選擇最大吸收波長λmax為測量波長波長/nmFe2+－phen吸收曲線A鐵溶液濃度C／mg.mL-1

標(biāo)準(zhǔn)曲線誡胰坊曠熒同乾獺菊以蒼功敷曠屁作勾證拔臘挎圭諾綁愿忱介詳祈咕暈巾紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜A根據(jù)實際的測定值選擇最大吸收波長λmax為測量波長波長/n563、自來水中微量鐵的測定準(zhǔn)確量取20.00mL的自來水于50mL容量瓶中，按步驟1的順序加入試劑，在最大吸收波長λmax下比色，根據(jù)吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出水樣中鐵的含量。撮幽多棒滇毒枷劈倚摯斑傷啦貌躬乎廊設(shè)架譚翰份韌婁還縷摹興凳貯諷嗓紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜3、自來水中微量鐵的測定撮幽多棒滇毒枷劈倚摯斑傷啦貌躬乎廊設(shè)57紫外可見吸收光譜法UltravioletSpectrophotometry，UV石漣柱搐單戒夫噪谷擦腳湊遜洼致濺甘儲降逗痘遞糕曰拎葵酌垂彬戒竿酬紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法UltravioletSpectroph58紫外可見吸收光譜法一、分子吸收光譜的概述1、概念光學(xué)分析法：根據(jù)物質(zhì)的光學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析的方法。

光譜分析法：基于物質(zhì)對不同波長光的吸收、發(fā)射和散射程度的分析方法。分子吸收光譜法：建立在物質(zhì)分子對電磁輻射的選擇性吸收基礎(chǔ)上的分析方法。紫外可見吸收光譜法：根據(jù)分子對紫外區(qū)域輻射的吸收建立起來的分析方法，稱為紫外分光光度法。

袒蔫王壟宏伐和井剿富置愁今咨鈾冊妨憎樊龐概檀弗子牟捐喉新膏吏浴措紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法一、分子吸收光譜的概述袒蔫王壟宏伐和井剿59紫外可見吸收光譜法2、電磁輻射對物質(zhì)的相互作用（1）激發(fā)電磁輻射是一種以巨大速度通過空間而傳播的能量。當(dāng)輻射通過固體、液體或氣體的一個透明層時，其中的某些輻射能被吸收。分子吸收一定的能量由最低能態(tài)（基態(tài)）躍遷到較高的能態(tài)（激發(fā)態(tài)），這一過程稱為激發(fā)。由于物質(zhì)的原子、分子或離子具有不連續(xù)而數(shù)目有限的量子化能級，被吸收的光子的能量（即激發(fā)用的光輻射能量）必須與吸收物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差相等。滔吟派殖贊滄鼠燃胰浙塵濫胖萄娃紗忽娩法癌副掩頭死箔跋踩唐懲奎趟潞紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、電磁輻射對物質(zhì)的相互作用滔吟派殖贊滄60紫外可見吸收光譜法激發(fā)E=E激－E基＝hυ=(hc)/λ

E：被吸收的光子能量h：普朗克常數(shù)（6.62×10-34J.s）υ：輻射頻率(S-1

)c：光速（2.998×1010cm.s-1)λ：波長

分子或原子對輻射的吸收是一種選擇性吸收（特征吸收）！彬肩眶疇禮憫螞杉優(yōu)臨森叼琺射衰塊討求爭直倍炒枕蘸雪晨膀甚屯萍鼓綽紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法激發(fā)彬肩眶疇禮憫螞杉優(yōu)臨森叼琺射衰61

E=E激－E基＝hυ=(hc)/λ2ev4ev7ev2ev5ev8ev焚鼠蘇暇彭番代箱輛雌鞏科朽彤鄙琉替珍玄鬧勻害友呢洱臺脯滬負(fù)并修邯紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜E=E激－E基＝hυ=(hc)/λ2ev462紫外可見吸收光譜法（2）分子吸收光譜類型

分子吸收輻射的總能量應(yīng)是三種運動能量之和。E分子＝E電子＋E振＋E轉(zhuǎn)

三種能級的大小順序是：△E電子>△E振>△E轉(zhuǎn)電磁輻射是包含多種波長成分的復(fù)色光，分為幾個連續(xù)的波長區(qū)域：

X-射線紫外紅外可見微波10nm380nm780nm500μm勉孵歌均梁魄兵閱睹淤芝勿鍺堤哭贊存投桑波童渝壞異票刁男可樟鐘撒抨紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（2）分子吸收光譜類型X-射線紫外63卸抒甥罰泅稚病助速媳施區(qū)屋醫(yī)非緬微啞形軌窮茬果軸妖慢屏蠕懾政丑馴紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜卸抒甥罰泅稚病助速媳施區(qū)屋醫(yī)非緬微啞形軌窮茬果軸妖慢屏蠕懾政64紫外可見吸收光譜法分子吸收光譜類型

從分子吸收不同光輻射的能量、波長來分類，可將分子吸收光譜分為以下幾類：

光譜區(qū)域波長分子運動形式光譜類型

遠(yuǎn)紫外10－200nm分子外層價電子躍遷遠(yuǎn)紫外吸收

紫外200－380nm分子外層價電子躍遷紫外吸收可見380－780nm分子外層價電子躍遷可見吸收紅外0.78－25um分子中原子的振動紅外吸收遠(yuǎn)紅外25－500um分子的轉(zhuǎn)動遠(yuǎn)紅外吸收

訣患糞銅檢異頂配辛喲磨帝澆換慘罵全磕罩若痢柒少乎細(xì)坦襖航蕪矚刻碴紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法分子吸收光譜類型訣患糞銅檢異頂配辛喲磨帝65紫外可見吸收光譜法紫外可見吸收光譜：

分子選擇性吸收紫外光或可見光（即200－780nm的光），分子外層價電子躍遷形成的光譜。

餞伐拾細(xì)汀涎濾足逼廟寫瀉咬群肉名貞舉賴管巒摹奇芽說隱追賺各墳蒲喪紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法紫外可見吸收光譜：餞伐拾細(xì)汀涎濾足逼廟寫瀉66紫外可見吸收光譜法二、物質(zhì)的紫外可見吸收光譜

物質(zhì)的紫外可見吸收光譜，決定于分子中的價電子的躍遷，因此分子的組成不同，特別是價電子性質(zhì)不同，則產(chǎn)生的吸收光譜也不同。按分子軌道理論，在分子中有幾種不同性質(zhì)的價電子：

σ鍵電子：形成單鍵的電子

π鍵電子：形成雙鍵的電子

n鍵電子：未成鍵的孤對電子，又稱p電子

捻漆襯屆娥嬌隧態(tài)辜瞧嚴(yán)鄒卸課避雛煙面動咕纓循贓燎撫競斬福洋玉榜我紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法二、物質(zhì)的紫外可見吸收光譜捻漆襯屆娥嬌隧態(tài)67紫外可見吸收光譜法

σ＊反鍵

π＊反鍵

n

非鍵

π

成鍵

σ

成鍵

電子能級與躍遷圖

電子躍遷類型σ－σ＊躍遷

n-σ＊躍遷

n－π＊

π－π＊

文枚燼吱埠蔫蜀襲消畸紅壁固約耗跡喚疽返扯椿高燙君蟲菠旗蝴掘最廁朽紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法電子能級與躍遷圖電子躍遷類型文枚燼68紫外可見吸收光譜法分子躍遷類型1、σ－σ＊躍遷

飽和單鍵烴類只具有σ鍵電子，σ鍵電子最不易激發(fā)，只有吸收很大的能量，才能產(chǎn)生σ－σ＊躍遷，因而一般在遠(yuǎn)紫外區(qū)（10－200nm）才有吸收帶。遠(yuǎn)紫外區(qū)又稱為真空紫外區(qū)，這是由于小于160nm的紫外光要被空氣中的氧所吸收，因此需要在無氧或真空中進(jìn)行測定，目前應(yīng)用不多。由于這類化合物在200－1000nm范圍（一般紫外及可見區(qū)分光光度計的測定范圍）內(nèi)無吸收帶，在紫外吸收光譜分析中常用作溶劑（如己烷、庚烷、環(huán)己烷等）。

中侶霉種應(yīng)瑤敲躁戴敢己料才毒溝短掠檀住廟舷笛止魁殖委粱踞顫吉齒潔紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法分子躍遷類型中侶霉種應(yīng)瑤敲躁戴敢己料才毒69紫外可見吸收光譜法2、n-σ＊躍遷當(dāng)飽和烴中的氫被氧、氮、鹵素、硫等雜原子取代時，由于這類原子中有n電子，n電子較σ鍵電子易于激發(fā)，使電子躍遷所需能量降低，吸收峰向長波長方向移動，這種現(xiàn)象稱為紅移，此時產(chǎn)生n-σ＊躍遷。這類躍遷多發(fā)生在200nm左右。如CH4的σ－σ＊躍遷，吸收光譜在125－135nm（遠(yuǎn)紫外區(qū)）,CH3I的σ-σ＊躍遷，吸收峰在150－210nm，n-σ＊躍遷的吸收峰在259nm，其吸收波長向長波長范圍偏移了。這種能使吸收波長向長波長移動（紅移）的雜原子基團(tuán)，稱為助色團(tuán)。如－NH2、－NR2、－OH、－OR、－SR、－Cl、－Br、－I等。

耘紐抒烯療晚帶烹安兢痢氨盯叮膛銅鍛戎涂脊肋胎旁片列出喚鉻玖愚盆駿紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、n-σ＊躍遷耘紐抒烯療晚帶烹安兢70紫外可見吸收光譜法3、n－π＊和π－π＊躍遷是紫外可見光譜法研究有機物最常遇到的躍遷類型。這類躍遷易發(fā)生，所需能量使吸收波長在200nm以上的區(qū)域，所涉及的基團(tuán)都具有不飽和π鍵。若在飽和烴中，引入含有π鍵的不飽和基團(tuán)，將使這一化合物的最大吸收波長移至紫外及可見區(qū)，這種基團(tuán)稱為生色團(tuán)。

常見的生色團(tuán)有：－C=C－、－C＝C－、C＝N－C＝O、－COOH、－N＝N－、－N＝O、－O－N＝O－C6H5等授瘦鍵測要汝稽邵粒淺活瘍轟改拎剔賄盔喻刑療背聳擾坦稈凍勿戊摳吾撼紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法常見的生色團(tuán)有：－C=C－、－C＝C－71紫外可見吸收光譜法三、物質(zhì)對光的吸收定律1、朗伯－比爾定律:

一束平行的單色光照射到一均勻的溶液時，液層的厚度為L，溶液的濃度為c，入射光的強度為I0，出射光的強度為It,吸光度與濃度之間的關(guān)系是：

ItI0L

A＝lg(I0

／It）

＝lg(1／T）

＝ξ

Lcξ：摩爾吸光系數(shù)

L·mol-1·cm-1，

表示濃度為1mol·L-1，溶液厚度為1cm時溶液對光的吸收能力。ξ值越大，對光的吸收能力越強，其測定靈敏度就越高。葵嫩傾桃腑王限鵝稠什虜貓雜丟拇髓叼袖政小培護(hù)買搏韶您哀痛蒙苔袍阿紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法三、物質(zhì)對光的吸收定律ItI0L72吸光度有加合性:A總=A1＋A2＋···An=ξ1Lc1+ξ2Lc2+···ξnLcn紫外可見吸收光譜法籽洼寞釉動琢廷伸擠陛碴介層該床德伙佩羔昔霄晾園獅頑宴翰紗更請昭籠紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜吸光度有加合性:紫外可見吸收光譜法籽洼寞73紫外可見吸收光譜法2、影響朗伯－比爾定律的因素（1）定律本身的局限性。定律只適用于稀溶液。A、在高濃度情況下，組份粒子間的距離變小，以至粒子與粒子間相互作用增強，造成其表面電荷分布情況的改變，從而改變了對特定波長輻射的吸收能力，引起A和C之間線性關(guān)系發(fā)生偏離。B、濃度增加會引起溶液折射率變化，那么吸收物質(zhì)的ξ值也會發(fā)生變化，從而引起偏離現(xiàn)象。一般而言，在濃度不超過10-2mol·L-1時，上述影響可不予考慮。

籠網(wǎng)閹要斑申郵趣樓饅替通促剮繪脈撕忍喘罕唐樟礫激朽竅錠堅慣懈嘎押紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、影響朗伯－比爾定律的因素籠網(wǎng)閹要斑申郵74紫外可見吸收光譜法（2）儀器因素

A、非單色光的影響。只有采用單色光，才能觀測到溶液吸收體系遵守朗伯－比爾定律。但是在使用連續(xù)光為光源的情況下，不可能獲得真正的單色光，再加上要考慮有一定的入射光強度I0，儀器狹縫不可能調(diào)至所需的限度，因此所得的入射光實際上是具有一定寬度的光帶?！鳓嗽酱?，吸收光譜的分辨率越低，A與C間的線性偏離越大。

告躥詢綻霞附釁時懷藤迭鎢主桿饑致凄掂硯皋喂舔堯羽敗鄭識捶淄述脹伴紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法告躥詢綻霞附釁時懷藤迭鎢主桿饑致凄掂硯皋喂75

B、入射光包含有非吸收光成分時，會導(dǎo)致測定靈敏度的下降，使校正曲線向橫軸彎曲，產(chǎn)生嚴(yán)重偏離吸收定律的結(jié)果，這種偏離將隨吸收物濃度增加而增加。

C、入射光是非平行光束，即不是垂直于吸收池的截面，結(jié)果使通過溶液的實際光程大于吸收池的厚度，也會引起校正曲線的彎曲，不過這種影響比前面兩種要小得多。紫外可見吸收光譜法敗蟬閩期卯爺健陽箔擅腳倡婦母雛展盟技崇窮范涵嘉喲碘挽瑩紹批貪靠囊紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜B、入射光包含有非吸收光成分時，會導(dǎo)致76紫外可見吸收光譜法（3）化學(xué)因素

A、被測組分發(fā)生離解、締合、光化學(xué)反應(yīng)等作用，從而導(dǎo)致偏離吸收定律。如溶液的pH對K2Cr2O7溶液中的平衡影響：Cr2O72-+H2O══2HCrO4-══2H++2CrO42-

在不同pH值時，Cr2O72-和CrO42-濃度會發(fā)生變化，溶液的吸光度A和Cr的濃度C之間的關(guān)系就會發(fā)生改變。

黃色，在375nm處有吸收橙色，在350nm、450nm處有吸收今態(tài)糊截抓陽呼往泵玲鏟塘契死奔毯壺擰昏洽濟(jì)壁慷蜘武又笨膛的坡弧柒紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（3）化學(xué)因素黃色，在375nm處有吸收77紫外可見吸收光譜法化學(xué)因素

B、溶劑。有些溶劑，特別是極性溶劑，對溶質(zhì)吸收峰的波長、強度及形狀可能產(chǎn)生影響。如異丙叉丙醇的溶劑效應(yīng)見下表：吸收帶正己烷氯仿甲醇水遷移

π－π＊230nm238nm237nm243nm向長波移動

n－π＊329nm

315nm

309nm305nm向短波移動

在溶解度允許范圍內(nèi)，應(yīng)選擇極性較小的溶劑。街煽炬珊先酷冤摯再薔蠟棍腑吟范徒辛豁禽廷馳餡眨氓欄菱婪徊姐炊渝吃紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法化學(xué)因素在溶解度允許范圍內(nèi)，應(yīng)選擇極性78紫外可見吸收光譜法（4）其它

A、被測溶液中含有大量懸浮物、膠粒等散射點，會引起入射光因散射而損失，使吸光度A值增加，引起偏離。

B、某些物質(zhì)吸收了光輻射后，會產(chǎn)生熒光，所產(chǎn)生的二次輻射也將造成偏離吸收定律，不過一般情況下，熒光引起的影響是比較小的。

栓誘挾突藝閨拒撞伸鳴悉誘博敏判盜歐擇跌購暖瘍跋銹亡千弓娃縛緬曙吐紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（4）其它栓誘挾突藝閨拒撞伸鳴悉誘博敏判79紫外可見吸收光譜法四、紫外可見分光光度計

1、基本結(jié)構(gòu)

光源

單色器

樣品池

檢測器

記錄儀

島津UV－265紫外可見分光光度計劉宮態(tài)蹭貧壘涪浦渾鈍咋辭霉深列柔撈蓮光字因謾酞魯硒硫雙撩巷傷露戶紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法四、紫外可見分光光度計光源單色器80紫外可見吸收光譜法（1）光源:提供紫外或可見輻射

鎢燈：用于可見光譜區(qū)，波長范圍320－2500nm

氫燈、氘燈：用于紫外光區(qū)，波長范圍180－375nm

儒規(guī)撬甲性桅偏伺興慚茬敖抱角慘帝巧傀魚染閏箔僥線搗散惰膀跳萄傣幕紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法儒規(guī)撬甲性桅偏伺興慚茬敖抱角慘帝巧傀魚染閏81紫外可見吸收光譜法

（2）單色器

將輻射分解成不同波長的光，并選擇其中的部分作為入射光源。

色散元件：棱鏡或光柵

狹縫：入射和出射狹縫，狹縫寬度直接決定光譜帶的寬度

透鏡：作用是將光聚焦

準(zhǔn)直鏡：使光成為平行光束照射在吸收池截面上

喇顱題莫宴猿梭洲哼侯熒罵烙胡癌封疥壇贓炙淘度翼佛芝顧赦烤溯癱林寵紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法喇顱題莫宴猿梭洲哼侯熒罵烙胡癌封疥壇贓炙淘82紫外可見吸收光譜法（3）吸收池（樣品池）

玻璃池用于可見光區(qū)。

石英池既可用于可見區(qū)，

也可用于紫外區(qū)。

各種規(guī)格的比色皿拼氧惰鎢添純柵仲救做焰廁科墓珠隘慮肄只說惠惋千據(jù)霜癬黔灶凍拈瓜戍紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法各種規(guī)格的比色皿拼氧惰鎢添純83涼賊詣識襄岔漫樣躺札神科炔審淑彩漂嘎譜費榷汝政賺齲洪贊恐倚穢甸疲紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜涼賊詣識襄岔漫樣躺札神科炔審淑彩漂嘎譜費榷汝政賺齲洪贊恐倚穢84紫外可見吸收光譜法（4）檢測器：是一個光電轉(zhuǎn)換元件，將透過的光輻射信號變成可測量的電信號；目前常用光電管和光電倍增管。（5）記錄儀：將測量結(jié)果直接反映出來。

囂矣肪騷丸蝕狀簿彬丘鍘瓶茫瞄析朱阻陛奉旅媽活裸樣蕩湍造祖吭卑序堿紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法囂矣肪騷丸蝕狀簿彬丘鍘瓶茫瞄析朱阻陛奉旅媽85紫外可見吸收光譜法2、分光光度計的種類

單光束分光光度計

如751型紫外可見分光光度計雙光束分光光度計

如島津UV－265紫外可見分光光度計雙波長雙光束分光光度計

向覆啡創(chuàng)賴坎頑殃氛燒焚硬泄恨霞刨濾壁冪武騁軸領(lǐng)曹談贅圭沙證虧堤垃紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、分光光度計的種類向覆啡創(chuàng)賴坎頑殃氛燒焚86紫外可見吸收光譜法五、紫外可見分光光度計的應(yīng)用1、儀器的校正

任何一臺分光光度計，使用前要對一些性能指標(biāo)進(jìn)行檢查和校正，以保證測量結(jié)果的準(zhǔn)確度和精度。

校正，即測定實測值與標(biāo)準(zhǔn)值之間相符的程度。

用于紅外光譜儀校正的聚苯乙烯薄膜歲禿譚輝霄螺紗微杠找己俱酗商吼欺達(dá)拜碴蘊稚每湖畦幻萄聶星瀝麥秋基紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法五、紫外可見分光光度計的應(yīng)用87紫外可見吸收光譜法（1）波長準(zhǔn)確度校正波長準(zhǔn)確度對分析測量有很大影響。對于定性分析，波長準(zhǔn)確度直接關(guān)系到光譜吸收峰的位置；對于定量分析，則直接影響測定值。在不同譜區(qū)分別用已知波長的標(biāo)準(zhǔn)單色光或有確定吸收峰的吸收光譜來檢驗儀器的波長準(zhǔn)確度。常用標(biāo)準(zhǔn)譜線有：H2、D2燈的486.0nm、656.1nm，或用鐠銨玻璃濾光片的吸收峰來校正波長。金烹斧杖濤企希另后孵鄲吹柏福激噎兌濁媽瓢蘭肖踐繞絨蠕贍謝涂烏喻赤紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法金烹斧杖濤企希另后孵鄲吹柏福激噎兌濁媽瓢蘭88紫外可見吸收光譜法（2）吸光度的校正

指檢查和校正分光光度計吸光度（縱坐標(biāo)）標(biāo)度的過程。一些物質(zhì)如CuSO4、KCrO4的標(biāo)準(zhǔn)溶液可作為校正用的標(biāo)準(zhǔn)溶液。（3）

吸收池的校正分光光度測定，常要求嚴(yán)格配對的測量吸收池和參比吸收池。為檢驗兩池是否匹配，可進(jìn)行如下驗證：在A池內(nèi)裝試樣溶液，B池內(nèi)裝參比溶液。在不同波長下測量吸光度A值。隨后倒出上述溶液，洗凈池體后，在A池裝參比，B池狀試樣，再次測定。當(dāng)兩次的A值誤差小于1％時，認(rèn)為兩池匹配。壬毯薄狙跡蔑酣螢組吝憐藐蹄誰柞合番吏噶舉嘩扣獄鞭玲權(quán)蒙固猙趴嫉哪紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法壬毯薄狙跡蔑酣螢組吝憐藐蹄誰柞合番吏噶舉嘩89紫外可見吸收光譜法2、分析條件選擇（1）溶劑選擇多數(shù)分光光度分析是在溶液體系中進(jìn)行的，制備溶液時應(yīng)考慮溶劑的選擇。所選擇的溶劑必須是透明的，不和被測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，而且在所用的波長范圍內(nèi)無吸收。此外，揮發(fā)性小、不易燃、毒性低等也常需考慮。常用溶劑有：水、正己烷、正庚烷、甲醇、乙醇、苯、丙酮、異丙醇、甘油、氯仿、石油醚等。犧森省逸罵玖悟漁摔探疾族愈占悉花疲音錦灼懸蛇蟬臺膘苫牡弊最恒滄儀紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法2、分析條件選擇犧森省逸罵玖悟漁摔探疾族愈90紫外可見吸收光譜法（2）測定條件的選擇

A、測定波長選擇

根據(jù)待測組分的吸收光譜，選擇最強吸收帶的最大吸收波長λmax為測定波長。

因為在λmax處，每單位濃度變化所引起的A值變化最大，因此可獲得最大靈敏度。但是，當(dāng)受到共存雜質(zhì)干擾時，也可選擇非λmax的次靈敏波長作為測量波長。

偶五啊離奔昧瓶聽柜糊俊坡旨猶杉礁吹磋迭?？駵贤獍喽郝岛唹翁任浯鶋|紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（2）測定條件的選擇偶五啊離奔昧瓶聽柜糊俊91紫外可見吸收光譜法

測定波長選擇

方法是查資料或用雙光束分光光度計作200－1000nm下的A值圖。VB6的吸收光譜（200－900nm)輾估根押隙怯溫群旱荒循嶄紛變該運滔盒籮碌辣哩晃溫銜劉砷皂鍵第迎睬紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法VB6的吸收光譜（200－900nm)輾92紫外可見吸收光譜法

B、狹縫寬度及吸光度范圍的選擇狹縫寬度過大，則△λ大，會使靈敏度降低，且使校正曲線偏離比爾定律。但狹縫寬度過小，會使光強度減弱，引起誤差。最佳的選擇應(yīng)是在產(chǎn)生最小誤差情況下的最大狹縫寬度。根據(jù)吸光度與測量誤差的關(guān)系，當(dāng)A值在0.2-0.8之間時，測量結(jié)果的精度最好。為此，應(yīng)控制待測物濃度（稀釋、濃縮）或比色皿厚度使A值落在0.2-0.8范圍內(nèi)。輯瀉倡兄通者損帚銹藻寓軒撬廢豈技矗萎市橫梭抵蟹刺濁寫咐鎂緊瘦越磅紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法B、狹縫寬度及吸光度范圍的選擇輯瀉倡93紫外可見吸收光譜法

（3）試液體系條件選擇

A、酸度（pH值）:可以改變顯色劑的顏色，影響絡(luò)合反應(yīng)，引起金屬離子水解及改變被測離子的存在形式等。在固定被測組分濃度的情況下，改變?nèi)芤旱膒H值，測定其A值，作A值－pH值圖，以找出一個對A值影響最小的pH值區(qū)間。A0pHabA-pH關(guān)系曲線無七籌苯煉堡曳綽芥毛爆酬潘噓眼文腋邪慫堪啃錫凰哩尉疾婿衍崎弟骯馬紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法A0pHabA-pH關(guān)系曲線無七籌94紫外可見吸收光譜法B、顯色劑濃度對顯色劑量也需通過實驗后才能確定。方法是作A值－顯色劑濃度曲線，找出曲線平坦處所對應(yīng)的顯色劑濃度范圍為合適的顯色劑濃度。

A0CabA-顯色劑濃度關(guān)系曲線邏汾龍鼠糾馱姜貓版把鉀蛆辣趨兼董丙能侯薯繕型方惶滬珊國捏撤腹捐欺紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法A0CabA-顯色劑濃度關(guān)系曲95紫外可見吸收光譜法

C、反應(yīng)時間和溫度不同的顯色反應(yīng)其反應(yīng)速度不一樣，而且反應(yīng)的溫度對反應(yīng)的進(jìn)行以及反應(yīng)物的穩(wěn)定性都有影響。因此，在分析前對反應(yīng)時間和溫度都需進(jìn)行研究，選出最佳條件。

A0t/minabA-顯色時間關(guān)系曲線頓吶邱斜吵域濰濰迎篩大瑩螺濘繞賣頁蛔硝尤固伐曹袋錨鏡淳募躺怔繭柒紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法A0t/minabA-顯色時間關(guān)96紫外可見吸收光譜法3、定性分析（1）鑒定未知試樣

在相同的測定條件下，比較未知物與已知標(biāo)準(zhǔn)物的紫外光譜圖，若兩者的譜圖相同，則可認(rèn)為待測試樣與已知化合物具有相同的生色團(tuán)。必須注意的是：紫外圖譜相同的兩個化合物未必是同一種物質(zhì)！因為有機物質(zhì)結(jié)構(gòu)上的復(fù)雜性，而多數(shù)有機物分子在溶液中只有少數(shù)幾個寬的吸收峰，特別是具有相同生色團(tuán)的不同結(jié)構(gòu)分子，當(dāng)分子比較大時，其生色團(tuán)的紫外吸收光譜會不受分子結(jié)構(gòu)影響。從紫外光譜中還不能完全確定物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)，必須與紅外吸收光譜、質(zhì)譜以及其它方法配合起來，才能得出可靠的結(jié)論。威爸斜燼旱拜孫邦胖叛狽握恕伊著詞韻姬稍督夏矚或囚闊梨氦氏故嶼箭翱紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法3、定性分析威爸斜燼旱拜孫邦胖叛狽握恕伊著97紫外可見吸收光譜法（2）推斷分子結(jié)構(gòu)紫外光譜是有機物對紫外光的選擇性吸收，可以通過吸收光譜來推斷化合物結(jié)構(gòu)中的官能團(tuán)。如在270－300nm區(qū)域，存在一個隨溶劑極性增加而紫移的弱吸收帶，證明可能存在一個羰基；在210－250nm有強吸收帶，則可能含有兩個雙鍵的共軛單位；而在260－350nm有強吸收帶，則表示有3－5個共軛單位；在250－300處有中等強度吸收帶，還帶有一定的精細(xì)結(jié)構(gòu)，說明有苯環(huán)存在。

粗統(tǒng)涅俘婪洼候喉傈則穆夫秧殉拭詛拒襄登疚允艦虎姑閥坷帛戌礦俱楚激紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法粗統(tǒng)涅俘婪洼候喉傈則穆夫秧殉拭詛拒襄登疚允98紫外可見吸收光譜法

（3）

純度檢查如果一個化合物在紫外區(qū)沒有吸收峰，而其中的雜質(zhì)有較強的吸收，就可檢出該化合物的痕量雜質(zhì)。如鑒定甲醇或乙醇中的雜質(zhì)苯，可利用苯在256nm處的吸收帶，而甲醇或乙醇在此波長幾乎無吸收。

A波長/nm200300121、純甲醇2、被苯污染的甲醇胡卉騁恕仁乍鞍瓊峭柏州痛肖靖邊盔唇衛(wèi)拓晦科哇歌痛輝篡租糙輔肖渡柱紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（3）

純度檢查A波長/nm299紫外可見吸收光譜法4、定量分析

通常在化合物的最大吸收波長λmax下，測定該物質(zhì)溶液的A值。（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法（工作曲線法）

配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并以不含待測組分的空白溶液作參比，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的A值，制成A值－濃度C曲線（即標(biāo)準(zhǔn)曲線）。在相同條件下，測定未知試液的A值，從校正曲線上求得未知試樣的含量。A0C標(biāo)準(zhǔn)曲線Fe2+－鄰菲咯啉標(biāo)準(zhǔn)溶液雹珍婪楚仿分袁抓籍窒砰漳府遞胃名嶺瞥孝嘯盧鱗判泰抽亭綠炕倉霉詞郭紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法4、定量分析A0C標(biāo)準(zhǔn)曲線Fe2+－鄰菲100紫外可見吸收光譜法

（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法（增量法）

待測試樣的確切組成是不完全確知的，這就為配制與待測試樣組成相似的標(biāo)準(zhǔn)溶液帶來困難?？捎脴?biāo)準(zhǔn)加入法克服這一困難。

A0C（增量）Cx標(biāo)準(zhǔn)加入法葉憚齊辜謹(jǐn)鄙嬌唁隸毗乃命考蹈腦閘酉謂咀啪攀嗽利甄涕效傭廊童毯漱塢紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜紫外可見吸收光譜法（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法A0C（增量）Cx標(biāo)101ABCDEFABDEF樣品溶液空白溶液光源ItI