纖維蛋白原測(cè)定

關(guān)于纖維蛋白原測(cè)定第1頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五纖維蛋白原（HumanFibrinogen）一種由肝臟合成的具有凝血功能的蛋白質(zhì)，是纖維蛋白的前體。分子量340，000，半衰期4～6日。血漿中參考值2～4克/升。纖維蛋白原由α、β、γ三對(duì)不同多肽鏈所組成，多肽鏈間以二硫鍵相連。第2頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五在凝血酶作用下，α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽，生成纖維蛋白單體。在此過(guò)程中，由于釋放了酸性多肽，負(fù)電性降低，單體易于聚合成纖維蛋白多聚體。但此時(shí)單體之間借氫鍵與疏水鍵相連，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。進(jìn)一步在Ca+2與活化的ⅩⅢ因子作用下，單體之間以共價(jià)鍵相連，則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊，完成凝血過(guò)程。肝功能嚴(yán)重障礙或先天性缺乏，均可使血漿纖維蛋白原濃度下降，嚴(yán)重時(shí)可有出血傾向。第3頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五血漿纖維蛋白原水平的變化與凝血障礙、出血、DIC、應(yīng)激（因?yàn)樗彩且环N急性期蛋白）有關(guān)，而且由于不斷有文獻(xiàn)報(bào)道它與冠心病，心肌梗塞也有關(guān)系，因此臨床上越發(fā)受到重視。不僅工作量增大而且對(duì)方法準(zhǔn)確性的要求也越來(lái)越高。但至今WHO（世界衛(wèi)生組織）、ICSH（國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)）仍未明確提出一個(gè)纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)化或推薦方法，供臨床常規(guī)使用。第4頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五現(xiàn)有的方法大體上分三大類：（1）物理化學(xué)測(cè)定法；（2）免疫學(xué)測(cè)定法；（3）基于凝血酶的作用，形成纖維蛋白的方法。第5頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五（1）物理化學(xué)測(cè)定法：這類方法又可分為鹽析法（包括用亞硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉鹽析，用蛋白質(zhì)顯色或比濁法測(cè)定），熱變性沉淀法和電泳法等幾種。這類方法都比較簡(jiǎn)單、快速，尤其適于急診檢驗(yàn)，但缺點(diǎn)是本法的特異性不強(qiáng)。所測(cè)的不是有凝固功能的纖維蛋白原，可能包括部分的降解產(chǎn)物和/或其它蛋白。而電泳法又太繁瑣，不適于常規(guī)工作。

第6頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五（2）免疫學(xué)測(cè)定法：將純纖維蛋白原作為抗原免疫動(dòng)物，制成多克隆或單克隆抗體。然后用免疫膠乳、被動(dòng)血凝或反向血凝、單向免疫擴(kuò)散、火箭電泳以及ELISA等方法測(cè)定。優(yōu)點(diǎn)是大部分方法簡(jiǎn)便，但缺點(diǎn)是所測(cè)的不僅是可凝固的纖維蛋白原，可能包括了它的降解產(chǎn)物（因?yàn)樗鼈冇泄餐乖部赡馨苏系K性纖維蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的無(wú)功能的纖維蛋白原,又稱缺維生素K引起的蛋白質(zhì)，PIVKA）。但免疫法也有一個(gè)好處，就是可用來(lái)測(cè)定PIVKA。如果一個(gè)患者總纖維蛋白原（用免疫學(xué)測(cè)定結(jié)果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纖維蛋白原卻明顯減少，即可判斷為存在PIVKA。肝病、維生素K缺乏等均可導(dǎo)致PIVKA升高，有臨床診斷價(jià)值?？偟恼f(shuō)來(lái)，免疫學(xué)方法用于臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室仍存在一定問(wèn)題。第7頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五（3）基于凝血酶的作用，形成纖維蛋白的方法：凝血酶凝固法（Clauss法），將凝血酶加到血漿中，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，使出現(xiàn)凝固。在有足量的凝血酶時(shí)，與不同含量的纖維蛋白原作用，其出現(xiàn)凝固的時(shí)間與纖維蛋白原含量呈負(fù)相關(guān)。

本法的干擾因素主要是肝素。在高濃度時(shí)可造成假的低值（可通過(guò)加入硫酸魚精蛋白而消除）。克勞斯法（Clauss法）是美國(guó)國(guó)家臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（NCCLS）推薦的纖維蛋白原常規(guī)測(cè)定方法。第8頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五現(xiàn)在的全自動(dòng)凝血分析儀大部分在測(cè)PT時(shí)往往能夠同時(shí)報(bào)告纖維蛋白原。其原理和理論根據(jù)是：當(dāng)PT測(cè)定完成時(shí)，全部纖維蛋白原均變成纖維蛋白（相當(dāng)于Clauss法血漿中加入了凝血酶），其形成的濁度與纖維蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何試劑，即可由濁度直接推算出纖維蛋白原的含量。故本法又稱為PT導(dǎo)出（或衍生）纖維蛋白原測(cè)定法，簡(jiǎn)稱PT-Der法。由于此法使用的是比濁法，因此受到測(cè)定杯透光性能與血漿狀態(tài)的影響比較大，對(duì)于溶血，黃疸，乳糜的標(biāo)本，此方法會(huì)出現(xiàn)較大的結(jié)果偏差。第9頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五我們科室現(xiàn)在使用的SYSMEX-CA1500全自動(dòng)凝血儀與貝克曼

ALC-ELITE-PRO全自動(dòng)凝血儀都可以同時(shí)用Clauss法與PT-Der法對(duì)FIB進(jìn)行測(cè)定。其中貝克曼的儀器可以在定標(biāo)PT的同時(shí)自動(dòng)得到PT-Der法測(cè)定FIB的比濁曲線，而SYSMEX的儀器則必須定標(biāo)PT后使用儀器測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)品各種濃度下的OD值與Clauss法測(cè)出的FIB值，然后自行設(shè)定曲線對(duì)應(yīng)關(guān)系。第10頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五PT-Der法與Clauss法結(jié)果對(duì)比第11頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五比較這兩種方法，PT衍生法其結(jié)果是在檢測(cè)PT過(guò)程中演算而來(lái)的，更快速、簡(jiǎn)便，但其結(jié)果高于Clauss法的檢測(cè)結(jié)果，有時(shí)失去可靠性，特別是在疾病狀態(tài)下和溶栓治療中。因?yàn)槿芩ㄟ^(guò)程中，早、中期FDPs產(chǎn)物X、Y片段可產(chǎn)生一定的濁度影響比濁，而晚期產(chǎn)生的D、E片段雖不產(chǎn)生濁度變化，但影響凝血酶時(shí)間(TT)的結(jié)果。當(dāng)血漿FIB含量正常時(shí)，兩方法無(wú)顯著差異或略高于Clauss法，但當(dāng)FIB減低或增高時(shí)，PT-der法往往略高。相比之下，Clauss法在準(zhǔn)確度與精密度以及檢測(cè)速度方面都是很理想的選擇。第12頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，18點(diǎn)34分，星期五因此結(jié)合實(shí)際因素，我們?cè)诠ぷ髦袨榱朔奖愎?jié)約時(shí)間與節(jié)約試劑成本可以使用PT-der法來(lái)進(jìn)行FIB