缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究概要課件

缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究

答辯人：劉飛導(dǎo)師：張文生副教授11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究答辯人：劉研究背景研究目的研究?jī)?nèi)容研究?jī)r(jià)值研究意義主要內(nèi)容11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景主要內(nèi)容11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組研究背景——中風(fēng)病概況患者數(shù)目龐大死亡人數(shù)最多后遺癥人口老齡化中風(fēng)病機(jī)理研究治療預(yù)防的前提中風(fēng)病分為出血性中風(fēng)病和缺血性中風(fēng)病兩大類，以后者最為常見(jiàn)，約占中風(fēng)病總數(shù)的80％11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——中風(fēng)病概況患者數(shù)目龐大死亡人數(shù)最多后遺癥人口老齡研究背景——缺血性中風(fēng)病病理缺血損傷早期機(jī)理研究是認(rèn)識(shí)缺血性中風(fēng)病機(jī)理，以及開(kāi)展治療缺血性中風(fēng)病藥物研究的前提

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——缺血性中風(fēng)病病理缺血損傷早期機(jī)理研究是認(rèn)識(shí)缺血性研究背景——缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理蛋白質(zhì)是缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理研究的核心領(lǐng)域。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理蛋白質(zhì)是缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理研究背景——技術(shù)背景避免了對(duì)現(xiàn)有研究成果和研究思路的過(guò)分依賴，直接為疾病分子機(jī)理研究提供新的研究線索，尤其對(duì)于機(jī)制比較復(fù)雜的疾病，差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)“突破性”強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)明顯。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——技術(shù)背景避免了對(duì)現(xiàn)有研究成果和研究思路的過(guò)分依賴研究目的缺血后蛋白質(zhì)表達(dá)規(guī)律研究還有待于深入研究以大鼠缺血模型為研究對(duì)象，通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析缺血后腦組織蛋白質(zhì)表達(dá)變化，尋找缺血誘導(dǎo)表達(dá)變化的蛋白質(zhì)，以期為缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理研究和分子靶標(biāo)尋找提供線索。

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究目的缺血后蛋白質(zhì)表達(dá)規(guī)律研究還有待于深入研究11/11/研究?jī)?nèi)容MCAO模型的建立與評(píng)價(jià)缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究第一部分第二部分11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究?jī)?nèi)容MCAO模型的建立與評(píng)價(jià)缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察MCAO模型的成功率和穩(wěn)定性成功率穩(wěn)定性麻醉死亡率缺血死亡率蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)生率神經(jīng)功能評(píng)分腦梗死體積11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察MCA第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)分組：缺血2h、6h、24h和72h四組實(shí)驗(yàn)環(huán)境：三級(jí)動(dòng)物房關(guān)鍵控制因素：插線的線頭直徑在0.36-0.38mm之間實(shí)驗(yàn)流程SD大鼠行腦缺血手術(shù)，術(shù)后6h神經(jīng)功能評(píng)分；各個(gè)實(shí)驗(yàn)組按相應(yīng)的缺血時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取材和TTC染色實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)上述五項(xiàng)指標(biāo)，以評(píng)價(jià)模型成功率和穩(wěn)定性11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)分組：缺血2h、MCAO模型的成功率groupDaDiDhRatioofsuccess2h(N=15)000-6h(N=15)13.3%0066.7%24h(N=15)13.3%20%6.7%46.6%72h(N=18)022.2%038.9%Da：麻醉死亡率；Di：缺血死亡率；Dh：蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)生率.

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究MCAO模型的成功率groupDaDiDhRatioofMCAO模型的穩(wěn)定性

Fig1-1infarctsize(wholebrain)groupNd2h(N=15)－6h(N=15)1.5424h(N=15)1.6972h(N=18)1.6Nd：神經(jīng)功能缺損分值11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究MCAO模型的穩(wěn)定性Fig1-1infarctsiz小結(jié)線頭直徑在0.36-0.38mm之間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。水合氯醛麻醉的低線性量和術(shù)后24h內(nèi)缺血死亡是影響成功率主要因素。此外，由于老鼠個(gè)體差異，手術(shù)本身有一定的失敗率。蛛網(wǎng)膜下腔出血和魚(yú)線硬度、線頭的光滑以及手感有密切關(guān)系，選擇合適的魚(yú)線以及熟練手術(shù)操作可以有效避免蛛網(wǎng)膜下腔出血。神經(jīng)功能評(píng)分不能完全反映腦梗死狀況，間或有神經(jīng)功能缺損的大鼠，沒(méi)有梗死出現(xiàn)，所以TTC染色是手術(shù)成功與否最可信的指標(biāo)。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究小結(jié)線頭直徑在0.36-0.38mm之間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。1圖片2h6h24h72h11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究圖片2h6h軟件分析質(zhì)譜雙向電泳TTC線栓法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析評(píng)分腦組織實(shí)驗(yàn)流程第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究軟件分析質(zhì)譜雙向電泳TTC線栓法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析評(píng)分第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：研究缺血6h和24h腦組織蛋白質(zhì)表達(dá)的變化實(shí)驗(yàn)分組：每個(gè)缺血時(shí)間點(diǎn)，13只大鼠隨機(jī)分為缺血對(duì)照組和缺血模型組，缺血對(duì)照組4只，缺血模型組9只實(shí)驗(yàn)環(huán)境：三級(jí)動(dòng)物房篩選模型成功大鼠：神經(jīng)功能評(píng)分和TTC染色研究對(duì)象的選?。弘S機(jī)從4只缺血對(duì)照組中選取3只大鼠組成缺血對(duì)照組，隨機(jī)從手術(shù)成功的缺血模型大鼠中抽取3只大鼠作為缺血模型組。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：研究缺第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究取材部位：視交叉后3mm-6mm皮層（缺血側(cè)）腦組織處理：大腦分離之后，用10mMTris-HCl沖洗；切離目的腦組織，迅速投入到液氮，后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱；剩余腦組織切為5片，行TTC染色。表達(dá)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)篩查原則：缺血對(duì)照組和缺血模型組之間穩(wěn)定的差異表達(dá)蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜分析：專業(yè)軟件PDQuest7.1.1分析缺血對(duì)照組和模型組之間蛋白質(zhì)表達(dá)差異11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究取材部位：視交叉缺血6h雙向電泳圖譜11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血6h雙向電泳圖譜11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白缺血24h雙向電泳圖譜11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血24h雙向電泳圖譜11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋腦缺血6h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白26個(gè)下調(diào)蛋白Table2-3Partialresults,statisticalanalysisofthedifferentialspotsSpots#(6h)ControlModelModel/Control342775.733±18.897351.366±36.4404.6451151321.833±209.9804729.133±1336.3013.5786205197.4±32.042647.6±144.4003.2816429103.733±15.519382.166±248.0343.6846519216.966±52.580861.766±539.0843.9722462813.3±431.164130.766±84.1520.16134502067.333±1108.87342.4±67.9010.0213457819.466±456.1722.5±1.4520.0033719252.733±118.5592.5±1.4520.014329164.2±53.07645.466±28.1390.27744193251.1±4457.4702.5±1.4520.0014709139.666±86.4442.5±1.4520.018532040.233±45.3762.5±1.4520.0625331194.166±84.51624.366±10.5540.12597211344.5±915.3112.5±1.4520.00211/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究腦缺血6h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白Table2-3缺血6h差異點(diǎn)分析圖示11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血6h差異點(diǎn)分析圖示11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋腦缺血24h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白和13個(gè)下調(diào)蛋白Tab2-4Partialresults,statisticalanalysisofthedifferentialspotsSpots#(24h)ControlModelModel/Control3124338.6±46.4041521.733±263.5184.4945208228.066±142.7481154.266±374.0935.0616602558.866±255.4514021.866±1063.3817.1967313614.566±249.341140.8±90.2784.36476243334.833±634.9757134.566±1132.8352.1390617871.933±489.95766.333±110.8250.0331412504.9±305.0561.966±1.0780.0033303162.933±83.9011.966±1.0780.0043418623.366±546.3131.966±1.0780.00336291303.333±818.27942.833±70.3860.07642011736±810.262385.266±163.7190.22145221507.333±859.1091.966±1.0780.0015344451.733±58.9951.966±1.0780.004540221901.1±1249.49110900.766±1188.5520.4976438206.933±167.1121.966±1.0780.00911/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究腦缺血24h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白和13個(gè)下調(diào)蛋缺血24h差異點(diǎn)分析圖示11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血24h差異點(diǎn)分析圖示11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異二級(jí)質(zhì)譜鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究二級(jí)質(zhì)譜鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)11/11/2022缺血性中風(fēng)病缺血6h腦組織蛋白質(zhì)差異點(diǎn)的鑒別

No.AccessEntryMW(Da)Cov.IdentityMS/MS2462Q99NA5IDH3A_RAT4007017％Isocitratedehydrogenasesubunitalpha608.82692.393450P68373TBA6_MOUSE4990920%alphatubulin851.4878.94419XP_147357－3312034%alphatubulin573.65851.465320P07335KCRB_RAT4271233%CreatinekinaseB-type801.92840.035331P62716PP2AB_RAT3614621％Serine/threonine-proteinphosphatase2Acatalyticsubunitbetaisoform828.45896.466205P28073PSB6_RAT2529016%Proteasomesubunitbetatype6542.27586.32555.839721P631021433Z_RAT2777120%14-3-3proteinisoformzeta711.3311/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血6h腦組織蛋白質(zhì)差異點(diǎn)的鑒別No.AccessEntr缺血24h腦組織蛋白質(zhì)的差異點(diǎn)鑒別No.AccessEntryMW(Da)Cov.IdentityMS/MS0617P631021433Z_RAT2777120%14-3-3proteinisoformzeta-rat711.334201Q9DAK9PHP14_MOUSE1416823%Phosphohistidinephosphatase1679.624522P10719ATPB_RAT5635419%ATPsynthasebetachain544.83605.97756.045323P04764ENOA_RAT4733918%Alpha-enolase980.965402Gi135424TBA6_RAT5059434%alphatubulin573.65851.466438P07335KCRB_RAT4271233%CreatinekinaseB-type801.92840.0311/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血24h腦組織蛋白質(zhì)的差異點(diǎn)鑒別No.AccessEntr總結(jié)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究腦缺血損傷細(xì)胞能量代謝某些細(xì)胞生理過(guò)程細(xì)胞骨架影響11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究總結(jié)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究腦細(xì)胞能量代謝某些細(xì)胞生總結(jié)1：缺血影響細(xì)胞能量代謝關(guān)鍵酶的表達(dá)

異檸檬酸脫氫酶、烯醇化酶、ATP合成酶和肌酸激酶表達(dá)下調(diào)異檸檬酸脫氫酶和烯醇化酶是能量代謝主要途徑——三羧酸循環(huán)的關(guān)鍵酶ATP合成酶是ATP生成主要酶肌酸激酶催化合成磷酸肌酸，產(chǎn)物磷酸肌酸是腦組織能量存儲(chǔ)唯一物質(zhì)腦缺血造成腦組織能量代謝關(guān)鍵酶表達(dá)降低，影響腦組織能量正常代謝11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究總結(jié)1：缺血影響細(xì)胞能量代謝關(guān)鍵酶的表達(dá)異檸檬酸總結(jié)2：缺血影響某些細(xì)胞生理關(guān)鍵蛋白表達(dá)

絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酯酶2A（PP2A）、磷酸組氨酸蛋白磷酸酯酶1和14-3-3蛋白表達(dá)量下降，而蛋白酶體β亞基表達(dá)量上升。PP2A、磷酸組氨酸蛋白磷酸酯酶1與蛋白質(zhì)磷酸化有關(guān)14-3-3功能具有廣譜性，類似于分子伴侶蛋白酶體在腦缺血損傷中扮演著雙重角色缺血造成多種關(guān)鍵蛋白質(zhì)的表達(dá)變化，將導(dǎo)致一些細(xì)胞生理過(guò)程異常11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究總結(jié)2：缺血影響某些細(xì)胞生理關(guān)鍵蛋白表達(dá)絲氨酸/蘇氨酸總結(jié)3：缺血造成細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)下降

α微管蛋白表達(dá)降低

微管在細(xì)胞中起著重要的基礎(chǔ)作用，維持細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)?。Kumar研究沙土鼠腦缺血再灌注微管蛋白mRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)腦缺血早期6-24h，在海馬CA1區(qū)α微管蛋白和β微管蛋白的mRNA表達(dá)均降低。他認(rèn)為微管蛋白表達(dá)過(guò)程和神經(jīng)細(xì)胞死亡過(guò)程相一致。腦缺血造成微管蛋白表達(dá)下降，導(dǎo)致細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)組織異常11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究總結(jié)3：缺血造成細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)下降α微管蛋白表研究意義腦缺血后，缺血組織損傷處于持續(xù)變化過(guò)程，蛋白質(zhì)表達(dá)也相應(yīng)變化，通過(guò)捕捉表達(dá)發(fā)生變化的蛋白質(zhì)，將有助于找到影響腦缺血損傷關(guān)鍵蛋白質(zhì)。缺血后，神經(jīng)細(xì)胞損傷表現(xiàn)為細(xì)胞整體結(jié)構(gòu)變化和功能抑制，本論文以蛋白質(zhì)組標(biāo)識(shí)缺血損傷狀態(tài)有助于深入認(rèn)識(shí)缺血性中風(fēng)病分子機(jī)制。通過(guò)功能分類，揭示差異表達(dá)蛋白質(zhì)之間有密切的聯(lián)系，差異表達(dá)蛋白質(zhì)與腦缺血影響能量代謝、某些細(xì)胞生理過(guò)程、細(xì)胞骨架有關(guān)。首次發(fā)現(xiàn)磷酸組氨酸蛋白磷酸酯酶1、異檸檬酸脫氫酶、ATP合成酶與缺血腦組織損傷密切相關(guān)。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究意義腦缺血后，缺血組織損傷處于持續(xù)變化過(guò)程，蛋白質(zhì)表達(dá)也研究展望驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)一步研究差異表達(dá)蛋白質(zhì)之間的相互關(guān)系研究缺血再灌對(duì)腦組織蛋白質(zhì)表達(dá)變化的影響……11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究展望驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白質(zhì)11/11/2022缺血性中風(fēng)病差致謝

感謝導(dǎo)師張文生副教授對(duì)我的培養(yǎng)！感謝所有幫助我的老師和同學(xué)！感謝答辯委員會(huì)的各位老師及在座的同學(xué)！11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究致謝感謝導(dǎo)師張文生副教授對(duì)我的培養(yǎng)！11/11/2謝謝大家！11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究謝謝大家！11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究WhenIlookintothefuture,it'ssobrightitburnsmyeyes….!–OprahWinfrey11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究WhenIlookintothefuture,i缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究

答辯人：劉飛導(dǎo)師：張文生副教授11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究答辯人：劉研究背景研究目的研究?jī)?nèi)容研究?jī)r(jià)值研究意義主要內(nèi)容11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景主要內(nèi)容11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組研究背景——中風(fēng)病概況患者數(shù)目龐大死亡人數(shù)最多后遺癥人口老齡化中風(fēng)病機(jī)理研究治療預(yù)防的前提中風(fēng)病分為出血性中風(fēng)病和缺血性中風(fēng)病兩大類，以后者最為常見(jiàn)，約占中風(fēng)病總數(shù)的80％11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——中風(fēng)病概況患者數(shù)目龐大死亡人數(shù)最多后遺癥人口老齡研究背景——缺血性中風(fēng)病病理缺血損傷早期機(jī)理研究是認(rèn)識(shí)缺血性中風(fēng)病機(jī)理，以及開(kāi)展治療缺血性中風(fēng)病藥物研究的前提

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——缺血性中風(fēng)病病理缺血損傷早期機(jī)理研究是認(rèn)識(shí)缺血性研究背景——缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理蛋白質(zhì)是缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理研究的核心領(lǐng)域。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理蛋白質(zhì)是缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理研究背景——技術(shù)背景避免了對(duì)現(xiàn)有研究成果和研究思路的過(guò)分依賴，直接為疾病分子機(jī)理研究提供新的研究線索，尤其對(duì)于機(jī)制比較復(fù)雜的疾病，差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)“突破性”強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)明顯。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究背景——技術(shù)背景避免了對(duì)現(xiàn)有研究成果和研究思路的過(guò)分依賴研究目的缺血后蛋白質(zhì)表達(dá)規(guī)律研究還有待于深入研究以大鼠缺血模型為研究對(duì)象，通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析缺血后腦組織蛋白質(zhì)表達(dá)變化，尋找缺血誘導(dǎo)表達(dá)變化的蛋白質(zhì)，以期為缺血性中風(fēng)病分子機(jī)理研究和分子靶標(biāo)尋找提供線索。

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究目的缺血后蛋白質(zhì)表達(dá)規(guī)律研究還有待于深入研究11/11/研究?jī)?nèi)容MCAO模型的建立與評(píng)價(jià)缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究第一部分第二部分11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究研究?jī)?nèi)容MCAO模型的建立與評(píng)價(jià)缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察MCAO模型的成功率和穩(wěn)定性成功率穩(wěn)定性麻醉死亡率缺血死亡率蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)生率神經(jīng)功能評(píng)分腦梗死體積11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察MCA第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)分組：缺血2h、6h、24h和72h四組實(shí)驗(yàn)環(huán)境：三級(jí)動(dòng)物房關(guān)鍵控制因素：插線的線頭直徑在0.36-0.38mm之間實(shí)驗(yàn)流程SD大鼠行腦缺血手術(shù)，術(shù)后6h神經(jīng)功能評(píng)分；各個(gè)實(shí)驗(yàn)組按相應(yīng)的缺血時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取材和TTC染色實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)上述五項(xiàng)指標(biāo)，以評(píng)價(jià)模型成功率和穩(wěn)定性11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第一部分實(shí)驗(yàn)——MCAO模型的建立和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)分組：缺血2h、MCAO模型的成功率groupDaDiDhRatioofsuccess2h(N=15)000-6h(N=15)13.3%0066.7%24h(N=15)13.3%20%6.7%46.6%72h(N=18)022.2%038.9%Da：麻醉死亡率；Di：缺血死亡率；Dh：蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)生率.

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究MCAO模型的成功率groupDaDiDhRatioofMCAO模型的穩(wěn)定性

Fig1-1infarctsize(wholebrain)groupNd2h(N=15)－6h(N=15)1.5424h(N=15)1.6972h(N=18)1.6Nd：神經(jīng)功能缺損分值11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究MCAO模型的穩(wěn)定性Fig1-1infarctsiz小結(jié)線頭直徑在0.36-0.38mm之間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。水合氯醛麻醉的低線性量和術(shù)后24h內(nèi)缺血死亡是影響成功率主要因素。此外，由于老鼠個(gè)體差異，手術(shù)本身有一定的失敗率。蛛網(wǎng)膜下腔出血和魚(yú)線硬度、線頭的光滑以及手感有密切關(guān)系，選擇合適的魚(yú)線以及熟練手術(shù)操作可以有效避免蛛網(wǎng)膜下腔出血。神經(jīng)功能評(píng)分不能完全反映腦梗死狀況，間或有神經(jīng)功能缺損的大鼠，沒(méi)有梗死出現(xiàn)，所以TTC染色是手術(shù)成功與否最可信的指標(biāo)。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究小結(jié)線頭直徑在0.36-0.38mm之間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。1圖片2h6h24h72h11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究圖片2h6h軟件分析質(zhì)譜雙向電泳TTC線栓法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析評(píng)分腦組織實(shí)驗(yàn)流程第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究軟件分析質(zhì)譜雙向電泳TTC線栓法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析評(píng)分第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：研究缺血6h和24h腦組織蛋白質(zhì)表達(dá)的變化實(shí)驗(yàn)分組：每個(gè)缺血時(shí)間點(diǎn)，13只大鼠隨機(jī)分為缺血對(duì)照組和缺血模型組，缺血對(duì)照組4只，缺血模型組9只實(shí)驗(yàn)環(huán)境：三級(jí)動(dòng)物房篩選模型成功大鼠：神經(jīng)功能評(píng)分和TTC染色研究對(duì)象的選?。弘S機(jī)從4只缺血對(duì)照組中選取3只大鼠組成缺血對(duì)照組，隨機(jī)從手術(shù)成功的缺血模型大鼠中抽取3只大鼠作為缺血模型組。11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：研究缺第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究取材部位：視交叉后3mm-6mm皮層（缺血側(cè)）腦組織處理：大腦分離之后，用10mMTris-HCl沖洗；切離目的腦組織，迅速投入到液氮，后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱；剩余腦組織切為5片，行TTC染色。表達(dá)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)篩查原則：缺血對(duì)照組和缺血模型組之間穩(wěn)定的差異表達(dá)蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜分析：專業(yè)軟件PDQuest7.1.1分析缺血對(duì)照組和模型組之間蛋白質(zhì)表達(dá)差異11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究第二部分實(shí)驗(yàn)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究取材部位：視交叉缺血6h雙向電泳圖譜11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血6h雙向電泳圖譜11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白缺血24h雙向電泳圖譜11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血24h雙向電泳圖譜11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋腦缺血6h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白26個(gè)下調(diào)蛋白Table2-3Partialresults,statisticalanalysisofthedifferentialspotsSpots#(6h)ControlModelModel/Control342775.733±18.897351.366±36.4404.6451151321.833±209.9804729.133±1336.3013.5786205197.4±32.042647.6±144.4003.2816429103.733±15.519382.166±248.0343.6846519216.966±52.580861.766±539.0843.9722462813.3±431.164130.766±84.1520.16134502067.333±1108.87342.4±67.9010.0213457819.466±456.1722.5±1.4520.0033719252.733±118.5592.5±1.4520.014329164.2±53.07645.466±28.1390.27744193251.1±4457.4702.5±1.4520.0014709139.666±86.4442.5±1.4520.018532040.233±45.3762.5±1.4520.0625331194.166±84.51624.366±10.5540.12597211344.5±915.3112.5±1.4520.00211/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究腦缺血6h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白Table2-3缺血6h差異點(diǎn)分析圖示11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血6h差異點(diǎn)分析圖示11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋腦缺血24h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白和13個(gè)下調(diào)蛋白Tab2-4Partialresults,statisticalanalysisofthedifferentialspotsSpots#(24h)ControlModelModel/Control3124338.6±46.4041521.733±263.5184.4945208228.066±142.7481154.266±374.0935.0616602558.866±255.4514021.866±1063.3817.1967313614.566±249.341140.8±90.2784.36476243334.833±634.9757134.566±1132.8352.1390617871.933±489.95766.333±110.8250.0331412504.9±305.0561.966±1.0780.0033303162.933±83.9011.966±1.0780.0043418623.366±546.3131.966±1.0780.00336291303.333±818.27942.833±70.3860.07642011736±810.262385.266±163.7190.22145221507.333±859.1091.966±1.0780.0015344451.733±58.9951.966±1.0780.004540221901.1±1249.49110900.766±1188.5520.4976438206.933±167.1121.966±1.0780.00911/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究腦缺血24h蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析結(jié)果5個(gè)上調(diào)蛋白和13個(gè)下調(diào)蛋缺血24h差異點(diǎn)分析圖示11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血24h差異點(diǎn)分析圖示11/11/2022缺血性中風(fēng)病差異二級(jí)質(zhì)譜鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)

11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究二級(jí)質(zhì)譜鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)11/11/2022缺血性中風(fēng)病缺血6h腦組織蛋白質(zhì)差異點(diǎn)的鑒別

No.AccessEntryMW(Da)Cov.IdentityMS/MS2462Q99NA5IDH3A_RAT4007017％Isocitratedehydrogenasesubunitalpha608.82692.393450P68373TBA6_MOUSE4990920%alphatubulin851.4878.94419XP_147357－3312034%alphatubulin573.65851.465320P07335KCRB_RAT4271233%CreatinekinaseB-type801.92840.035331P62716PP2AB_RAT3614621％Serine/threonine-proteinphosphatase2Acatalyticsubunitbetaisoform828.45896.466205P28073PSB6_RAT2529016%Proteasomesubunitbetatype6542.27586.32555.839721P631021433Z_RAT2777120%14-3-3proteinisoformzeta711.3311/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血6h腦組織蛋白質(zhì)差異點(diǎn)的鑒別No.AccessEntr缺血24h腦組織蛋白質(zhì)的差異點(diǎn)鑒別No.AccessEntryMW(Da)Cov.IdentityMS/MS0617P631021433Z_RAT2777120%14-3-3proteinisoformzeta-rat711.334201Q9DAK9PHP14_MOUSE1416823%Phosphohistidinephosphatase1679.624522P10719ATPB_RAT5635419%ATPsynthasebetachain544.83605.97756.045323P04764ENOA_RAT4733918%Alpha-enolase980.965402Gi135424TBA6_RAT5059434%alphatubulin573.65851.466438P07335KCRB_RAT4271233%CreatinekinaseB-type801.92840.0311/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究缺血24h腦組織蛋白質(zhì)的差異點(diǎn)鑒別No.AccessEntr總結(jié)——缺血后腦組織蛋白質(zhì)的表達(dá)研究腦缺血損傷細(xì)胞能量代謝某些細(xì)胞生理過(guò)程細(xì)胞骨架影響11/12/2022缺血性中風(fēng)病差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究總結(jié)——缺血后腦