急性肝損傷的病理生理學機制課件

急性肝損害的病理生理學機制

青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院ICU孫運波

急性肝損害的病理生理學機制

青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院1ICU病人有50%存在肝功能異常,急性肝功能衰竭作為急性肝損害最嚴重的結局,盡管綜合治療手段明顯改善,但死亡率仍持續(xù)在40%-80%,伴有ARDS時死亡率達100%.有關肝硬化,肝炎,肝中毒及先天性異常等肝臟內在疾病所致的肝衰竭和肝昏迷已進行了廣泛的研究,但對于外傷或手術引起的本身無肝疾病而發(fā)生肝功能異常的研究較少

ICU病人有50%存在肝功能異常,急性肝功能衰竭作2缺血再灌注損傷是外科疾病中常見的病理生理過程（休克復蘇、嚴重肝外傷，肝手術及肝移植）。肝臟在這些疾病的過程中的重要作用是由其血液供應、解剖結構、多種細胞相互作用決定。如何減輕肝臟缺血再灌注損傷是目前肝臟外科特別是移植外科的研究熱點。缺血再灌注損傷是外科疾病中常見的病理生理過程（休克復3肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機

制的研究

目前肝臟缺血再灌注損傷確切的發(fā)生機制仍不十分清楚，多數研究認為與以下機制有關。

肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機

制的研究

41.1鈣超載：肝細胞內自由鈣濃度[Cai2+]在調節(jié)許多細胞機能和激素的活性方面有重要作用。肝細胞依靠膜對Ca2+的低通透性、膜鈣泵主動轉運、Na+/Ca2+交換系統(tǒng)和H+/Ca2+交換系統(tǒng)，維持胞內外鈣的動態(tài)平衡。在肝臟缺血再灌注時，細胞內Ca2+超載的機制比較復雜。目前多數學者認為有以下幾個方面

1.1鈣超載：肝細胞內自由鈣濃度[Cai2+]在調節(jié)許多5（1）鈣超載

①ATP缺乏，激活細胞膜上的Na+/Ca2+交換蛋白，

Ca2+大量進入細胞

②細胞膜通透性增加，Ca2+被動擴散入細胞增多

③線粒體ATP生成減少，Ca2+泵排Ca2+能力減弱

④線粒體保護性攝取攝鈣功能失常

⑤細胞膜內鈣敏磷酸酶可引起脂質過氧化的連鎖反應，使質膜上打開一些通道，Ca2+經這些通道順高濃度差進入細胞內

（1）鈣超載

①ATP缺乏，激活細胞膜上的Na+/Ca2+6鈣超載是肝細胞損傷關鍵機制之一：

①激活Ca2+依賴蛋白酶，破壞細胞骨架與

胞膜聯(lián)接的完整性

②激活Ca2+依賴磷脂酶C和磷脂酶A2,使

雙分子層結構紊亂破壞膜性結構

③線粒體鈣超載使其膜電位喪失，氧化磷

酸化脫偶聯(lián)，引起嚴重能量代謝障礙，

并促進了氧自由基的產生，這些終致細

胞不可逆損傷

鈣超載是肝細胞損傷關鍵機制之一：

①激活Ca2+依賴蛋白7（2）氧自由基生成

正常情況下1%-5%分子氧通過多種途徑產生自由基。但量小且隨時被氧化、分解，其形成與清除處于動態(tài)平衡，故不引起細胞毒性作用。生物體內有自由基清除系統(tǒng)，（如超氧化物岐化酶SOD），在生理狀態(tài)下生物體內通過自由基清除系統(tǒng)將生成的自由基維持在一種有利無害的低水平狀態(tài)

（2）氧自由基生成

正常情況下1%-5%分子氧通過多8維生素E等小分子量清除劑還原單線態(tài)氧、自由基、超氧自由基及脂質過氧化物自由基；酶類清除劑SOD將超氧自由基岐化為過氧化氫，過氧化氫酶清除過氧化氫生成水，從而阻斷羥基自由基的生成過氧化物酶及谷胱甘肽過氧化物酶都是體內有效的自由基清除劑，通過各種途徑消除和減低氧自由基對細胞的毒性作用

維生素E等小分子量清除劑還原單線態(tài)氧、自由基、超氧自9氧自由基在殺滅細菌、調節(jié)免疫等方面具有重要作用，但其生成量過多或清除系統(tǒng)某環(huán)節(jié)發(fā)生障礙，就對組織細胞產生毒性作用。

氧自由基損傷：對蛋白質的損傷；對核酸和DNA的損傷；對線立體損害主要發(fā)生在缺血缺氧時，線粒體內的細胞色素氧化酶系電子減少或停止，造成自由基生成增多，最后線粒體內膜的脂質受到破壞

氧自由基在殺滅細菌、調節(jié)免疫等方面具有重要作用，但其10肝臟缺血再灌注損傷（肝臟血流減少，甚至無血流灌注時，肝臟的供氧、供糖障礙首先影響到肝臟的能量合成，肝臟缺血再灌注過程中氧自由基的產生主要與以下因素有關肝臟缺血再灌注損傷（肝臟血流減少，甚至無血流灌注時，11

①肝細胞缺血缺氧，ATP分解代謝增加，分解產物次黃嘌呤在缺血組織中大量堆積，同時內源性抗氧化劑如SOD失活

缺血的刺激激活Ca2+依賴蛋白酶促進胞內無害的黃嘌呤脫氫酶（XDH）向有害的黃嘌呤氧化酶（XOD）轉化，后者利用胞內分子氧產生大量的氧自由基

①肝細胞缺血缺氧，ATP分解代謝增加，分解產物次黃嘌呤12②激活Kupffer細胞、中性粒細胞、吞噬

細胞和單核細胞通過細胞膜上NADPH氧

化酶，釋放大量氧自由基

③缺血、缺氧可使細胞色素氧化酶功能失

調，使細胞內線粒體膜電勢喪失，呼吸

鏈功能障礙電子傳遞鏈電子漏率增加，

從而促進氧自由基的產生

②激活Kupffer細胞、中性粒細胞、吞噬

細胞和單13氧自由基對肝細胞損傷機制主要有：①氧自由基對細胞膜雙分子層磷脂結構中的重要脂類進行氧化作用，生成多種脂質過氧化物，超氧化物和過氧化物促進鐵蛋白釋放鐵，使其與過氧化氫反應形成羥自由基，從而直接損傷細胞

氧自由基對肝細胞損傷機制主要有：①氧自由基對細胞膜雙分子層磷14②引起血小板、粒細胞在微血管中粘

附、聚集，造成微循環(huán)障礙

③直接氧化肝實質細胞核內DNA雙鏈

結構，引起DNA突變而造成肝臟結

構和功能的損傷

②引起血小板、粒細胞在微血管中粘

附、聚集，造成微循15（3）細胞因子

激活的Kupffer細胞及粘附于肝竇內的白細胞釋放多種細胞因子。這些細胞因子在肝內既可單個形式也可通過彼此間網絡狀協(xié)同作用而發(fā)揮對肝臟的損傷作用。TNF-α及IL-1目前研究最活躍。TNF-α不僅可直接導致肝竇內皮細胞腫脹，而且還可通過中性粒細胞和內皮細胞間的相互作用而導致肝臟微循環(huán)障礙

（3）細胞因子

激活的Kupffer細胞及粘附于肝16

TNF尚可激活粘附于肝竇內中性粒白細胞釋放氧自由基造成肝損傷。

IL-1不僅促使Kupffer細胞產生TNF，而且與TNF-α協(xié)同作用內皮細胞，誘導合成凝血酶及纖維蛋白酶，從而破壞內皮細胞的細胞骨架作用。

其他細胞因子如IL-6能誘導肝細胞釋放C反應蛋白、α-抗胰蛋白酶及纖維蛋白原等物質從而發(fā)揮對肝臟損傷作用

IL-2與TNF協(xié)同改變蛋白酶與抗蛋白酶間的平衡，引起內皮細胞基底膜蛋白降低

TNF尚可激活粘附于肝竇內中性粒白細胞釋放氧自由基造成17IL-10能抑制TNF-α的mRNA表達及激活細胞間粘附的分子，從而減輕肝臟的缺血再灌注損傷（Yoshidome）

血小板激活因子（PAF）來源于肝竇內皮細胞及激活Kupffer細胞、在肝臟缺血再灌注過程中，PAF既可激活粘附于肝竇內的中性粒細胞產生大量的氧自由基，同時也能誘導Kupffer細胞釋放TNF及IL-8等毒性介質而間接地造成肝臟損傷

IL-10能抑制TNF-α的mRNA表達及激活細胞間18（4）Kupffer細胞激活及中性粒細胞聚集

肝實質60%為肝細胞,及枯否、肝竇狀內皮細胞、中性粒細胞和單核細胞.人體80%的巨噬細胞位于肝臟—枯否細胞,不僅清除細菌,內毒素和炎癥介質,而且分泌細胞因子,白三烯,溶酶體酶和氧自由基

一方面感染等休克誘發(fā)因素改變料肝臟的血供,氧供及細胞水平的炎癥反應,而導致肝損害

另一方面在肝臟損傷中有清除產生炎癥介質,吞噬細菌及合成急性期蛋白作用

（4）Kupffer細胞激活及中性粒細胞聚集

肝實19肝缺血再灌注時肝組織出現雙相損傷，Ⅰ相損傷-與肝竇內KC的激活有關

Ⅱ相損傷-由聚集、活化的PMN介導所致

Jaeschke等在小鼠肝臟再灌注模型（阻斷45min）中發(fā)現肝臟Ⅰ相損傷與肝細胞周圍白細胞浸潤成度呈正相關，而Ⅱ相損傷期間未見到PMN進一步浸潤肝缺血再灌注時肝組織出現雙相損傷，Ⅰ相損傷-與肝20Kupffer細胞激活后釋放水溶性酶、炎癥介質和細胞因子，如TNF-α、氧自由基、IL-1和IL-6、前列腺素和NO，促發(fā)白細胞和血小板與肝血竇內皮細胞的黏附，加重內皮細胞損傷并導致肝內微循環(huán)紊亂，最后引起肝臟持續(xù)性的缺血

激活的Kupffer細胞降低線粒體質子ATP酶活性，減少肝細胞ATP合成。由KC誘導的氧應激和I相損傷可導致PMN激活，而啟動了PMN依賴性的II相損傷Kupffer細胞激活后釋放水溶性酶、炎癥介質和細胞21PMN依賴性的II相損傷

主要通過脫顆粒釋放蛋白酶，如彈性蛋白酶、組織蛋白酶等破壞肝組織，并可直接嵌塞在微血管，增加微血管通透性、出血和組織損傷，引起肝臟嚴重微循環(huán)障礙“無血流現象”；同時還可產生氧自由基而損傷肝組織

PMN依賴性的II相損傷

主要通過脫顆粒釋放蛋白酶，如22有研究證明在肝臟缺血再灌注時PMN聚集、黏附于肝臟內皮細胞并活化、釋放活性氧和蛋白酶等毒性物質攻擊肝細胞。

Suzuki在缺血后恢復血供小鼠注射FK506或環(huán)孢素時發(fā)現PMN浸潤明顯減少，肝臟損傷程度減輕，動物成活率升高。這與藥物抑制PMN合成細胞因子和表達粘附分子，阻斷PMN粘附、浸潤及活化有關

有研究證明在肝臟缺血再灌注時PMN聚集、黏附于肝臟內23（5）內皮素（Endothelins,ET）以及ET與一氧化氮（NO）濃度的失衡

ET來源于內皮細胞是具有廣泛生物學活性的多肽類物質，作用于動靜脈血管平滑肌而收縮血管。目前生物體內的ET主要有ET-1、ET-2、ET-3及血管活性腸肽異構體。ET-1是目前已知的作用最強、作用時間最持久的內源性縮血管活性肽

（5）內皮素（Endothelins,ET）以及ET與一氧24Stansby觀察12例人類供肝在冷保存期間及灌注后，短期供肝內的ET-1濃度均顯著的高于正常水平，Textor臨床研究結果類似上述結果提示，在肝臟缺血再灌注過程中，肝竇內皮細胞合成及分泌ET的能力明顯增強。這可能是因為一方面缺氧及胞漿內Ca2+濃度升高可促使內皮細胞產生ET，另一方面在再灌注短期內由門靜脈進入肝臟的腸源性內毒性也可刺激內皮細胞產生ET

Stansby觀察12例人類供肝在冷保存期間及灌注后，短期供25為了明確ET與肝臟缺血再灌注損傷的關系，Nakamura等在常溫下阻斷鼠肝臟血流120min后再恢復血流，發(fā)現在阻斷血流前預先給予適量抗ET-1單克隆抗體，復流后其肝內微循環(huán)血流量顯著增加，肝功能明顯改善，且鼠術后成活率也顯著增高

為了明確ET與肝臟缺血再灌注損傷的關系，Nakamu26ET和NO濃度的失衡是肝臟缺血再灌注損傷另一個重要原因，肝臟缺血再灌注時期，ET濃度明顯增高而NO濃度明顯降低。

ET濃度增高一方面是因為缺氧及胞漿內Ca2+濃度升高促使內皮細胞產生ET，另一方面在再灌注時期內由門靜脈進入肝臟的腸源性內毒素刺激內皮細胞產生ET，另外，在肝臟缺血缺氧情況下NO合成所必需的L-精氨酸酶、NADPH和氧均減少，以致體內NO濃度降低

ET和NO濃度的失衡是肝臟缺血再灌注損傷另一個重要原27ET濃度增高將導致微血管收縮，肝臟血流減少而引起肝臟微循環(huán)功能障礙，繼而導致肝細胞損傷

NO濃度降低可反饋性促進ET產生而加重了其收縮血管的效應，同時NO抑制黏附分子的表達及抑制血小板聚集的功能減弱而導致肝細胞損傷。

動物試驗中增大NO濃度及運用ET單克隆抗體能明顯減輕肝臟的缺血再灌注損傷

ET濃度增高將導致微血管收縮，肝臟血流減少而引起肝臟28（6）內毒素（Endotoxin）的作用

肝臟缺血再灌注時，腸源性內毒素可因腸道粘膜屏障損傷而隨門靜脈血流進入肝臟。目前的研究表明，內毒素在肝內可激活Kupffer細胞釋放多種毒性介質而造成肝臟損傷。Smadly等在給予鼠注射少量的內毒素后發(fā)現Kupffer細胞即可產生大量的TNF。Shirratori的實驗也證實，內毒素血癥可誘發(fā)Kupffer細胞產生氧自由基

（6）內毒素（Endotoxin）的作用

肝臟缺29Lemasters在鼠原位肝移植時，預先給予供體小劑量的內毒素后能顯著地激活供肝內的Kupffer細胞，降低移植術后成活率。Yokoyama曾動態(tài)地觀察了90例人類原位肝移植患者在術前、術中無肝期及術后1~7天內血清中內毒素含量變化，發(fā)現術前及術中無肝期血清中內毒素濃度與移植術后患者生存率呈負相關關系

Lemasters在鼠原位肝移植時，預先給予供體小劑30（7）微循環(huán)功能障礙

肝臟缺血再灌注后早期即可發(fā)生微循環(huán)紊亂，其原因主要有：

①肝竇內皮細胞腫脹、壞死及脫落而阻塞血竇

②ET大量生成，而NO減少，引起肝血竇內皮細

胞收縮，循環(huán)阻力增加

③血小板激活因子大量生成，血小板粘附、聚

集而引起血管內凝血，形成血栓

④再灌注后粒細胞的粘附、聚集及毒性作用

（7）微循環(huán)功能障礙

肝臟缺血再灌注后早期即可發(fā)生31微循環(huán)功能障礙使肝血竇血流減少或消失加重了肝臟缺血缺氧，同時激活了KC細胞及中性粒細胞并產生了大量炎癥介質、細胞因子及氧自由基，而更加加重了肝細胞的損傷

動物試驗運用改善微循環(huán)藥物如E5880（PAF拮抗劑）、OKL-O46（血栓素B2拮抗劑）等顯著減輕肝臟缺血再灌注損傷

微循環(huán)功能障礙使肝血竇血流減少或消失加重了肝臟缺血缺32總之，肝臟缺血再灌注損傷時有各種機制相互影響、綜合作用的結果，

進一步了解和明確其作用機理，將對臨床防治肝臟缺血再灌注損傷有著重要的意義

總之，肝臟缺血再灌注損傷時有各種機制相互影響、綜合作33臨床表現

基于血流動力、細胞、免疫和分子學機制及危重病人實驗室檢查所見，休克、失血、復蘇、低排高阻型感染性休克、手術等使肝臟血液灌注減少，進而發(fā)生損傷

表現為血清乳酸清除、肝糖原合成、糖原分解、蛋白合成下降，血清肝酶水平顯著升高，數天后可恢復正常。遲發(fā)性肝損傷常繼發(fā)于膿毒癥

臨床表現

基于血流動力、細胞、免疫和分子學機制及危重34Kupffer細胞觸發(fā)的炎癥反應導致局部組織炎癥，表現為輕度的肝酶或膽紅素升高。這種肝缺血性損害常被臨床忽視，而機械通氣、全靜脈營養(yǎng)、兒茶酚胺等藥物的使用更加重休克肝損傷。肝損傷影響危重病患者的死亡率，因此對肝損傷的早期發(fā)現在臨床上至關重要Kupffer細胞觸發(fā)的炎癥反應導致局部組織炎癥，表35治療

急性肝損害肝繼發(fā)于失血、大手術、呼吸衰竭、二重感染、或休克，持續(xù)的微循環(huán)衰竭、全身炎癥反應過度激活及ICU治療策略的副作用均促進其發(fā)病。對其早期認識，可降低死亡率治療

急性肝損害肝繼發(fā)于失血、大手術、呼吸衰竭、二重36治療關鍵在于及時消除休克肝觸發(fā)因素，穩(wěn)定循環(huán)和心排血量，控制感染，謹慎應用機械通氣、兒茶酚胺，預防低血糖和乳酸酸中毒隨著對休克肝研究加深，未來可能通過調節(jié)中性粒細胞、Kupffer細胞功能對其進行靶治療

治療關鍵在于及時消除休克肝觸發(fā)因素，穩(wěn)定循環(huán)和心排血量37

急性肝損害的病理生理學機制

青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院ICU孫運波

急性肝損害的病理生理學機制

青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院38ICU病人有50%存在肝功能異常,急性肝功能衰竭作為急性肝損害最嚴重的結局,盡管綜合治療手段明顯改善,但死亡率仍持續(xù)在40%-80%,伴有ARDS時死亡率達100%.有關肝硬化,肝炎,肝中毒及先天性異常等肝臟內在疾病所致的肝衰竭和肝昏迷已進行了廣泛的研究,但對于外傷或手術引起的本身無肝疾病而發(fā)生肝功能異常的研究較少

ICU病人有50%存在肝功能異常,急性肝功能衰竭作39缺血再灌注損傷是外科疾病中常見的病理生理過程（休克復蘇、嚴重肝外傷，肝手術及肝移植）。肝臟在這些疾病的過程中的重要作用是由其血液供應、解剖結構、多種細胞相互作用決定。如何減輕肝臟缺血再灌注損傷是目前肝臟外科特別是移植外科的研究熱點。缺血再灌注損傷是外科疾病中常見的病理生理過程（休克復40肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機

制的研究

目前肝臟缺血再灌注損傷確切的發(fā)生機制仍不十分清楚，多數研究認為與以下機制有關。

肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機

制的研究

411.1鈣超載：肝細胞內自由鈣濃度[Cai2+]在調節(jié)許多細胞機能和激素的活性方面有重要作用。肝細胞依靠膜對Ca2+的低通透性、膜鈣泵主動轉運、Na+/Ca2+交換系統(tǒng)和H+/Ca2+交換系統(tǒng)，維持胞內外鈣的動態(tài)平衡。在肝臟缺血再灌注時，細胞內Ca2+超載的機制比較復雜。目前多數學者認為有以下幾個方面

1.1鈣超載：肝細胞內自由鈣濃度[Cai2+]在調節(jié)許多42（1）鈣超載

①ATP缺乏，激活細胞膜上的Na+/Ca2+交換蛋白，

Ca2+大量進入細胞

②細胞膜通透性增加，Ca2+被動擴散入細胞增多

③線粒體ATP生成減少，Ca2+泵排Ca2+能力減弱

④線粒體保護性攝取攝鈣功能失常

⑤細胞膜內鈣敏磷酸酶可引起脂質過氧化的連鎖反應，使質膜上打開一些通道，Ca2+經這些通道順高濃度差進入細胞內

（1）鈣超載

①ATP缺乏，激活細胞膜上的Na+/Ca2+43鈣超載是肝細胞損傷關鍵機制之一：

①激活Ca2+依賴蛋白酶，破壞細胞骨架與

胞膜聯(lián)接的完整性

②激活Ca2+依賴磷脂酶C和磷脂酶A2,使

雙分子層結構紊亂破壞膜性結構

③線粒體鈣超載使其膜電位喪失，氧化磷

酸化脫偶聯(lián)，引起嚴重能量代謝障礙，

并促進了氧自由基的產生，這些終致細

胞不可逆損傷

鈣超載是肝細胞損傷關鍵機制之一：

①激活Ca2+依賴蛋白44（2）氧自由基生成

正常情況下1%-5%分子氧通過多種途徑產生自由基。但量小且隨時被氧化、分解，其形成與清除處于動態(tài)平衡，故不引起細胞毒性作用。生物體內有自由基清除系統(tǒng)，（如超氧化物岐化酶SOD），在生理狀態(tài)下生物體內通過自由基清除系統(tǒng)將生成的自由基維持在一種有利無害的低水平狀態(tài)

（2）氧自由基生成

正常情況下1%-5%分子氧通過多45維生素E等小分子量清除劑還原單線態(tài)氧、自由基、超氧自由基及脂質過氧化物自由基；酶類清除劑SOD將超氧自由基岐化為過氧化氫，過氧化氫酶清除過氧化氫生成水，從而阻斷羥基自由基的生成過氧化物酶及谷胱甘肽過氧化物酶都是體內有效的自由基清除劑，通過各種途徑消除和減低氧自由基對細胞的毒性作用

維生素E等小分子量清除劑還原單線態(tài)氧、自由基、超氧自46氧自由基在殺滅細菌、調節(jié)免疫等方面具有重要作用，但其生成量過多或清除系統(tǒng)某環(huán)節(jié)發(fā)生障礙，就對組織細胞產生毒性作用。

氧自由基損傷：對蛋白質的損傷；對核酸和DNA的損傷；對線立體損害主要發(fā)生在缺血缺氧時，線粒體內的細胞色素氧化酶系電子減少或停止，造成自由基生成增多，最后線粒體內膜的脂質受到破壞

氧自由基在殺滅細菌、調節(jié)免疫等方面具有重要作用，但其47肝臟缺血再灌注損傷（肝臟血流減少，甚至無血流灌注時，肝臟的供氧、供糖障礙首先影響到肝臟的能量合成，肝臟缺血再灌注過程中氧自由基的產生主要與以下因素有關肝臟缺血再灌注損傷（肝臟血流減少，甚至無血流灌注時，48

①肝細胞缺血缺氧，ATP分解代謝增加，分解產物次黃嘌呤在缺血組織中大量堆積，同時內源性抗氧化劑如SOD失活

缺血的刺激激活Ca2+依賴蛋白酶促進胞內無害的黃嘌呤脫氫酶（XDH）向有害的黃嘌呤氧化酶（XOD）轉化，后者利用胞內分子氧產生大量的氧自由基

①肝細胞缺血缺氧，ATP分解代謝增加，分解產物次黃嘌呤49②激活Kupffer細胞、中性粒細胞、吞噬

細胞和單核細胞通過細胞膜上NADPH氧

化酶，釋放大量氧自由基

③缺血、缺氧可使細胞色素氧化酶功能失

調，使細胞內線粒體膜電勢喪失，呼吸

鏈功能障礙電子傳遞鏈電子漏率增加，

從而促進氧自由基的產生

②激活Kupffer細胞、中性粒細胞、吞噬

細胞和單50氧自由基對肝細胞損傷機制主要有：①氧自由基對細胞膜雙分子層磷脂結構中的重要脂類進行氧化作用，生成多種脂質過氧化物，超氧化物和過氧化物促進鐵蛋白釋放鐵，使其與過氧化氫反應形成羥自由基，從而直接損傷細胞

氧自由基對肝細胞損傷機制主要有：①氧自由基對細胞膜雙分子層磷51②引起血小板、粒細胞在微血管中粘

附、聚集，造成微循環(huán)障礙

③直接氧化肝實質細胞核內DNA雙鏈

結構，引起DNA突變而造成肝臟結

構和功能的損傷

②引起血小板、粒細胞在微血管中粘

附、聚集，造成微循52（3）細胞因子

激活的Kupffer細胞及粘附于肝竇內的白細胞釋放多種細胞因子。這些細胞因子在肝內既可單個形式也可通過彼此間網絡狀協(xié)同作用而發(fā)揮對肝臟的損傷作用。TNF-α及IL-1目前研究最活躍。TNF-α不僅可直接導致肝竇內皮細胞腫脹，而且還可通過中性粒細胞和內皮細胞間的相互作用而導致肝臟微循環(huán)障礙

（3）細胞因子

激活的Kupffer細胞及粘附于肝53

TNF尚可激活粘附于肝竇內中性粒白細胞釋放氧自由基造成肝損傷。

IL-1不僅促使Kupffer細胞產生TNF，而且與TNF-α協(xié)同作用內皮細胞，誘導合成凝血酶及纖維蛋白酶，從而破壞內皮細胞的細胞骨架作用。

其他細胞因子如IL-6能誘導肝細胞釋放C反應蛋白、α-抗胰蛋白酶及纖維蛋白原等物質從而發(fā)揮對肝臟損傷作用

IL-2與TNF協(xié)同改變蛋白酶與抗蛋白酶間的平衡，引起內皮細胞基底膜蛋白降低

TNF尚可激活粘附于肝竇內中性粒白細胞釋放氧自由基造成54IL-10能抑制TNF-α的mRNA表達及激活細胞間粘附的分子，從而減輕肝臟的缺血再灌注損傷（Yoshidome）

血小板激活因子（PAF）來源于肝竇內皮細胞及激活Kupffer細胞、在肝臟缺血再灌注過程中，PAF既可激活粘附于肝竇內的中性粒細胞產生大量的氧自由基，同時也能誘導Kupffer細胞釋放TNF及IL-8等毒性介質而間接地造成肝臟損傷

IL-10能抑制TNF-α的mRNA表達及激活細胞間55（4）Kupffer細胞激活及中性粒細胞聚集

肝實質60%為肝細胞,及枯否、肝竇狀內皮細胞、中性粒細胞和單核細胞.人體80%的巨噬細胞位于肝臟—枯否細胞,不僅清除細菌,內毒素和炎癥介質,而且分泌細胞因子,白三烯,溶酶體酶和氧自由基

一方面感染等休克誘發(fā)因素改變料肝臟的血供,氧供及細胞水平的炎癥反應,而導致肝損害

另一方面在肝臟損傷中有清除產生炎癥介質,吞噬細菌及合成急性期蛋白作用

（4）Kupffer細胞激活及中性粒細胞聚集

肝實56肝缺血再灌注時肝組織出現雙相損傷，Ⅰ相損傷-與肝竇內KC的激活有關

Ⅱ相損傷-由聚集、活化的PMN介導所致

Jaeschke等在小鼠肝臟再灌注模型（阻斷45min）中發(fā)現肝臟Ⅰ相損傷與肝細胞周圍白細胞浸潤成度呈正相關，而Ⅱ相損傷期間未見到PMN進一步浸潤肝缺血再灌注時肝組織出現雙相損傷，Ⅰ相損傷-與肝57Kupffer細胞激活后釋放水溶性酶、炎癥介質和細胞因子，如TNF-α、氧自由基、IL-1和IL-6、前列腺素和NO，促發(fā)白細胞和血小板與肝血竇內皮細胞的黏附，加重內皮細胞損傷并導致肝內微循環(huán)紊亂，最后引起肝臟持續(xù)性的缺血

激活的Kupffer細胞降低線粒體質子ATP酶活性，減少肝細胞ATP合成。由KC誘導的氧應激和I相損傷可導致PMN激活，而啟動了PMN依賴性的II相損傷Kupffer細胞激活后釋放水溶性酶、炎癥介質和細胞58PMN依賴性的II相損傷

主要通過脫顆粒釋放蛋白酶，如彈性蛋白酶、組織蛋白酶等破壞肝組織，并可直接嵌塞在微血管，增加微血管通透性、出血和組織損傷，引起肝臟嚴重微循環(huán)障礙“無血流現象”；同時還可產生氧自由基而損傷肝組織

PMN依賴性的II相損傷

主要通過脫顆粒釋放蛋白酶，如59有研究證明在肝臟缺血再灌注時PMN聚集、黏附于肝臟內皮細胞并活化、釋放活性氧和蛋白酶等毒性物質攻擊肝細胞。

Suzuki在缺血后恢復血供小鼠注射FK506或環(huán)孢素時發(fā)現PMN浸潤明顯減少，肝臟損傷程度減輕，動物成活率升高。這與藥物抑制PMN合成細胞因子和表達粘附分子，阻斷PMN粘附、浸潤及活化有關

有研究證明在肝臟缺血再灌注時PMN聚集、黏附于肝臟內60（5）內皮素（Endothelins,ET）以及ET與一氧化氮（NO）濃度的失衡

ET來源于內皮細胞是具有廣泛生物學活性的多肽類物質，作用于動靜脈血管平滑肌而收縮血管。目前生物體內的ET主要有ET-1、ET-2、ET-3及血管活性腸肽異構體。ET-1是目前已知的作用最強、作用時間最持久的內源性縮血管活性肽

（5）內皮素（Endothelins,ET）以及ET與一氧61Stansby觀察12例人類供肝在冷保存期間及灌注后，短期供肝內的ET-1濃度均顯著的高于正常水平，Textor臨床研究結果類似上述結果提示，在肝臟缺血再灌注過程中，肝竇內皮細胞合成及分泌ET的能力明顯增強。這可能是因為一方面缺氧及胞漿內Ca2+濃度升高可促使內皮細胞產生ET，另一方面在再灌注短期內由門靜脈進入肝臟的腸源性內毒性也可刺激內皮細胞產生ET

Stansby觀察12例人類供肝在冷保存期間及灌注后，短期供62為了明確ET與肝臟缺血再灌注損傷的關系，Nakamura等在常溫下阻斷鼠肝臟血流120min后再恢復血流，發(fā)現在阻斷血流前預先給予適量抗ET-1單克隆抗體，復流后其肝內微循環(huán)血流量顯著增加，肝功能明顯改善，且鼠術后成活率也顯著增高

為了明確ET與肝臟缺血再灌注損傷的關系，Nakamu63ET和NO濃度的失衡是肝臟缺血再灌注損傷另一個重要原因，肝臟缺血再灌注時期，ET濃度明顯增高而NO濃度明顯降低。

ET濃度增高一方面是因為缺氧及胞漿內Ca2+濃度升高促使內皮細胞產生ET，另一方面在再灌注時期內由門靜脈進入肝臟的腸源性內毒素刺激內皮細胞產生ET，另外，在肝臟缺血缺氧情況下NO合成所必需的L-精氨酸酶、NADPH和氧均減少，以致體內NO濃度降低

ET和NO濃度的失衡是肝臟缺血再灌注損傷另一個重要原64ET濃度增高將導致微血管收縮，肝臟血流減少而引起肝臟微循環(huán)功能障礙，繼而導致肝細胞損傷

NO濃度降低可反饋性促進ET產生而加重了其收縮血管的效應，同時NO抑制黏附分子的表達及抑制血小板聚集的功能減弱而導致肝細胞損傷。

動物試驗中增大NO濃度及運用ET單克隆抗體能明顯減輕肝臟的缺血再灌注損傷

ET濃度增高將導致微血管收縮，肝臟血流減少而引起肝臟65（6）內毒素（Endotoxin）的作用

肝臟缺血再灌注時，腸源性內毒素可因腸道粘膜屏障損傷而隨門靜脈血流進入肝臟。目前的研究表明，內毒素在肝內可激活Kupffer細胞釋放多種毒性介質而造成肝臟損傷。Smadly等在給予鼠注射少量的內毒素后發(fā)現Kupffer細胞即可產生大量的TNF。Shirratori的實驗也證實，內毒素血癥可誘發(fā)Kupffer細胞產生氧自由基

（6）內毒素（End