微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用講解課件

微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用講解課件一、微生物的分離與培養(yǎng)

1．培養(yǎng)基[判斷正誤](1)培養(yǎng)基只有液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩種類(lèi)型。

()(2)培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分。

()(3)在配制培養(yǎng)基時(shí)，除滿(mǎn)足營(yíng)養(yǎng)需求外，還應(yīng)考慮pH、氧氣及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求。

()×√√一、微生物的分離與培養(yǎng)×√√2．無(wú)菌技術(shù)[連線]2．無(wú)菌技術(shù)[連線]3．純化大腸桿菌

(1)制備固體培養(yǎng)基的流程：計(jì)算→

→溶化→滅菌→

。

(2)微生物的接種方法：①平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面

操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。②稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的

，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面。稱(chēng)量倒平板連續(xù)劃線梯度稀釋3．純化大腸桿菌稱(chēng)量倒平板連續(xù)劃線梯度稀釋二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)[判斷正誤](1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。

()(2)篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源。

()(3)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用平板劃線法。

()(4)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則說(shuō)明篩選到分解尿素的細(xì)菌。

()√√××二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)[判斷正三、分解纖維素的微生物的分離

1．纖維素酶

(1)組成：一種

，它至少包括三種組分，即

。

(2)作用：纖維素

葡萄糖

2．篩選方法

(1)方法：剛果紅染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生

來(lái)篩選纖維素分解菌。

(2)培養(yǎng)基：以

為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。復(fù)合酶CX酶和葡萄糖苷酶C1酶、纖維二糖透明圈纖維素三、分解纖維素的微生物的分離復(fù)合酶CX酶和3．實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含

的環(huán)境

↓選擇培養(yǎng)：用

培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量

↓梯度稀釋

↓涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上

↓挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生

的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈纖維素選擇培養(yǎng)基纖維素酶3．實(shí)驗(yàn)流程纖維素選擇培養(yǎng)基纖維素酶[知識(shí)體系構(gòu)建]①碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子②PH、氧氣等③平板劃線法④稀釋涂布平板法⑤分解尿素的細(xì)菌⑥選擇培養(yǎng)基⑦酒精等化學(xué)藥物⑧高壓蒸汽滅菌⑨顯微鏡直接計(jì)數(shù)[知識(shí)體系構(gòu)建]①碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子②PH微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1．(2011·重慶卷·T2A)在瓊脂固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌。()2．(2011·重慶卷·T2BC)在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)，向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長(zhǎng)。()××微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1．(2011·重慶卷·3．(2010·山東卷·T34(2))對(duì)新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是高壓蒸汽滅菌鍋。實(shí)驗(yàn)前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理。()4．(2009·安徽卷·T6A)用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板()5．(2009·寧夏卷·T40(2))在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒。()√√√3．(2010·山東卷·T34(2))對(duì)新1．微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基：①概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。②分類(lèi)和應(yīng)用：劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)、鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏種1．微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類(lèi)、鑒定劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類(lèi)的微生物，如可用伊紅－美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化③培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽。此外還要滿(mǎn)足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能碳源無(wú)機(jī)碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無(wú)機(jī)物①構(gòu)成細(xì)胞中的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；②既是碳源又是能源有機(jī)碳源糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、花生粉餅等③培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)要素：營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能碳源無(wú)營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能氮源無(wú)機(jī)氮源NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無(wú)機(jī)氮合成含氮的代謝產(chǎn)物有機(jī)氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)因子維生素、氨基酸、堿基①酶和核酸的組成成分；②參與代謝過(guò)程中的酶促反應(yīng)④制備：計(jì)算→稱(chēng)量→溶化→滅菌→倒平板。營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能氮源無(wú)機(jī)氮源NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無(wú)[關(guān)鍵一點(diǎn)](1)微生物最常用的碳源是糖類(lèi)，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。

(2)對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含C、H、O、N的有機(jī)化合物既是碳源，又是氮源、能源。

(3)有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成某些維生素，作為特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。[關(guān)鍵一點(diǎn)](2)微生物培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)：①消毒和滅菌的區(qū)別：使用方法結(jié)

果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法等滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌(2)微生物培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)：使用方法結(jié)果常用的方法消毒較為②三種常用滅菌方法的比較：滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌時(shí)間灼燒滅菌接種環(huán)、接種針或其他金屬工具酒精燈火焰的充分燃燒層直至燒紅干熱滅菌玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等干熱滅菌箱內(nèi)，160℃～170℃1h～2h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa,121℃15min～30min②三種常用滅菌方法的比較：滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌2．微生物的純化培養(yǎng)及菌種的保藏

(1)原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，即一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。

(2)方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。2．微生物的純化培養(yǎng)及菌種的保藏方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：①第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物②每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1-2cm處(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(2)涂布平板時(shí)：①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：(1方法平板劃線法稀釋涂布平板法(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破②不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體——菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染方法平板劃線法稀釋涂布平板法(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一高考地位微生物的分離、純化和培養(yǎng)是微生物工程應(yīng)用的基礎(chǔ)，是近幾年高考的重點(diǎn)和熱點(diǎn)命題角度(1)以非選擇題的形式呈現(xiàn)，以環(huán)境污染為背景考查培養(yǎng)基及微生物的培養(yǎng)條件等，如典例1；(2)以選擇題的形式考查微生物的培養(yǎng)基的種類(lèi)及消毒滅菌等基礎(chǔ)知識(shí)，如典例2。高考地位微生物的分離、純化和培養(yǎng)是微生物工程應(yīng)用的基礎(chǔ)，是近[典例1]某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種、培養(yǎng)及菌落觀察與計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題。

(1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是________和________。

(2)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是________________________________________________。[典例1]某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種________作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

(4)培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說(shuō)明湖水樣品中有________種細(xì)菌。一般說(shuō)來(lái)，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越________。

(5)如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐________細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱(chēng)為_(kāi)_______。(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將[答案](1)氮源(碳源不作要求)碳源無(wú)機(jī)鹽水

(2)高壓蒸汽滅菌

(3)恒溫培養(yǎng)箱無(wú)菌水

(4)多高

(5)鹽(或NaCl)選擇培養(yǎng)基[答案](1)氮源(碳源不作要求)碳源無(wú)機(jī)鹽水[典例2]用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)

(

)①可以用相同的培養(yǎng)基②都需要使用接種針進(jìn)行接種③都需要在火焰旁進(jìn)行接種④都可以用來(lái)計(jì)數(shù)活菌

A．①②

B．③④

C．①③

D．②④[典例2]用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化1．(2010·山東卷T34(3)測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。()2．(2013·太原五中月考)要從土壤中分離獲取纖維素分解菌，應(yīng)選用纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。()3．(2013·許昌二次調(diào)研)在纖維素分解菌培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)培養(yǎng)基和接種環(huán)常采用的滅菌方法分別是高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌()微生物的分離與計(jì)數(shù)√√√1．(2010·山東卷T34(3)測(cè)定培4．[2011·山東卷T34(4)改編]透明圈是剛果紅與纖維素形成的復(fù)合物，可根據(jù)是否出現(xiàn)透明圈來(lái)判斷有無(wú)纖維素分解菌。()5．(2009·安徽卷·T6D)在“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”的實(shí)驗(yàn)中，確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。()6．[2009·寧夏卷·T40(3)]若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的比例合適。()√×√4．[2011·山東卷T34(4)改編]透明1．篩選菌株的原理

微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)；把纖維素作為培養(yǎng)基中的唯一碳源，只有能夠利用纖維素的微生物才能夠生長(zhǎng)；在無(wú)氮源的培養(yǎng)基上，只有自生固氮菌才能夠生長(zhǎng)。1．篩選菌株的原理2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法

(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：

①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。

②缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。

(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)：

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法②操作：

a．設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。

b．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。注意：統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。②操作：3．實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)

(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時(shí)，要至少涂布3個(gè)平板作重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。

(2)對(duì)照原則：

①判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。

②判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。

(3)在微生物數(shù)量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選取具有合適的菌落數(shù)的培養(yǎng)基，如細(xì)菌、放線菌、酵母菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有30～

300個(gè)菌落數(shù)為宜；霉菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有10～100個(gè)菌落數(shù)為宜。3．實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)[小結(jié)]

選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例①培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。②培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。③培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離出固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。[小結(jié)]選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例④當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。如石油是唯一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的生長(zhǎng)，而使能夠利用石油的微生物生存，得到能消除石油污染的微生物。⑤改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。④當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也高考地位近幾年本考點(diǎn)考查頻率不高，但在一些一些省市的非選擇題中有所涉及命題角度考題多以非選擇題的形式出現(xiàn)，微生物的生存及培養(yǎng)結(jié)合在一起考查，通過(guò)生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物計(jì)數(shù)、微生物分離與培養(yǎng)等實(shí)際問(wèn)題進(jìn)行考查，如典例3。高考地位近幾年本考點(diǎn)考查頻率不高，但在一些一些省市的非選擇題[典例3]富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一。主要是指利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，制定環(huán)境條件使僅適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可根據(jù)所需分離的微生物的特點(diǎn)，從物理、化學(xué)、生物及綜合多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等許多方面。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程。[典例3]富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用講解課件(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為_(kāi)_______________________，碳源為_(kāi)_______________________。

(2)實(shí)驗(yàn)原理是___________________________________________________________________________________。

(3)①→③重復(fù)培養(yǎng)的目的是__________________。

(4)⑤的菌落中大部分是降解________的微生物。

(5)⑥為_(kāi)_______組，⑦為_(kāi)_______組，設(shè)置⑥的目的是_______________________。

(6)⑤→⑥采用________法，接種到⑥的培養(yǎng)基中，在操作過(guò)程中為防止污染應(yīng)注意的事項(xiàng)是_____________。

(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為_(kāi)_________[解析]富集培養(yǎng)的培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基，可用于具有某種代謝特點(diǎn)的微生物，本題就是為了選擇出能分解對(duì)羥基苯甲酸的微生物。該實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基的碳源為對(duì)羥基苯甲酸；全過(guò)程包括篩選―→擴(kuò)大培養(yǎng)―→純化―→鑒定。

[答案](1)選擇培養(yǎng)基對(duì)羥基苯甲酸(2)利用以對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，經(jīng)富集培養(yǎng)，選擇出能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物(3)增大分解對(duì)羥基苯甲酸微生物的比例(4)對(duì)羥基苯甲酸(5)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明通過(guò)富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的目標(biāo)微生物(6)單細(xì)胞挑取接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，燒紅的接種環(huán)在空氣中冷卻，同時(shí)打開(kāi)皿蓋挑取菌種接種到試管中，并塞好棉塞，接種環(huán)在火焰上灼燒，殺滅殘留物[解析]富集培養(yǎng)的培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基[高考隨堂體驗(yàn)]1．(2012·北京高考)高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，在接種時(shí)不進(jìn)行嚴(yán)格無(wú)菌操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大的一項(xiàng)是(

)A.將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中

B.將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上C.將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上D.將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上解析：將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上，是植物組織培養(yǎng)的步驟之一，必須進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作，否則會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。答案：C[高考隨堂體驗(yàn)]1．(2012·北京高考)高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，2．(2011·新課標(biāo)全國(guó)卷)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐?wèn)題：(1)在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以_________________________________________________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。

(2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即________________和______________。

2．(2011·新課標(biāo)全國(guó)卷)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周?chē)纸馊Φ拇笮?，分解圈大說(shuō)明該菌株的降解能力________。

(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________。無(wú)菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈________附近進(jìn)行，以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染。

(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周?chē)纸馊Φ拇笮?，分?．(2009·上海高考)氯苯化合物是重要的有機(jī)化工原料，因其不易降解，會(huì)污染環(huán)境。某研究小組依照下列實(shí)驗(yàn)方案(圖1)篩選出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培養(yǎng)基配方如表1。3．(2009·上海高考)氯苯化合物是重要的有機(jī)化工原料，表1培養(yǎng)基的組成液體培養(yǎng)基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化鈉硝酸銨無(wú)機(jī)鹽(無(wú)碳)蒸餾水Ⅰ號(hào)10g5g5mg5g——1LⅡ號(hào)——50mg5g3g適量1LⅢ號(hào)——20～80mg5g3g適量1L表1培養(yǎng)基的組成液體培養(yǎng)基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化鈉硝酸銨無(wú)機(jī)(1)配制Ⅱ號(hào)固體培養(yǎng)基時(shí)，除添加Ⅱ號(hào)液體培養(yǎng)基成分外，還應(yīng)添加1%的________。

(2)培養(yǎng)基配制時(shí)，滅菌與調(diào)pH的先后順序是________。

(3)從用途上來(lái)說(shuō)，Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基和Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基分別屬于________培養(yǎng)基和________培養(yǎng)基。在Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基中，為SP1菌提供氮源的成分是________。

(4)在營(yíng)養(yǎng)缺乏或環(huán)境惡劣時(shí)，SP1的菌體會(huì)變成一個(gè)圓形的休眠體，這種休眠體被稱(chēng)為_(kāi)_______。

(1)配制Ⅱ號(hào)固體培養(yǎng)基時(shí)，除添加Ⅱ號(hào)液體培養(yǎng)基成分外，還應(yīng)(5)將SP1菌接種在含不同濃度氯苯的Ⅲ號(hào)培養(yǎng)液中培養(yǎng)，得到生長(zhǎng)曲線(如圖2)。從圖2可知SP1菌在________培養(yǎng)條件下最早停止生長(zhǎng)，其原因是________。(5)將SP1菌接種在含不同濃度氯苯的Ⅲ號(hào)培養(yǎng)液中培養(yǎng)，得到解析：(1)固體培養(yǎng)基必須含有適量的瓊脂。(2)配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)pH后滅菌，滅菌后再調(diào)pH可能導(dǎo)致雜菌污染。(3)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基是為了獲得更多的菌株，屬于通用培養(yǎng)基，Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基是為了選擇出SP1菌株，屬于選擇培養(yǎng)基，Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基成分中含N物質(zhì)為硝酸銨，則應(yīng)由它為SP1菌株提供氮源。(4)在惡劣環(huán)境下一些菌體會(huì)形成芽孢休眠體，來(lái)度過(guò)不良環(huán)境。解析：(1)固體培養(yǎng)基必須含有適量的瓊脂。(5)SP1菌株以氯苯為碳源，當(dāng)氯苯消耗盡，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生長(zhǎng)。答案：(1)瓊脂(2)先調(diào)pH，后滅菌(3)通用選擇硝酸銨(4)芽孢(5)20mg/L氯苯碳源最早耗盡“課時(shí)達(dá)標(biāo)檢測(cè)”見(jiàn)“限時(shí)集訓(xùn)（四十三）”(5)SP1菌株以氯苯為碳源，當(dāng)氯苯消耗盡，菌株因缺少碳源而微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用講解課件一、微生物的分離與培養(yǎng)

1．培養(yǎng)基[判斷正誤](1)培養(yǎng)基只有液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩種類(lèi)型。

()(2)培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分。

()(3)在配制培養(yǎng)基時(shí)，除滿(mǎn)足營(yíng)養(yǎng)需求外，還應(yīng)考慮pH、氧氣及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求。

()×√√一、微生物的分離與培養(yǎng)×√√2．無(wú)菌技術(shù)[連線]2．無(wú)菌技術(shù)[連線]3．純化大腸桿菌

(1)制備固體培養(yǎng)基的流程：計(jì)算→

→溶化→滅菌→

。

(2)微生物的接種方法：①平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面

操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。②稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的

，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面。稱(chēng)量倒平板連續(xù)劃線梯度稀釋3．純化大腸桿菌稱(chēng)量倒平板連續(xù)劃線梯度稀釋二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)[判斷正誤](1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。

()(2)篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源。

()(3)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用平板劃線法。

()(4)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則說(shuō)明篩選到分解尿素的細(xì)菌。

()√√××二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)[判斷正三、分解纖維素的微生物的分離

1．纖維素酶

(1)組成：一種

，它至少包括三種組分，即

。

(2)作用：纖維素

葡萄糖

2．篩選方法

(1)方法：剛果紅染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生

來(lái)篩選纖維素分解菌。

(2)培養(yǎng)基：以

為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。復(fù)合酶CX酶和葡萄糖苷酶C1酶、纖維二糖透明圈纖維素三、分解纖維素的微生物的分離復(fù)合酶CX酶和3．實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含

的環(huán)境

↓選擇培養(yǎng)：用

培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量

↓梯度稀釋

↓涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上

↓挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生

的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈纖維素選擇培養(yǎng)基纖維素酶3．實(shí)驗(yàn)流程纖維素選擇培養(yǎng)基纖維素酶[知識(shí)體系構(gòu)建]①碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子②PH、氧氣等③平板劃線法④稀釋涂布平板法⑤分解尿素的細(xì)菌⑥選擇培養(yǎng)基⑦酒精等化學(xué)藥物⑧高壓蒸汽滅菌⑨顯微鏡直接計(jì)數(shù)[知識(shí)體系構(gòu)建]①碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子②PH微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1．(2011·重慶卷·T2A)在瓊脂固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌。()2．(2011·重慶卷·T2BC)在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)，向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長(zhǎng)。()××微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1．(2011·重慶卷·3．(2010·山東卷·T34(2))對(duì)新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是高壓蒸汽滅菌鍋。實(shí)驗(yàn)前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理。()4．(2009·安徽卷·T6A)用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板()5．(2009·寧夏卷·T40(2))在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒。()√√√3．(2010·山東卷·T34(2))對(duì)新1．微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基：①概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。②分類(lèi)和應(yīng)用：劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)、鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏種1．微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類(lèi)、鑒定劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類(lèi)的微生物，如可用伊紅－美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化③培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽。此外還要滿(mǎn)足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能碳源無(wú)機(jī)碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無(wú)機(jī)物①構(gòu)成細(xì)胞中的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；②既是碳源又是能源有機(jī)碳源糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、花生粉餅等③培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)要素：營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能碳源無(wú)營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能氮源無(wú)機(jī)氮源NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無(wú)機(jī)氮合成含氮的代謝產(chǎn)物有機(jī)氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)因子維生素、氨基酸、堿基①酶和核酸的組成成分；②參與代謝過(guò)程中的酶促反應(yīng)④制備：計(jì)算→稱(chēng)量→溶化→滅菌→倒平板。營(yíng)養(yǎng)要素來(lái)源功能氮源無(wú)機(jī)氮源NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無(wú)[關(guān)鍵一點(diǎn)](1)微生物最常用的碳源是糖類(lèi)，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。

(2)對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含C、H、O、N的有機(jī)化合物既是碳源，又是氮源、能源。

(3)有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成某些維生素，作為特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。[關(guān)鍵一點(diǎn)](2)微生物培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)：①消毒和滅菌的區(qū)別：使用方法結(jié)

果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法等滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌(2)微生物培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)：使用方法結(jié)果常用的方法消毒較為②三種常用滅菌方法的比較：滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌時(shí)間灼燒滅菌接種環(huán)、接種針或其他金屬工具酒精燈火焰的充分燃燒層直至燒紅干熱滅菌玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等干熱滅菌箱內(nèi)，160℃～170℃1h～2h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa,121℃15min～30min②三種常用滅菌方法的比較：滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌2．微生物的純化培養(yǎng)及菌種的保藏

(1)原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，即一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。

(2)方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。2．微生物的純化培養(yǎng)及菌種的保藏方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：①第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物②每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1-2cm處(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(2)涂布平板時(shí)：①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：(1方法平板劃線法稀釋涂布平板法(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破②不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體——菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染方法平板劃線法稀釋涂布平板法(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一高考地位微生物的分離、純化和培養(yǎng)是微生物工程應(yīng)用的基礎(chǔ)，是近幾年高考的重點(diǎn)和熱點(diǎn)命題角度(1)以非選擇題的形式呈現(xiàn)，以環(huán)境污染為背景考查培養(yǎng)基及微生物的培養(yǎng)條件等，如典例1；(2)以選擇題的形式考查微生物的培養(yǎng)基的種類(lèi)及消毒滅菌等基礎(chǔ)知識(shí)，如典例2。高考地位微生物的分離、純化和培養(yǎng)是微生物工程應(yīng)用的基礎(chǔ)，是近[典例1]某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種、培養(yǎng)及菌落觀察與計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題。

(1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是________和________。

(2)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是________________________________________________。[典例1]某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種________作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

(4)培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說(shuō)明湖水樣品中有________種細(xì)菌。一般說(shuō)來(lái)，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越________。

(5)如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐________細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱(chēng)為_(kāi)_______。(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將[答案](1)氮源(碳源不作要求)碳源無(wú)機(jī)鹽水

(2)高壓蒸汽滅菌

(3)恒溫培養(yǎng)箱無(wú)菌水

(4)多高

(5)鹽(或NaCl)選擇培養(yǎng)基[答案](1)氮源(碳源不作要求)碳源無(wú)機(jī)鹽水[典例2]用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)

(

)①可以用相同的培養(yǎng)基②都需要使用接種針進(jìn)行接種③都需要在火焰旁進(jìn)行接種④都可以用來(lái)計(jì)數(shù)活菌

A．①②

B．③④

C．①③

D．②④[典例2]用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化1．(2010·山東卷T34(3)測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。()2．(2013·太原五中月考)要從土壤中分離獲取纖維素分解菌，應(yīng)選用纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。()3．(2013·許昌二次調(diào)研)在纖維素分解菌培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)培養(yǎng)基和接種環(huán)常采用的滅菌方法分別是高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌()微生物的分離與計(jì)數(shù)√√√1．(2010·山東卷T34(3)測(cè)定培4．[2011·山東卷T34(4)改編]透明圈是剛果紅與纖維素形成的復(fù)合物，可根據(jù)是否出現(xiàn)透明圈來(lái)判斷有無(wú)纖維素分解菌。()5．(2009·安徽卷·T6D)在“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”的實(shí)驗(yàn)中，確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。()6．[2009·寧夏卷·T40(3)]若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的比例合適。()√×√4．[2011·山東卷T34(4)改編]透明1．篩選菌株的原理

微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)；把纖維素作為培養(yǎng)基中的唯一碳源，只有能夠利用纖維素的微生物才能夠生長(zhǎng)；在無(wú)氮源的培養(yǎng)基上，只有自生固氮菌才能夠生長(zhǎng)。1．篩選菌株的原理2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法

(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：

①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。

②缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。

(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)：

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法②操作：

a．設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。

b．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。注意：統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。②操作：3．實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)

(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時(shí)，要至少涂布3個(gè)平板作重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。

(2)對(duì)照原則：

①判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。

②判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。

(3)在微生物數(shù)量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選取具有合適的菌落數(shù)的培養(yǎng)基，如細(xì)菌、放線菌、酵母菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有30～

300個(gè)菌落數(shù)為宜；霉菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有10～100個(gè)菌落數(shù)為宜。3．實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)[小結(jié)]

選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例①培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。②培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。③培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離出固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。[小結(jié)]選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例④當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。如石油是唯一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的生長(zhǎng)，而使能夠利用石油的微生物生存，得到能消除石油污染的微生物。⑤改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。④當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也高考地位近幾年本考點(diǎn)考查頻率不高，但在一些一些省市的非選擇題中有所涉及命題角度考題多以非選擇題的形式出現(xiàn)，微生物的生存及培養(yǎng)結(jié)合在一起考查，通過(guò)生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物計(jì)數(shù)、微生物分離與培養(yǎng)等實(shí)際問(wèn)題進(jìn)行考查，如典例3。高考地位近幾年本考點(diǎn)考查頻率不高，但在一些一些省市的非選擇題[典例3]富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一。主要是指利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，制定環(huán)境條件使僅適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可根據(jù)所需分離的微生物的特點(diǎn)，從物理、化學(xué)、生物及綜合多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等許多方面。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程。[典例3]富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用講解課件(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為_(kāi)_______________________，碳源為_(kāi)_______________________。

(2)實(shí)驗(yàn)原理是___________________________________________________________________________________。

(3)①→③重復(fù)培養(yǎng)的目的是__________________。

(4)⑤的菌落中大部分是降解________的微生物。

(5)⑥為_(kāi)_______組，⑦為_(kāi)_______組，設(shè)置⑥的目的是_______________________。

(6)⑤→⑥采用________法，接種到⑥的培養(yǎng)基中，在操作過(guò)程中為防止污染應(yīng)注意的事項(xiàng)是________