高中生物選修一基因工程的基本操作程序優(yōu)選ppt資料

高中生物選修一基因工程(jīyīngōngchéng)的基本操作程序第一頁(yè)，共48頁(yè)。基因工程(jīyīngōngchéng)的基本操作程序目的基因(jīyīn)的獲取基因表達(dá)(biǎodá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞操作過(guò)程目的基因的檢測(cè)與鑒定2022/11/302第二頁(yè)，共48頁(yè)。什么(shénme)叫基因？基因－－有遺傳效應(yīng)(xiàoyìng)的DNA片段。什么(shénme)叫遺傳效應(yīng)？

遺傳效應(yīng)－－能轉(zhuǎn)錄為mRNA，繼而翻譯為蛋白質(zhì)；能轉(zhuǎn)錄為核糖體RNA；能轉(zhuǎn)錄為轉(zhuǎn)運(yùn)RNA。第三頁(yè)，共48頁(yè)。原核細(xì)胞的基因(jīyīn)結(jié)構(gòu)編碼(biānmǎ)區(qū)非編碼(biānmǎ)區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游調(diào)控遺傳信息的表達(dá)(調(diào)控序列)轉(zhuǎn)錄RNA(編碼序列)第四頁(yè)，共48頁(yè)。編碼區(qū)非編碼區(qū)(下游)非編碼區(qū)（上游）(與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn))啟動(dòng)子(轉(zhuǎn)錄終止標(biāo)記)終止子原核細(xì)胞的基因(jīyīn)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄RNA(編碼序列)第五頁(yè)，共48頁(yè)。RNA聚合酶能夠識(shí)別調(diào)控序列中的結(jié)合(jiéhé)位點(diǎn)，并與其結(jié)合(jiéhé)。轉(zhuǎn)錄開(kāi)始(kāishǐ)后，RNA聚合酶沿DNA分子移動(dòng)，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。轉(zhuǎn)錄(zhuǎnlù)完畢后，RNA鏈釋放出來(lái)，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來(lái)。啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì).終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄RNA聚合酶:能夠識(shí)別啟動(dòng)子上結(jié)合位點(diǎn)的一種蛋白質(zhì).第六頁(yè)，共48頁(yè)。編碼(biānmǎ)區(qū)非編碼(biānmǎ)區(qū)非編碼(biānmǎ)區(qū)外顯子(能編碼蛋白質(zhì))啟動(dòng)子內(nèi)含子(不能編碼蛋白質(zhì))真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)上游終止子下游真核細(xì)胞的一個(gè)基因的編碼區(qū)轉(zhuǎn)錄出mRNA，需把其中的內(nèi)含子切除，外顯子拼接成成熟mRNA。(結(jié)構(gòu)基因)第七頁(yè)，共48頁(yè)。③啟動(dòng)子、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少(與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn))第四十四頁(yè)，共48頁(yè)。②原理(yuánlǐ)：__________DNA分子(fēnzǐ)雜交技術(shù)過(guò)程詳解——(即目的(mùdì)基因)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否(shìfǒu)插入了目的基因基因文庫(kù)的構(gòu)建(ɡòujiàn)方法第五步，將抗體（一抗）與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，這時(shí)抗體（一抗）與目的基因表達(dá)的蛋白（抗原）會(huì)特異結(jié)合?！惺軕B(tài)細(xì)胞吸收DNA分子第二十三頁(yè)，共48頁(yè)。②要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)(wùzhì)，一般為乙酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的Vir區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使T-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNA上。(三)將目的(mùdì)基因?qū)胧荏w細(xì)胞用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA需把其中的內(nèi)含子切除，外顯子拼接成成熟mRNA。(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞真核細(xì)胞的基因(jīyīn)結(jié)構(gòu)編碼(biānmǎ)區(qū)非編碼(biānmǎ)區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA

聚合酶結(jié)合位點(diǎn)（啟動(dòng)子）。非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子第八頁(yè)，共48頁(yè)。獲得目的(mùdì)基因的方法從基因文庫(kù)中獲取目的(mùdì)基因（1）什么是基因文庫(kù)？（2）怎樣從基因文庫(kù)中得到我們(wǒmen)所需的目的基因？種類：基因組文庫(kù)：部分基因文庫(kù)：(如cDNA文庫(kù))利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因人工合成

含有一種生物的全部基因含有一種生物的部分基因未知序列基因較小已知序列已知序列2022/11/309第九頁(yè)，共48頁(yè)。提取(tíqǔ)某種生物的全部DNA用適當(dāng)(shìdàng)的限制酶切一定大小(dàxiǎo)的DNA片段將DNA片段與載體連接導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存基因組文庫(kù)（1）直接分離法(鳥槍法)1.構(gòu)建基因文庫(kù)——將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫(kù)。第十頁(yè)，共48頁(yè)。某種生物(shēngwù)的單鏈mRNA單鏈互補(bǔ)(hùbǔ)DNA雙鏈cDNA片段(piànduàn)導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存與載體連接cDNA文庫(kù)反轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶（2）反轉(zhuǎn)錄法：cDNA的合成流程圖解第十一頁(yè)，共48頁(yè)。cDNA合成(héchéng)過(guò)程第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的DNA單鏈，形成RNA-DNA雜交分子(fēnzǐ)。第二步，核酸酶H使RNA-DNA雜交分子(fēnzǐ)中的RNA鏈降解，使之變成單鏈的DNA。第三步，以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的DNA鏈，形成雙鏈DNA分子(fēnzǐ)。2022/11/3012第十二頁(yè)，共48頁(yè)。依據(jù)：目的基因的有關(guān)(yǒuguān)信息。如：根據(jù)(gēnjù)基因(jīyīn)的核苷酸序列基因(jīyīn)的功能、基因(jīyīn)在染色體上的位置基因(jīyīn)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA基因(jīyīn)的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。2．如何從基因文庫(kù)中得到所需要的基因？2022/11/3013第十三頁(yè)，共48頁(yè)?；蚪M文庫(kù)：一般針對(duì)原核生物的基因，因?yàn)榛蛏俨糠只蛭膸?kù)：一般針對(duì)真核生物的基因，如cDNA文庫(kù)文庫(kù)類型cDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)文庫(kù)大小小大基因中啟動(dòng)子無(wú)有基因中內(nèi)含子無(wú)有基因多少某種生物的部分基因某種生物的全部基因物種之間的基因交流可以部分基因可以說(shuō)明基因文庫(kù)的組建過(guò)程就包含基因工程的基本操作步驟。從基因文庫(kù)中獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性.基因文庫(kù)的構(gòu)建(ɡòujiàn)方法2022/11/3014第十四頁(yè)，共48頁(yè)。利用(lìyòng)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因2022/11/3015山西省孝義市第二(dìèr)中學(xué)第十五頁(yè)，共48頁(yè)。①概念(gàiniàn)：PCR全稱為_(kāi)______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)③條件(tiáojiàn)：_______________________、_______________、___________、___________.前提條件(tiáojiàn)：②原理(yuánlǐ)：__________④方式：以_____方式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：選修3P10聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA雙鏈復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對(duì)引物DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因2022/11/3016第十六頁(yè)，共48頁(yè)。⑥過(guò)程(guòchéng)：a、DNA變性(biànxìng)（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復(fù)性55℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成(xíngchéng)局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈2022/11/3017PCR擴(kuò)增儀第十七頁(yè)，共48頁(yè)。2022/11/3018第十八頁(yè)，共48頁(yè)。PCR技術(shù)DNA復(fù)制過(guò)程DNA變性（90～95℃）→退火（復(fù)性55~60℃）→子鏈延伸（70~75℃）→重復(fù)循環(huán)DNA復(fù)制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同點(diǎn)原則堿基互補(bǔ)配對(duì)條件模板、原料（dCTP、dATP、dGTP、dTTP）、能量、酶、引物等不同點(diǎn)解旋方式氫鍵在高溫下斷裂，雙鏈全部解開(kāi)解旋酶催化氫鍵逐步斷裂場(chǎng)所體外主要在細(xì)胞核中引物DNARNA酶熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）解旋酶、DNA聚合酶、DNA連接酶等結(jié)果在短時(shí)間內(nèi)形成大量的DNA片段形成完整的DNA分子利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的(mùdì)基因2022/11/3019第十九頁(yè)，共48頁(yè)。目的(mùdì)基因的mRNA單鏈DNA(cDNA）雙鏈DNA(即目的(mùdì)基因)反轉(zhuǎn)錄(zhuǎnlù)合成1）反轉(zhuǎn)錄法：

以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列目的基因推測(cè)推測(cè)化學(xué)合成2）根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法：2022/11/3020人工合成的目的基因第二十頁(yè)，共48頁(yè)。2022/11/3021第二十一頁(yè)，共48頁(yè)?！蚬こ?jīyīngōngchéng)的核心1、目的(mùdì)：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在(cúnzài)，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建第二十二頁(yè)，共48頁(yè)。2、基因(jīyīn)表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)+目的基因(jīyīn)+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因(jīyīn)它們各自的作用(zuòyòng)是什么?第二十三頁(yè)，共48頁(yè)。啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞(xìbāo)中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞(xìbāo)篩選出來(lái)第二十四頁(yè)，共48頁(yè)。①載體與表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu)②用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又用到DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵③啟動(dòng)子、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少④目的基因不能單獨(dú)(dāndú)進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意(zhùyì)第二十五頁(yè)，共48頁(yè)。(三)將目的(mùdì)基因?qū)胧荏w細(xì)胞常用(chánɡyònɡ)的受體細(xì)胞：動(dòng)植物細(xì)胞、大腸桿菌(dàchánɡɡǎnjūn)、土壤農(nóng)桿菌、枯草桿菌等。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理：借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。轉(zhuǎn)化——目的基因進(jìn)入_________內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持_____和_____的過(guò)程受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)2022/11/3026第二十六頁(yè)，共48頁(yè)。方法(fāngfǎ)導(dǎo)入植物(zhíwù)細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞(xìbāo)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——

感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2022/11/3027第二十七頁(yè)，共48頁(yè)。1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：（1）農(nóng)桿菌(gǎnjūn)轉(zhuǎn)化法①農(nóng)桿菌(gǎnjūn)特點(diǎn)：易感染雙子葉植物(zhíwù)和裸子植物(zhíwù)，對(duì)大多數(shù)單子葉植物(zhíwù)沒(méi)有感染能力②原理(yuánlǐ)：Ti質(zhì)粒上的T---DNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。第二十八頁(yè)，共48頁(yè)。③過(guò)程(guòchéng)：④優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn):經(jīng)濟(jì)和有效目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物(zhíwù)細(xì)胞整合到受體細(xì)胞的染色體上目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)第二十九頁(yè)，共48頁(yè)。（2）基因(jīyīn)槍法（3）花粉管通道法第三十頁(yè)，共48頁(yè)。2、將目的(mùdì)基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞①方法：顯微注射法②程序：目的基因表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩╋@微注射(zhùshè)受精卵培養(yǎng)新性狀動(dòng)物第三十一頁(yè)，共48頁(yè)。3、將目的基因?qū)胛⑸?shēngwù)細(xì)胞①原核生物(shēngwù)特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少②方法：用Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合(hùnhé)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子第三十二頁(yè)，共48頁(yè)。細(xì)胞類型常用方法受體細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法體細(xì)胞將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的DNA動(dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)受精卵將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵→受精卵→顯微注射→早期胚胎培養(yǎng)→胚胎移植→發(fā)育成為具有新性狀的動(dòng)物微生物細(xì)胞Ca2+處理法原核細(xì)胞用Ca2+處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子將目的基因(jīyīn)導(dǎo)入受體的方法2022/11/3033第三十三頁(yè)，共48頁(yè)。（一）、檢測(cè)(jiǎncè)1、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物(shēngwù)染色體的DNA上是否插入了目的基因①.首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記,以此做探針(tànzhēn)③.使探針(tànzhēn)和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯示出雜交帶,表明染色體已插入染色體DNA中（1）方法:DNA分子雜交（2）過(guò)程:(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定——檢查是否成功第三十四頁(yè)，共48頁(yè)。歸納(guīnà)步驟第三十五頁(yè)，共48頁(yè)。DNA分子(fēnzǐ)雜交技術(shù)過(guò)程詳解——從轉(zhuǎn)基因生物中取出含有目的基因片段的雙鏈DNA，然后加熱使之變性成兩條單鏈。再用DNA探針與這兩條單鏈分別雜交（即復(fù)性，產(chǎn)生雙鏈）。所謂的探針就是(jiùshì)含有目的基因的同位素標(biāo)記過(guò)的DNA片段。當(dāng)目的基因成功導(dǎo)入我們要測(cè)的基因上時(shí)，探針就可以與之進(jìn)行堿基配對(duì)。當(dāng)目的基因未成功導(dǎo)入時(shí)，探針便無(wú)法與之正確配對(duì)形成雙鏈產(chǎn)物。這樣，通過(guò)檢測(cè)新合成雙鏈產(chǎn)物的放射性就可以判斷導(dǎo)入是否成功了。第三十六頁(yè)，共48頁(yè)。（二）、鑒定(jiàndìng)（個(gè)體生物學(xué)水平）2、檢測(cè)目的基因(jīyīn)是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA3、檢測(cè)目的基因(jīyīn)是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等①方法:分子雜交方法:抗原抗體雜交②過(guò)程:用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA第三十七頁(yè)，共48頁(yè)。Western雜交(zájiāo)（抗原—抗體雜交(zájiāo)）具體做法是：第一步，將目的基因在大腸桿菌中表達(dá)出蛋白質(zhì)；第二步，將表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動(dòng)物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出抗體（一抗）；第三步，從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，走凝膠電泳；第四步，將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上；第五步，將抗體（一抗）與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，這時(shí)抗體（一抗）與目的基因表達(dá)的蛋白（抗原）會(huì)特異結(jié)合。由于這種抗原—抗體的結(jié)合顯示不出條帶，所以(suǒyǐ)加入一種稱為二抗的抗體，它可以與一抗結(jié)合，二抗抗體上帶有特殊的標(biāo)記。如果目的基因表達(dá)出了蛋白質(zhì)，則結(jié)果為陽(yáng)性。第三十八頁(yè)，共48頁(yè)。歸納(guīnà)步驟第三十九頁(yè)，共48頁(yè)。

目的(mùdì)基因的檢測(cè)與鑒定檢測(cè)步驟目的方法原理工具現(xiàn)象1DNA分子雜交技術(shù)堿基互補(bǔ)配對(duì)放射性同位素作標(biāo)記的含目的基因的DNA片段雜交帶2檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNADNA分子雜交技術(shù)堿基互補(bǔ)配對(duì)放射性同位素作標(biāo)記的含目的基因的DNA片段雜交帶3檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原-抗體雜交抗體的專一性特定抗體雜交帶(陽(yáng)性反應(yīng))檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否(shìfǒu)插入了目的基因2022/11/3040第四十頁(yè)，共48頁(yè)。歸納(guīnà):基因工程的基本操作程序獲取目的基因從基因文庫(kù)利用PCR化學(xué)方法人工合成構(gòu)建基因表達(dá)(biǎodá)載體目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法目的基因的檢測(cè)與鑒定檢測(cè)：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯鑒定：第四十一頁(yè)，共48頁(yè)。2022/11/3042第四十二頁(yè)，共48頁(yè)。尋根問(wèn)底(xúngēnwèndǐ)——P9為什么要構(gòu)建基因文庫(kù)？直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？提示：構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過(guò)PCR方式從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫(kù)。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道(zhīdào)目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道(zhīdào)這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道(zhīdào)一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)。2022/11/3043第四十三頁(yè)，共48頁(yè)。尋根問(wèn)底：將目的基因直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡(jiǎn)便(jiǎnbiàn)嗎？如果這么做，結(jié)果會(huì)怎樣？——P11提示：有人采用總DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將(jíjiāng)一個(gè)生物中的總DNA提取出來(lái)，通過(guò)注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒(méi)有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建，這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣，也無(wú)法確定什么基因?qū)肓耸荏w植物。此法目前爭(zhēng)議頗多，嚴(yán)格來(lái)講不算基因工程。44第四十四頁(yè)，共48頁(yè)。思考與探究：1.作為基因工程表達(dá)載體(zàitǐ)，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2）通過(guò)cDNA文庫(kù)獲得的目的基因沒(méi)有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無(wú)法轉(zhuǎn)錄；（3）目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（4）為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（5）有時(shí)需要確定(quèdìng)目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要