最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件

基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討1內(nèi)容基因表達(dá)體系及優(yōu)劣勢大腸桿菌中表達(dá)蛋白質(zhì)可能碰到的問題內(nèi)容基因表達(dá)體系及優(yōu)劣勢2最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件3最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件4最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件5最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件6最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件7最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件8酵母細(xì)胞可生產(chǎn)分泌型蛋白；有天然立體結(jié)構(gòu)，有加糖修飾功能；可進(jìn)行染色體整合型基因表達(dá);糖鏈與哺乳動物加工的不一致，培養(yǎng)上清多糖濃度高;商品化表達(dá)體系：

釀酒酵母（Saccharomycecerevisiae）;畢氏酵母(Pichiapastoris);裂殖酵母（Schizosaccharomycepombe）酵母細(xì)胞可生產(chǎn)分泌型蛋白；有天然立體結(jié)構(gòu)，有加糖修飾功能；可9昆蟲細(xì)胞可以病毒感染的型式在成蟲中生產(chǎn)，也可在體外培養(yǎng)細(xì)胞中生產(chǎn)蛋白;適合分泌型和膜蛋白的表達(dá)，有加糖修飾；糖鏈有所區(qū)別，表達(dá)量有限；作為藥物宿主細(xì)胞未被FDA認(rèn)可昆蟲細(xì)胞可以病毒感染的型式在成蟲中生產(chǎn)，也可在體外培養(yǎng)細(xì)胞中10CHO細(xì)胞可進(jìn)行分泌表達(dá)，有天然立體結(jié)構(gòu)，加糖方式與人體蛋白質(zhì)完全一致；表達(dá)量不夠高，培養(yǎng)成本較高CHO細(xì)胞可進(jìn)行分泌表達(dá)，有天然立體結(jié)構(gòu)，加糖方式與人體蛋白11植物組織植物可大面積種植，可以廉價(jià)大規(guī)模生產(chǎn)；轉(zhuǎn)基因植物制作費(fèi)時(shí)，表達(dá)的組織特異性較難控制；表達(dá)量較難提高，分離純化不方便植物組織植物可大面積種植，可以廉價(jià)大規(guī)模生產(chǎn)；12動物乳腺組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)和活性的蛋白質(zhì)至乳汁，產(chǎn)量高，分離純化方便，特別適合藥用蛋白的生產(chǎn)；轉(zhuǎn)基因動物制作花費(fèi)巨大，實(shí)驗(yàn)周期長動物乳腺組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)和活性的蛋白質(zhì)至乳汁，產(chǎn)量13鳥類輸卵管組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)到蛋清，產(chǎn)量高，容易貯存和運(yùn)輸，分離純化方便；實(shí)驗(yàn)成本低，飼養(yǎng)費(fèi)用低；加糖方式可能與人有所不同鳥類輸卵管組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)到蛋清，產(chǎn)量高，14體系選擇研究基因功能:

大腸桿菌,裂殖酵母,昆蟲細(xì)胞,CHO細(xì)胞多肽藥物生產(chǎn):

大腸桿菌,畢氏酵母,CHO細(xì)胞,乳腺組織疫苗:

大腸桿菌,酵母,

大多數(shù)沿用細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行滅毒單抗生產(chǎn):

雜交瘤細(xì)胞工業(yè)酶生產(chǎn):

各種微生物

體系選擇研究基因功能:15在大腸桿菌中直接生產(chǎn)有活性的胰島素

在大腸桿菌中生產(chǎn)人凝血IX因子

在大腸桿菌生產(chǎn)Calcitonin類C端酰胺化短肽

在大腸桿菌中進(jìn)行蛋白質(zhì)的糖基化修飾

在酵母中進(jìn)行與哺乳動物細(xì)胞一致的糖基化

在雞輸卵管中進(jìn)行與哺乳動物細(xì)胞一致的糖基化

提高乳腺分泌表達(dá)的FactorIX類因子的活性

在植物中得到與哺乳動物細(xì)胞一致的糖基化有可能以后做到的事在大腸桿菌中直接生產(chǎn)有活性的胰島素

在大腸桿菌中生產(chǎn)人16在大腸桿菌中表達(dá)

外源基因在大腸桿菌中表達(dá)

外源基因17按蛋白質(zhì)類型分單純表達(dá):pJLA系列,用NcoI/NdeI導(dǎo)入AUG的載體融合表達(dá):融合各種tag,GST,CBD,MAL,GFP,etc

分泌表達(dá):pel/ompT分泌肽按啟動子分lac及衍生的tac,trc,pac,rac等啟動子IPTG誘導(dǎo)lamdaphagePL和PR啟動子熱誘導(dǎo)T7啟動子IPTG誘導(dǎo)T5啟動子IPTG誘導(dǎo)ara啟動子阿拉伯糖誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá)載體分類按蛋白質(zhì)類型分大腸桿菌表達(dá)載體分類18pJLA50X系列;pcDNAII;etcpET系列

(T7promoter,Novagen公司)pQE系列

(T5promoter,Qiagen公司)pMAL系列(周質(zhì)表達(dá),BioLabs公司)pGEX系列(GST融合表達(dá),Pharmacia公司)pBAD系列(Arabinose誘導(dǎo)型)常用表達(dá)載體pTYB系列(CBD融合,可以自我切割,BioLabs)pJLA50X系列;pcDNAII;etc常用表達(dá)載19ProteinAGST（glutathioneS-transferase）CBD(chitin-bindingdomain,BioLabs;cellulose-bindingdomain,Novagen)calmodulin-bindingdomain,Stratagene)MBP(maltose-bindingprotein)GFP(greenfluorescenceprotein)Thioredoxin**幫助二硫鍵形成Dsb(periplasmaenzymeDsbA,DsbC)**二硫鍵的形成與SUMO(smallubiquitin-relatedmodifier)KSI(ketosteroidisomerase)基本上全部沉淀各種融合蛋白表達(dá)載體幫助可溶化幫助分泌到周質(zhì)可用親和層析純化ProteinA20His-tag(6-8Histidine)T7-tag(MASMTGGQQMG)HSV-tag(QPELAPEDPED)S-tag(KETAAKFERQHMDS)VSV-G-tag(TTDIEMNRLGK)HA-tag(YPYDVPDYA)Flag-tag

(DYKDDDDK)Myc-tag(EQKLISEEDL)各種用于抗體識別的標(biāo)記His-tag(6-8Histidine)各種用于抗體識21Biotinylation-tag

100多AA的結(jié)構(gòu)域,

在大腸桿菌中被識別為生物素化的位點(diǎn).Promega的PinPointTMXa-1;Invitrogen的pET104-DEST.未命名

DVEAWLGAR,被用來和streptoavidin結(jié)合

(個(gè)人通訊)

未命名

一些病毒外殼蛋白的片段,破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)導(dǎo)致容易進(jìn)入細(xì)胞有前景的特殊用途的tagBiotinylation-tag有前景的特殊用途的tag22DTT:intein的↓Cys

溴化氰:Met↓Thrombin:LVPR↓GSFactorXa:IEGR↓Enterokinase:DDDDK↓PreScissionTMprotease:

LEVLFQ↓GPGenenaseI

TMPGAAHY↓TEVprotease:

ENLYFQ↓G融合蛋白的專一性切割DTT:int23BL21(DE3)/pLysS:自身表達(dá)T7RNApolymerase

適用pET系列等帶T7啟動子的載體M15/SG13009:自身表達(dá)T5RNApolymerase

適用pQE系列等帶T5啟動子的載體BL21TrxB(DE3):thioredoxinreductase突變

Origami:thioredoxinreductase/glutathionereductase雙突變適合帶thioredoxinreductase的融合表達(dá)載體,幫助形成更多的二硫鍵BR21CodonPlusRIL:富含AT的真核生物基因的表達(dá)BR21CodonPlusRP:富含GC的真核生物基因的表達(dá)特殊的表達(dá)用菌株BL21(DE3)/pLysS:自身表達(dá)T7RNAp24NovagenStratageneInvitrogenBioLabsQiagenPharmaciaPromegaClontechRocheGibco/BRL重要的原核表達(dá)質(zhì)粒提供商N(yùn)ovagen重要的原核表達(dá)質(zhì)粒提供商25如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)有二硫鍵并需要正確的立體結(jié)構(gòu),盡可能進(jìn)行可溶性表達(dá);如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)沒有二硫鍵或只用來制備抗血清,采用包含體表達(dá)比較好;如果希望表達(dá)的多肽的分子量小于10kDa,一定要進(jìn)行融合表達(dá)如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)有二硫鍵并需要正確的立體結(jié)構(gòu),盡可能進(jìn)行26采用MBD融合采用GST融合采用CBD融合采用thioredoxin融合采用Origami等宿主菌降低菌體培養(yǎng)的速度

溫度(15-30℃),

降低轉(zhuǎn)速

讓表達(dá)產(chǎn)物可溶化采用MBD融合讓表達(dá)產(chǎn)物可溶化27采用CBD融合(pET36/37)采用Dsb融合(pET39/40)采用帶pelB/ompT引導(dǎo)肽的載體

(pET12/20/22)采用帶MBD融合(pMAL載體,Biolabs)采用帶SUMO融合(pETSUMO,Invitrogen)讓蛋白質(zhì)分泌到間質(zhì)去純化方便:先用EDTA/蔗糖溶液處理,然后5mMMgSO4洗出采用CBD融合(pET36/37)讓蛋白質(zhì)分泌到間質(zhì)去純28透析法:簡單;但費(fèi)時(shí),費(fèi)緩沖液,蛋白質(zhì)濃度不能過高(容易產(chǎn)生沉淀)快速稀釋法:

最常用的小規(guī)模復(fù)性方法;但比較費(fèi)時(shí),費(fèi)緩沖液,蛋白質(zhì)的濃度不能高(容易產(chǎn)生沉淀)超濾透析法:比較省緩沖液,處理量大;但費(fèi)時(shí),要控制好蛋白質(zhì)濃度凝膠過濾法:

快速,可重復(fù)性高,不會產(chǎn)生沉淀,操作復(fù)雜一點(diǎn)

親和層析復(fù)性法,水相二相法,etc包含體來源蛋白質(zhì)的復(fù)性透析法:簡單;但費(fèi)時(shí),費(fèi)緩沖液,蛋白質(zhì)濃度不能過高(29表達(dá)量不夠高；包含體在8M尿素中不能溶解；重組蛋白在大腸桿菌中表達(dá)的分子量偏??；帶His-tag重組蛋白不吸附到Ni-chelating樹脂上；Ni-chelating分離純化的效果不好；GST融合蛋白不吸附到glutathione-Sepharose上；包含體來源的采用透析法或稀釋法復(fù)性時(shí)全部沉淀；Ni-chelating錯(cuò)用DTT后發(fā)生黑色沉淀該怎么辦？貴重的親和層析樹脂經(jīng)常發(fā)生結(jié)塊該怎么辦？某些表達(dá)載體的表達(dá)效率在放大培養(yǎng)時(shí)無法提高經(jīng)常碰到的問題表達(dá)量不夠高；經(jīng)常碰到的問題30嘗試不同表達(dá)載體，特別是N端有融合蛋白的載體嘗試不同表達(dá)載體，特別是N端有融合蛋白的載體31是不是忘了加還原劑（DTT或巰基乙醇）？是不是在－20℃凍存過？用4M鹽酸胍試試是不是忘了加還原劑（DTT或巰基乙醇）？32是不是酸性蛋白質(zhì)？是不是蛋白質(zhì)的合成提前中止了？（富含Arg,Ile,Leu,Pro這幾種氨基酸）可以嘗試用BL21CodonPlusRIL或RP作宿主菌(Stratagen)；使用C端帶His-tag的融合表達(dá)載體（如pET21,Novagen）以便純化全長的融合蛋白是不是酸性蛋白質(zhì)？33His-tag被操作過程混入的重金屬離子所飽和，可以通過添加0.5mMEDTA來去除重金屬離子的干擾；His-tag被包裹在不易和樹脂發(fā)生結(jié)合的位置（比較罕見）;其他不明原因?qū)е氯踅Y(jié)合His-tag被操作過程混入的重金屬離子所飽和，可以通過添加34樣品沒有很好細(xì)心去除不溶性物質(zhì)重復(fù)使用前樹脂沒有洗干凈蛋白質(zhì)之間存在相互作用可以提高鹽濃度,改變pH,添加2-6M尿素等方法來洗去雜蛋白質(zhì)樣品沒有很好細(xì)心去除不溶性物質(zhì)35是不是在進(jìn)行復(fù)性時(shí)用了Redoxbuffer是不是在進(jìn)行復(fù)性時(shí)用了Redoxbuffer36嘗試用Ureagradient/Gelfiltration來解決嘗試用Ureagradient/Ge37盡快用0.1NHCl沖洗盡快用0.1NHCl沖洗38用0.1NNaOH/0.1%SDS洗用0.1NNaOH/0.1%SDS洗39主要是溶氧量的問題,可以通過在搖瓶中加入不同量的培養(yǎng)基的方式來確定最佳體積主要是溶氧量的問題,可以通過在搖瓶中加入不同40

結(jié)束語謝謝大家聆聽?。?！41

結(jié)束語謝謝大家聆聽！?。?1基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討42內(nèi)容基因表達(dá)體系及優(yōu)劣勢大腸桿菌中表達(dá)蛋白質(zhì)可能碰到的問題內(nèi)容基因表達(dá)體系及優(yōu)劣勢43最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件44最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件45最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件46最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件47最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件48最新基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討課件49酵母細(xì)胞可生產(chǎn)分泌型蛋白；有天然立體結(jié)構(gòu)，有加糖修飾功能；可進(jìn)行染色體整合型基因表達(dá);糖鏈與哺乳動物加工的不一致，培養(yǎng)上清多糖濃度高;商品化表達(dá)體系：

釀酒酵母（Saccharomycecerevisiae）;畢氏酵母(Pichiapastoris);裂殖酵母（Schizosaccharomycepombe）酵母細(xì)胞可生產(chǎn)分泌型蛋白；有天然立體結(jié)構(gòu)，有加糖修飾功能；可50昆蟲細(xì)胞可以病毒感染的型式在成蟲中生產(chǎn)，也可在體外培養(yǎng)細(xì)胞中生產(chǎn)蛋白;適合分泌型和膜蛋白的表達(dá)，有加糖修飾；糖鏈有所區(qū)別，表達(dá)量有限；作為藥物宿主細(xì)胞未被FDA認(rèn)可昆蟲細(xì)胞可以病毒感染的型式在成蟲中生產(chǎn)，也可在體外培養(yǎng)細(xì)胞中51CHO細(xì)胞可進(jìn)行分泌表達(dá)，有天然立體結(jié)構(gòu)，加糖方式與人體蛋白質(zhì)完全一致；表達(dá)量不夠高，培養(yǎng)成本較高CHO細(xì)胞可進(jìn)行分泌表達(dá)，有天然立體結(jié)構(gòu)，加糖方式與人體蛋白52植物組織植物可大面積種植，可以廉價(jià)大規(guī)模生產(chǎn)；轉(zhuǎn)基因植物制作費(fèi)時(shí)，表達(dá)的組織特異性較難控制；表達(dá)量較難提高，分離純化不方便植物組織植物可大面積種植，可以廉價(jià)大規(guī)模生產(chǎn)；53動物乳腺組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)和活性的蛋白質(zhì)至乳汁，產(chǎn)量高，分離純化方便，特別適合藥用蛋白的生產(chǎn)；轉(zhuǎn)基因動物制作花費(fèi)巨大，實(shí)驗(yàn)周期長動物乳腺組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)和活性的蛋白質(zhì)至乳汁，產(chǎn)量54鳥類輸卵管組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)到蛋清，產(chǎn)量高，容易貯存和運(yùn)輸，分離純化方便；實(shí)驗(yàn)成本低，飼養(yǎng)費(fèi)用低；加糖方式可能與人有所不同鳥類輸卵管組織分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)到蛋清，產(chǎn)量高，55體系選擇研究基因功能:

大腸桿菌,裂殖酵母,昆蟲細(xì)胞,CHO細(xì)胞多肽藥物生產(chǎn):

大腸桿菌,畢氏酵母,CHO細(xì)胞,乳腺組織疫苗:

大腸桿菌,酵母,

大多數(shù)沿用細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行滅毒單抗生產(chǎn):

雜交瘤細(xì)胞工業(yè)酶生產(chǎn):

各種微生物

體系選擇研究基因功能:56在大腸桿菌中直接生產(chǎn)有活性的胰島素

在大腸桿菌中生產(chǎn)人凝血IX因子

在大腸桿菌生產(chǎn)Calcitonin類C端酰胺化短肽

在大腸桿菌中進(jìn)行蛋白質(zhì)的糖基化修飾

在酵母中進(jìn)行與哺乳動物細(xì)胞一致的糖基化

在雞輸卵管中進(jìn)行與哺乳動物細(xì)胞一致的糖基化

提高乳腺分泌表達(dá)的FactorIX類因子的活性

在植物中得到與哺乳動物細(xì)胞一致的糖基化有可能以后做到的事在大腸桿菌中直接生產(chǎn)有活性的胰島素

在大腸桿菌中生產(chǎn)人57在大腸桿菌中表達(dá)

外源基因在大腸桿菌中表達(dá)

外源基因58按蛋白質(zhì)類型分單純表達(dá):pJLA系列,用NcoI/NdeI導(dǎo)入AUG的載體融合表達(dá):融合各種tag,GST,CBD,MAL,GFP,etc

分泌表達(dá):pel/ompT分泌肽按啟動子分lac及衍生的tac,trc,pac,rac等啟動子IPTG誘導(dǎo)lamdaphagePL和PR啟動子熱誘導(dǎo)T7啟動子IPTG誘導(dǎo)T5啟動子IPTG誘導(dǎo)ara啟動子阿拉伯糖誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá)載體分類按蛋白質(zhì)類型分大腸桿菌表達(dá)載體分類59pJLA50X系列;pcDNAII;etcpET系列

(T7promoter,Novagen公司)pQE系列

(T5promoter,Qiagen公司)pMAL系列(周質(zhì)表達(dá),BioLabs公司)pGEX系列(GST融合表達(dá),Pharmacia公司)pBAD系列(Arabinose誘導(dǎo)型)常用表達(dá)載體pTYB系列(CBD融合,可以自我切割,BioLabs)pJLA50X系列;pcDNAII;etc常用表達(dá)載60ProteinAGST（glutathioneS-transferase）CBD(chitin-bindingdomain,BioLabs;cellulose-bindingdomain,Novagen)calmodulin-bindingdomain,Stratagene)MBP(maltose-bindingprotein)GFP(greenfluorescenceprotein)Thioredoxin**幫助二硫鍵形成Dsb(periplasmaenzymeDsbA,DsbC)**二硫鍵的形成與SUMO(smallubiquitin-relatedmodifier)KSI(ketosteroidisomerase)基本上全部沉淀各種融合蛋白表達(dá)載體幫助可溶化幫助分泌到周質(zhì)可用親和層析純化ProteinA61His-tag(6-8Histidine)T7-tag(MASMTGGQQMG)HSV-tag(QPELAPEDPED)S-tag(KETAAKFERQHMDS)VSV-G-tag(TTDIEMNRLGK)HA-tag(YPYDVPDYA)Flag-tag

(DYKDDDDK)Myc-tag(EQKLISEEDL)各種用于抗體識別的標(biāo)記His-tag(6-8Histidine)各種用于抗體識62Biotinylation-tag

100多AA的結(jié)構(gòu)域,

在大腸桿菌中被識別為生物素化的位點(diǎn).Promega的PinPointTMXa-1;Invitrogen的pET104-DEST.未命名

DVEAWLGAR,被用來和streptoavidin結(jié)合

(個(gè)人通訊)

未命名

一些病毒外殼蛋白的片段,破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)導(dǎo)致容易進(jìn)入細(xì)胞有前景的特殊用途的tagBiotinylation-tag有前景的特殊用途的tag63DTT:intein的↓Cys

溴化氰:Met↓Thrombin:LVPR↓GSFactorXa:IEGR↓Enterokinase:DDDDK↓PreScissionTMprotease:

LEVLFQ↓GPGenenaseI

TMPGAAHY↓TEVprotease:

ENLYFQ↓G融合蛋白的專一性切割DTT:int64BL21(DE3)/pLysS:自身表達(dá)T7RNApolymerase

適用pET系列等帶T7啟動子的載體M15/SG13009:自身表達(dá)T5RNApolymerase

適用pQE系列等帶T5啟動子的載體BL21TrxB(DE3):thioredoxinreductase突變

Origami:thioredoxinreductase/glutathionereductase雙突變適合帶thioredoxinreductase的融合表達(dá)載體,幫助形成更多的二硫鍵BR21CodonPlusRIL:富含AT的真核生物基因的表達(dá)BR21CodonPlusRP:富含GC的真核生物基因的表達(dá)特殊的表達(dá)用菌株BL21(DE3)/pLysS:自身表達(dá)T7RNAp65NovagenStratageneInvitrogenBioLabsQiagenPharmaciaPromegaClontechRocheGibco/BRL重要的原核表達(dá)質(zhì)粒提供商N(yùn)ovagen重要的原核表達(dá)質(zhì)粒提供商66如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)有二硫鍵并需要正確的立體結(jié)構(gòu),盡可能進(jìn)行可溶性表達(dá);如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)沒有二硫鍵或只用來制備抗血清,采用包含體表達(dá)比較好;如果希望表達(dá)的多肽的分子量小于10kDa,一定要進(jìn)行融合表達(dá)如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)有二硫鍵并需要正確的立體結(jié)構(gòu),盡可能進(jìn)行67采用MBD融合采用GST融合采用CBD融合采用thioredoxin融合采用Origami等宿主菌降低菌體培養(yǎng)的速度

溫度(15-30℃),

降低轉(zhuǎn)速

讓表達(dá)產(chǎn)物可溶化采用MBD融合讓表達(dá)產(chǎn)物可溶化68采用CBD融合(pET36/37)采用Dsb融合(pET39/40)采用帶pelB/ompT引導(dǎo)肽的載體

(pET12/20/22)采用帶MBD融合(pMAL載體,Biolabs)采用帶SUMO融合(pETSUMO,Invitrogen)讓蛋白質(zhì)分泌到間質(zhì)去純化方便:先用EDTA/蔗糖溶液處理,然后5mMMgSO4洗出采用CBD融合(pET36/37)讓蛋白質(zhì)分泌到間質(zhì)去純69透析法:簡單;但費(fèi)時(shí),費(fèi)緩沖液,蛋白質(zhì)濃度不能過高(容易產(chǎn)生沉淀)快速稀釋法:

最常用的小規(guī)模復(fù)性方法;但比較費(fèi)時(shí),費(fèi)緩沖液,蛋白質(zhì)的濃度不能高(容易產(chǎn)生沉淀)超濾透析法:比較省緩沖液,處理量大;但費(fèi)時(shí),要控制好蛋白質(zhì)濃度凝膠過濾法:

快速,可重復(fù)性高,不會產(chǎn)生沉淀,操作復(fù)雜一點(diǎn)

親和層析復(fù)性法,