細(xì)胞懸浮培養(yǎng)課件

細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)09級2班懸浮培養(yǎng)基cellsuspensionculture

細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的定義

單細(xì)胞制備的方法

懸浮培養(yǎng)的條件

細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的類型

懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化

國內(nèi)懸浮培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化存在的挑戰(zhàn)和展望

細(xì)胞初始培養(yǎng)定義1：細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。應(yīng)用學(xué)科：細(xì)胞生物學(xué)（一級學(xué)科）；細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程（二級學(xué)科）定義2：在流動(dòng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)非貼壁的懸浮細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞或組織的培養(yǎng)方法。細(xì)胞附著在微運(yùn)載體上的培養(yǎng)也是一種懸浮培養(yǎng)。應(yīng)用學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級學(xué)科）；方法與技術(shù)（二級學(xué)科）cellsuspensionculture單細(xì)胞制備的方法機(jī)械法

酶解法

愈傷組織誘導(dǎo)法

cellsuspensionculture注意：只有薄壁組織排列松散，細(xì)胞間接觸點(diǎn)很少時(shí)用機(jī)械法分離葉肉細(xì)胞才能取得成功。懸浮培養(yǎng)的條件

一個(gè)成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足三個(gè)基本條件：一是懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較?。欢蔷恍院?，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同；三是生長迅速。cellsuspensionculture細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的類型:分批培養(yǎng)（batchculture）

連續(xù)培養(yǎng)(continuousculture)cellsuspensionculture滯后期對數(shù)生長期減慢期靜止期細(xì)胞數(shù)培養(yǎng)初期懸浮細(xì)胞處于滯后期，細(xì)胞很少分裂；進(jìn)入對數(shù)生長期后，細(xì)胞分裂活躍數(shù)目迅速增加；經(jīng)過3~4個(gè)細(xì)胞世代之后，培養(yǎng)基中某些營養(yǎng)物質(zhì)已經(jīng)耗盡，或是有毒代謝產(chǎn)物的積累，增長逐漸緩慢，進(jìn)入靜止期后，增長完全停止。分批培養(yǎng)是指細(xì)胞在一定容積的培養(yǎng)中進(jìn)行培養(yǎng)，目的是建立單細(xì)胞培養(yǎng)物。cellsuspensionculture

連續(xù)培養(yǎng)是通過控制加入定量的營養(yǎng)物質(zhì)使細(xì)胞生長率和細(xì)胞密度保持不變的一種培養(yǎng)方式，主要用于研究和生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)。cellsuspensionculture連續(xù)培養(yǎng)主要用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，通過添加新鮮培養(yǎng)液和排放已利用的培養(yǎng)液來平衡營養(yǎng)水平，使培養(yǎng)細(xì)胞長期處于靜止期狀態(tài)。開放式和封閉式區(qū)別開放式中：在注入新鮮培養(yǎng)基的同時(shí)，培養(yǎng)細(xì)胞隨同培養(yǎng)液一起流出。封閉式中：排出液中的細(xì)胞用機(jī)械方法收集后，又放入原培養(yǎng)基，所以其培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)目不斷增加。cellsuspensionculturecellsuspensionculture懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化

細(xì)胞同步化是指同一懸浮培養(yǎng)體系的所有細(xì)胞都同時(shí)通過細(xì)胞周期的某一特定時(shí)期。物理方法

化學(xué)方法cellsuspensionculture化學(xué)方法饑餓法

饑餓也是調(diào)整細(xì)胞同步化的方法之一。在一個(gè)培養(yǎng)體系中，如果細(xì)胞生長的基本成分喪失，而導(dǎo)致細(xì)胞因饑餓而分裂受阻，從而停留在某一分裂時(shí)期。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入所缺乏的成分或者將饑餓細(xì)胞轉(zhuǎn)入完整培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞分裂又可以重新恢復(fù)。饑餓導(dǎo)致的細(xì)胞分裂受阻，常常使細(xì)胞不能合成DNA，即不能進(jìn)入S期；或細(xì)胞分裂不能進(jìn)行，即不能進(jìn)入M期。抑制法

通過一些DNA合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞滯留在DNA合成前期，當(dāng)解除抑制后，即可獲得處于同一細(xì)胞周期-----G1期的同步化細(xì)胞。國內(nèi)懸浮培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化存在的挑戰(zhàn)和展望1、國內(nèi)懸浮培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的挑戰(zhàn)

2、展望cellsuspensionculturecellsuspensionculture展望

應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，快速實(shí)現(xiàn)懸浮培養(yǎng)技術(shù)在疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用只是搭建了一個(gè)升級的工藝平臺(tái)，而不是最終目的，行業(yè)和企業(yè)發(fā)展真正的動(dòng)力是新藥、新疫苗、新工藝以及配套技術(shù)的創(chuàng)新。例如：

無血清培養(yǎng)病毒生產(chǎn)技術(shù)的開發(fā)，包括無血清培養(yǎng)基的開發(fā)；利用合適的培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)染或馴化技術(shù)實(shí)現(xiàn)貼壁細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)構(gòu)建；新宿主細(xì)胞表達(dá)品種開發(fā)，如同一種產(chǎn)品采用新的宿主細(xì)胞表達(dá)或是開發(fā)