實(shí)驗(yàn)三、微生物大小的測(cè)定、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法課件

實(shí)驗(yàn)三微生物大小的測(cè)定與顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(一）、微生物大小的測(cè)定目的要求1.學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法。2.增強(qiáng)微生物細(xì)胞大小的感性認(rèn)識(shí)。實(shí)驗(yàn)原理鏡臺(tái)測(cè)微尺為中央部分刻有精確等分線的載玻片，將1mm等分100格，每格長(zhǎng)0.01mm。只用于校正目鏡測(cè)微尺。目鏡測(cè)微尺是可放入目鏡內(nèi)的圓形小玻片，精確等分50小格或100小格。由于不同顯微鏡或不同目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，目鏡測(cè)微尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度也不一樣。因此，測(cè)量前需先用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行校正。

球菌以直徑表示大小；桿菌用寬×長(zhǎng)表示。實(shí)驗(yàn)步驟安裝目鏡測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺將鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺(tái)上。分別在低、高倍鏡、油鏡下用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺計(jì)算鏡臺(tái)測(cè)微尺：將1mm等分為100小格，每小格長(zhǎng)0.01mm（即10μm）。目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（μm）=（兩重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)×10）/兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)菌體大小測(cè)定取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上酵母菌水浸片，在高倍鏡下測(cè)定酵母菌的長(zhǎng)和寬。選擇有代表性的10個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定，取平均值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄（書P50）1）將目鏡測(cè)微尺校正結(jié)果填入下表接目鏡放大倍數(shù)：——接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度/um低倍鏡高倍鏡油鏡2）將啤酒酵母測(cè)定結(jié)果填入下表測(cè)定次數(shù)目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度/um寬長(zhǎng)菌體大小/um目鏡測(cè)微尺格數(shù)寬度/um目鏡測(cè)微尺格數(shù)長(zhǎng)度/um123456789１０平均值目的要求1.明確血細(xì)胞球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。2.掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。（二）酵母菌的顯微鏡直接計(jì)數(shù)制備適當(dāng)濃度的菌懸液取潔凈的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片靜置5分鐘用高倍鏡計(jì)數(shù)加樣品設(shè)5個(gè)中方格的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B計(jì)數(shù)板為25個(gè)中方格(本次試驗(yàn))

：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×25×104×B計(jì)數(shù)板為16個(gè)中方格：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×16×104×B注意事項(xiàng)取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡；一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5-10個(gè)菌體為宜；每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格（4個(gè)角和中央）計(jì)數(shù)；位于格線上的菌體一般數(shù)上不數(shù)下，數(shù)右不數(shù)左；若芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半，則作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。血球計(jì)數(shù)板使用完畢，用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格刻度；洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（書P５５）測(cè)定你所制備的樣品的含菌量。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/mＬ12345第一室第二室思考題為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正？在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍