細(xì)胞-干擾素醫(yī)學(xué)課件-

干擾素藥學(xué)院張倩倩1interferon(IFN)

干擾素藥學(xué)院1interferon(IFN)1病毒感染后的機(jī)體反應(yīng)干擾素及白介素自然殺傷細(xì)胞T細(xì)胞免疫非特異性免疫特異性免疫病毒感染后的機(jī)體反應(yīng)干擾素及白介素自然殺傷細(xì)胞T細(xì)胞免疫非特2

一干擾素的概念二干擾素的種類三干擾素的作用四干擾素抗病毒機(jī)理五生物學(xué)活性一干擾素的概念二干擾素的種類三3

一干擾素的概念概念：

干擾素（IFN）是一種細(xì)胞因子，它是機(jī)體感染病毒時(shí)，宿主細(xì)胞通過(guò)抗病毒反應(yīng)，而產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類似，功能相近的低分子糖蛋白。一干擾素的概念概念：4

二干擾素的種類二干擾素的種類5

三干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素

（1）抗病毒和抗腫瘤1）誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，干擾病毒復(fù)制；2）增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞殺傷；3）促進(jìn)MHC-Ⅰ類分子表達(dá)，增強(qiáng)CTL對(duì)病毒感染細(xì)胞和腫瘤等靶細(xì)胞的殺傷。

（2）免疫調(diào)節(jié)（較弱）：與Ⅱ型干擾素類似。三干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素6

三干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素（1）主要起免疫調(diào)節(jié)作用1）活化巨噬細(xì)胞；2）促進(jìn)APC(s)表達(dá)MHC-Ⅱ類分子，提高抗原遞呈能力；3）促進(jìn)MHC-Ⅰ類分子表達(dá)和增強(qiáng)CTL細(xì)胞的殺傷活性;4）增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性；5）促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖；（2）抗病毒和抗腫瘤作用(與Ⅰ型干擾素類似，次要)。三干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素7T細(xì)胞巨噬細(xì)胞B細(xì)胞粒細(xì)胞IFNNK細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞T細(xì)胞lNK細(xì)胞激活提高NK細(xì)胞活性抗病毒活性抑制細(xì)胞分裂抑制血細(xì)胞生成促進(jìn)MHCⅠ和MHCⅡ分子表達(dá)多種細(xì)胞干擾素的作用T細(xì)胞巨噬細(xì)胞B細(xì)胞粒細(xì)胞IFNNK細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞T細(xì)胞8

四干擾素抗病毒機(jī)理最初感染的細(xì)胞由于病毒核酸剌激被誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素，它透過(guò)細(xì)胞膜向外擴(kuò)散并進(jìn)入血液循環(huán)進(jìn)入其它細(xì)胞。干擾素不能直接阻止病毒吸附、穿入或釋放，而是作用于宿主細(xì)胞，使其產(chǎn)生抗病毒蛋白質(zhì)，附著于細(xì)胞的核蛋白體上，選擇性地抑制病毒mRNA翻譯為病毒蛋白質(zhì)，從而影響病毒結(jié)構(gòu)蛋白和酶類的合成，使復(fù)制受到阻礙而呈現(xiàn)抗病毒的作用。四干擾素抗病毒機(jī)理最初感染的細(xì)胞由于病毒核酸剌激9

四干擾素抗病毒機(jī)理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具有細(xì)胞種屬特征。即某一種動(dòng)物產(chǎn)生的干擾素只能保護(hù)同種屬或近緣種屬動(dòng)物細(xì)胞。干擾素是一種活性很強(qiáng)的生物制劑，既能治療病毒性疾病，又具有抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的作用。四干擾素抗病毒機(jī)理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具10四干擾素抗病毒機(jī)理四干擾素抗病毒機(jī)理11干擾素抗病毒作用干擾素抗病毒作用12作用機(jī)理 不是直接殺滅病毒IFN→

抗病毒蛋白基因→抗病毒蛋白(蛋白激酶,磷酸二脂酶)

↓ 降解病毒mRNA

抑制病毒蛋白合成抑制病毒組裝、釋放

↓

抑制病毒復(fù)制

中斷病毒感染；限制病毒擴(kuò)散

↓作用機(jī)理 不是直接殺滅病毒IFN→抗病毒蛋白基因→13五生物學(xué)活性:廣譜的抗病毒作用，一種IFN可以抑制多種病毒；抑制病毒感染、阻止病毒在體內(nèi)擴(kuò)散、促進(jìn)痊愈;調(diào)節(jié)免疫功能；抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；五生物學(xué)活性:廣譜的抗病毒作用，一種IFN可以抑制多種14

IFN作用特點(diǎn):產(chǎn)生的時(shí)間早；中斷受染細(xì)胞的病毒感染，限制病毒擴(kuò)散；IFN誘導(dǎo)的抗病毒蛋白，只對(duì)病毒起作用，不影響宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成。

IFN作用特點(diǎn):產(chǎn)生的時(shí)間早；15

謝謝謝謝16

17

18專題二抗體制藥第一節(jié)概述第二節(jié)單克隆抗體第三節(jié)基因工程抗體第四節(jié)噬菌體抗體工程第五節(jié)抗體診斷試劑和抗體藥物19專題二抗體制藥第一節(jié)概述1919第一節(jié)概述

1890年Behring和北里柴三郎發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素,建立了血清療法,開創(chuàng)了抗體制藥。

1937年Tiselius用電泳法將血清蛋白分離為白蛋白、α、β、γ球蛋白，并證明抗體活性主要存在于γ球蛋白組分。20第一節(jié)概述2020抗體工程藥物的概念通過(guò)細(xì)胞工程或基因工程方法制備，用于治療的單克隆抗體、抗體片段、基因工程改造的抗體，以及抗體免疫偶聯(lián)物或抗體融合蛋白,稱為抗體工程藥物。又稱抗體藥物、單克隆抗體治療劑、抗體治療劑?？贵w工程藥物的概念通過(guò)細(xì)胞工程或基因工程方法制備，用于治療的21抗原(antigen,Ag)---是指那些能夠刺激和/或誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答、產(chǎn)生抗體和/或致敏（效應(yīng)）淋巴細(xì)胞，同時(shí)又能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)外特異性結(jié)合，發(fā)生免疫反應(yīng)的物質(zhì)。如：病原微生物、免疫血清、藥物、疫苗對(duì)機(jī)體來(lái)說(shuō)，抗原相當(dāng)于一個(gè)國(guó)家已知的或潛在的、外部的或內(nèi)部的“敵人”?？乖?antigen,Ag)2223免疫原性：指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和/或致敏淋巴細(xì)胞的性能。

反應(yīng)原性：能與相應(yīng)的抗體和/或淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，發(fā)生反應(yīng)的性能。

23免疫原性：指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和/或致2324完全抗原：既具有免疫原性，又具有反應(yīng)原性的抗原。如微生物、異種血清半抗原：又稱不完全抗原。是指其本身只有反應(yīng)原性，但沒(méi)有免疫原性的簡(jiǎn)單小分子的抗原物質(zhì)。如某些藥物（青霉素等）、多糖、類脂。24完全抗原：既具有免疫原性，又具有反應(yīng)原性的抗原。如微生物2425目前，在中草藥中發(fā)現(xiàn)廣泛存在半抗原，如小檗堿、茶堿、丹參酮等，具有生化活性基因的化學(xué)成分都有可能成為半抗原，這些半抗原可與體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合成完全抗原，造成一些過(guò)敏反應(yīng)。25目前，在中草藥中發(fā)現(xiàn)廣泛存在半抗原，如小檗堿、茶堿、2526抗原的特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在反應(yīng)原性上。沙門氏桿菌大腸桿菌抗大腸桿菌的抗體抗沙門氏桿菌的抗體結(jié)合結(jié)合26抗原的特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在反應(yīng)原性上。沙門26抗體是對(duì)其抗原有極強(qiáng)專一性的魔彈或巡弋飛彈研究 以免疫轉(zhuǎn)印法檢測(cè)

特定抗原醫(yī)療 以毒素連結(jié)抗體攻擊

病變細(xì)胞檢驗(yàn) 以ELISA偵測(cè)特定

病原體27抗體是對(duì)其抗原有極強(qiáng)專一性的研究 以免疫轉(zhuǎn)印法檢測(cè)特27免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)抗體：能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有

免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)抗體：能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有28抗體的產(chǎn)生過(guò)程：

機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原物質(zhì)刺激后，B淋巴細(xì)胞被激活，增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白?？贵w的產(chǎn)生過(guò)程：29

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子量范圍從150,000到950,000道爾頓。分五類：IgG在血清中含量最高，達(dá)75~80%,是抗感染的主要抗體;IgM是五類免疫球蛋白中分子量最大的，為五聚體,是對(duì)一個(gè)抗原作出反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的

第一個(gè)抗體；IgA在黏膜表面、乳腺、淚腺形成，主要參與局部的免疫反應(yīng);IgD在血清中含量很低;IgE在血清含量最少。免疫球蛋白IgGIgMIgAIgDIgE免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子30動(dòng)物血清中產(chǎn)生抗體的時(shí)間示意圖抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再刺激后，IgＧ將取代IgM動(dòng)物血清中產(chǎn)生抗體的時(shí)間示意圖抗原刺激的第一至三周，IgM生31抗體研究的發(fā)展階段：①以1890年Behring發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表,用抗原免疫動(dòng)物來(lái)獲得多克隆抗體。②以1975年Milstein&Kohler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體(McAb)為代表。③以1994年Winter,創(chuàng)建了噬菌體抗體庫(kù)(repertoireofantibodiesdisplayedonphages)技術(shù),以基因工程方法制備抗體為代表。在此基礎(chǔ)上發(fā)展成抗體工程?？贵w研究的發(fā)展階段：32多克隆抗體:

一種抗原具有多個(gè)抗原決定簇,每個(gè)抗原決定簇都能刺激一個(gè)B細(xì)胞產(chǎn)生一種抗體。這樣所獲得的免疫血清是多種抗體的混和物。單克隆抗體(MonoclonalantibodyMcAb):

由一個(gè)抗原決定簇刺激的、單一的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合增殖后所產(chǎn)生的、高度均一的抗體。1234多克隆抗體:123433多克隆抗體和單克隆抗體PuresingleAbAfterimmunization,themousespleencontainsBcellsproducingspecificantibodies.EachBcellproducesonlyonekindofantibody,whichbindstoitsspecificantigen.ConventionalantiserumisthemixtureofallantibodiesproducedbyBcellsfromspleen.IfasingleBcellwaspickedupandcultured,thenitwillproduceonlyonekindofantibody.ButBcellcannotsurvivewellintheculture.Eachhybridomalinecanproducepuresingleantibody,calledmonoclonalantibody.IfBcellisfusedwithmyeloma,thefusedcellmightbeculturedandproduceantibody.AdaptedfromMilstein(1980)ScientificAmerican,Oct.p.581234mmmm12341234MonoclonalantibodiesCellfusionSpleencells+MyelomaxAntiseumAntigenImmunizationAmixtureofallAb1234BALB/c12341234BcellPuresingleAbAfterimmunization,themousespleencontainsBcellsproducingspecificantibodies.EachBcellproducesonlyonekindofantibody,whichbindstoitsspecificantigen.ConventionalantiserumisthemixtureofallantibodiesproducedbyBcellsfromspleen.IfasingleBcellwaspickedupandcultured,thenitwillproduceonlyonekindofantibody.ButBcellcannotsurvivewellintheculture.Eachhybridomalinecanproducepuresingleantibody,calledmonoclonalantibody.IfBcellisfusedwithmyeloma,thefusedcellmightbeculturedandproduceantibody.AdaptedfromMilstein(1980)ScientificAmerican,Oct.p.581234mmmm12341234MonoclonalantibodiesCellfusionSpleencells+MyelomaxAntiseumAntigenImmunizationAmixtureofallAb1234BALB/c12341234Bcell多克隆抗體和單克隆抗體PuresingleAbAfter34用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢測(cè)與某些疾病相關(guān)的抗原，輔助臨床診斷，或用放射性核素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行腫瘤顯像，進(jìn)行免疫鑒定。用于臨床治療，如針對(duì)T淋巴細(xì)胞共有的分化抗原CD3的單克隆抗體，用作免疫抑制劑。單克隆抗體還可作為載體制備導(dǎo)向藥物。但是要解決以下兩個(gè)問(wèn)題：（1）鼠源性單克隆抗體的免疫原性；（2）完整的抗體分子分子量過(guò)大，難以穿透實(shí)體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。單克隆抗體的應(yīng)用35用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢測(cè)與某些疾病相關(guān)的抗35基因工程技術(shù)為解決這兩個(gè)問(wèn)題提供了可能。1984年：人-鼠嵌合抗體1984年至今：?jiǎn)慰寺】贵w的鼠源性及分子過(guò)大的問(wèn)題得以解決，可僅作為與抗原特異性結(jié)合試劑。已通過(guò)基因工程技術(shù)，制備出改形抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識(shí)別單位等很多類型的抗體或抗體單位?；鞠藛慰寺】贵w的鼠源性，相對(duì)分子質(zhì)量只有完整抗體分子的1/80~1/3，而且消除了鼠源性單克隆抗體的生物學(xué)活性如激活補(bǔ)體、促進(jìn)吞噬功能（免疫調(diào)理）、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等，只保留同抗原特異性結(jié)合的活性。36基因工程技術(shù)為解決這兩個(gè)問(wèn)題提供了可能。3636第二節(jié)單克隆抗體

McAb是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合，通過(guò)有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的。由于這種抗體是針對(duì)一個(gè)抗原決定族的抗體，又是單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，故稱為單克隆抗體。第二節(jié)單克隆抗體McAb是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有37注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)（注射到小鼠腹腔）體內(nèi)培養(yǎng)單克隆抗體注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培38傳統(tǒng)抗血清抗原免疫所有抗體混合123412341234脾臟淋巴結(jié)B細(xì)胞多克隆抗體制備過(guò)程傳統(tǒng)抗血清抗原免疫所有抗體混合123412341234脾391234mmmm12341234單抗細(xì)胞融合取出脾細(xì)胞+癌細(xì)胞各抗體分開單克隆抗體制備過(guò)程1234mmmm12341234單抗細(xì)胞融合取出脾細(xì)胞+各抗401、抗原與動(dòng)物免疫抗原：顆粒性抗原和可溶性抗原免疫動(dòng)物：BALB/c小鼠或Lou大鼠免疫方法：體內(nèi)免疫和體外免疫2、細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)基本方法：取適量脾細(xì)胞（1*108）與骨髓瘤細(xì)胞（2*107~3*107）進(jìn)行混合，在PEG作用下誘導(dǎo)它們?nèi)诤?，時(shí)間控制在2min以內(nèi)，然后用培養(yǎng)液將PEG融合液緩慢稀釋1、抗原與動(dòng)物免疫抗原：顆粒性抗原和可溶性抗原2、細(xì)胞融合41用于細(xì)胞融和的骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)具備融和率高，自身不分泌抗體，所產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的能力強(qiáng)且長(zhǎng)期穩(wěn)定等特點(diǎn)。

PEG的相對(duì)分子質(zhì)量和濃度越大，其促融和率越高。但其黏度和對(duì)細(xì)胞的毒性也隨之增大。常用濃度為40%~50%，相對(duì)分子質(zhì)量4000為佳。相對(duì)分子質(zhì)量在400~6000，濃度在10%~60%范圍內(nèi)的PEG都能使細(xì)胞發(fā)生融合。為了提高融合率，在PEG溶液中加入DMSO，以提高細(xì)胞接觸的緊密性，增加融合率。但必須嚴(yán)格限制接觸時(shí)間。用于細(xì)胞融和的骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)具備融和率高，自身不42（1）細(xì)胞融合液中的細(xì)胞類型：4或5種。（2）如何去除脾-瘤以外的融和細(xì)胞？HAT培養(yǎng)基：H（Hypoxanthine）:次黃嘌呤A（Aminopterin）：氨基喋呤；葉酸拮抗物，阻斷DNA合成主要途徑T(Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前體”，供細(xì)胞通過(guò)替代途徑合成DNA（1）細(xì)胞融合液中的細(xì)胞類型：4或5種。HAT培養(yǎng)基：43HAT選擇作用：淋巴細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，5~7天死亡；DNA合成的主要途徑被A阻斷骨髓瘤細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，5~7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的替代途徑受阻雜交瘤細(xì)胞：長(zhǎng)期生長(zhǎng)繁殖；利用淋巴細(xì)胞的HGPRT，將H合成為嘌呤堿并最終與T一起合成DNAHAT選擇作用：443、篩選陽(yáng)性克隆與克隆化常用的克隆化方法：有限稀釋法和軟瓊脂法。有限稀釋法：把雜交瘤細(xì)胞懸液稀釋后，加入到96孔板，使每孔中在理論上只含有一個(gè)細(xì)胞。第一次克隆化時(shí)也要應(yīng)用HT培養(yǎng)液，以后的克隆化可用不含HT的RPMI1640培養(yǎng)液。軟瓊脂法：在培養(yǎng)液中加入0.5%的瓊脂糖凝膠，細(xì)胞分裂后形成小球樣團(tuán)塊，由于培養(yǎng)基是半固體狀態(tài)，可用吸管吸出，移入96孔板培養(yǎng)。3、篩選陽(yáng)性克隆與克隆化常用的克隆化方法：有限稀釋法和軟瓊45培養(yǎng)板培養(yǎng)板46（1）免疫酶技術(shù)原理：將抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)。酶與抗體或抗原結(jié)合后，既不改變抗體或抗原的免疫學(xué)反應(yīng)的特異性，也不影響酶本身的酶學(xué)活性，在相應(yīng)而合適的作用底物參與下，使基質(zhì)水解而呈色，或使供氫體由無(wú)色的還原型變?yōu)橛猩难趸?，從而表明某種抗原或抗體的存在。

（1）免疫酶技術(shù)47細(xì)胞-干擾素醫(yī)學(xué)課件-48（2）免疫熒光技術(shù)原理：將抗原抗體反應(yīng)的特異性和敏感性與顯微示蹤的精確性相結(jié)合。以熒光素作為標(biāo)記物，與已知的抗體（或抗原）結(jié)合，然后將熒光素標(biāo)記的抗體或抗原作為標(biāo)準(zhǔn)試劑，用于檢測(cè)和鑒定抗原或抗體。

免疫熒光技術(shù)用于細(xì)胞抗原的抗體檢測(cè),特別是檢測(cè)患者活檢組織標(biāo)本。（2）免疫熒光技術(shù)原理：49細(xì)胞-干擾素醫(yī)學(xué)課件-50（3）放射免疫技術(shù)原理：將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，以放射性同位素作為示蹤物的標(biāo)記免疫測(cè)定方法。放射免疫測(cè)定原理示意圖（3）放射免疫技術(shù)原理：將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)514、單抗檢測(cè)RIA（放射免疫測(cè)定）ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）FACS（流式細(xì)胞儀）IFA（間接免疫熒光法）4、單抗檢測(cè)RIA（放射免疫測(cè)定）52酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理：先將抗體或抗原包被到某種固相載體表面，再將待檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離的未結(jié)合成分，最后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度(A)值的大小進(jìn)行定性或定量分析的方法。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理：先將抗體或抗原包被到某種固53ELISAELISA54配制方案：雜交瘤細(xì)胞（（1～5）x106/ml)+細(xì)胞凍存液(30%～40%牛血清，50%～60%RPMI-1640培養(yǎng)液，10%DMSO)“慢凍”：分步冷凍，30℃→-70℃→液氮

“快融”：取出立即浸入37℃～40℃水浴中，使其迅速融化、復(fù)蘇5、雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇細(xì)胞冷凍的意義：防止污染避免染色體丟失防止非分泌細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng)防止細(xì)胞密度過(guò)高而死亡配制方案：雜交瘤細(xì)胞（（1～5）x106/ml)+細(xì)胞凍55經(jīng)過(guò)反復(fù)克隆化獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株應(yīng)立即擴(kuò)大培養(yǎng)（除及時(shí)凍存的細(xì)胞外）。因多次傳代易引起染色體逐漸丟失而使細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力逐漸減弱甚至消失，還應(yīng)盡早使用獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株制備單克隆抗體。6、單克隆抗體的大量制備經(jīng)過(guò)反復(fù)克隆化獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株應(yīng)立即擴(kuò)大56可獲得10μg/ml的抗體。多采用RPMI1640培養(yǎng)液，添加10%~20%胎?；蛐∨Ｑ?。但由于培養(yǎng)液中含有血清成分，總蛋白量可達(dá)100μg/ml以上，給純化帶來(lái)困難。加入小牛血清又是發(fā)生支原體污染的原因，而且批間質(zhì)量差異太大，直接影響雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。改良的方法有：無(wú)血清培養(yǎng)法、懸浮培養(yǎng)法、微載體懸浮培養(yǎng)法。無(wú)血清培養(yǎng)法：利用白蛋白、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、乙醇胺等混合物代替小牛血清。此法雖可減少污染，但產(chǎn)量不高。懸浮培養(yǎng)法：連續(xù)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞密度可2*107/ml,收集的單克隆抗體可達(dá)400μg/ml。如在培養(yǎng)液中加入微載體，細(xì)胞密度可達(dá)108。（1）體外培養(yǎng)法：可獲得10μg/ml的抗體。多采用RPMI1640培養(yǎng)液，57基本程序：接種前1~2周，小鼠腹腔注射0.5mlPristane（降植烷）或用液體石蠟，然后注射1*106雜交瘤細(xì)胞，7~12d便有腹水生成，待生成腹水后再提取，離心去細(xì)胞沉淀，取上清液凍存。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，比較經(jīng)濟(jì)，所得單克隆抗體量多且效價(jià)高，還可有效地保存雜交瘤細(xì)胞株和分離已污染雜菌的雜交瘤細(xì)胞株。缺點(diǎn)：小鼠腹水中混有來(lái)自小鼠的多種雜蛋白，給純化帶來(lái)難度。（2）動(dòng)物體內(nèi)誘生法可獲得10μm/ml的抗體。常用方法。基本程序：接種前1~2周，小鼠腹腔注射0.5mlPrist58腹腔注射法腹腔注射法597、單克隆抗體的純化根據(jù)Ig的類和亞類以及用途選擇不同的純化方法：體外診斷試劑IgG類-----沉淀處理+親和層析

IgM類------沉淀處理+凝膠過(guò)濾體內(nèi)診斷試劑或治療用藥-----親和層析+陰離子交換層析，注意除去毒素、病毒、核酸等微量的污染物。7、單克隆抗體的純化根據(jù)Ig的類和亞類以及用途選擇不同的純化60鹽析沉淀親和層析離子交換層析

McAb的純化鹽析沉淀McAb的純化618、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定Ig類型、亞類測(cè)定：雙擴(kuò)法或ELISA法特異性測(cè)定：抗原類似物的交叉反應(yīng)效價(jià)測(cè)定：用腹水或培養(yǎng)液的稀釋度表示

表位測(cè)定：幾株單抗是否為不同表位特異的,用競(jìng)

爭(zhēng)抑制法，相加指數(shù)法及微機(jī)集群分析親和性測(cè)定：測(cè)定親和常數(shù)K雜交瘤細(xì)胞染色體：秋水仙素裂解法，小鼠B細(xì)胞染色體40條，SP2/0細(xì)胞68條，雜交瘤細(xì)胞一般100多條McAb靶抗原分子量：常用westernblot8、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定Ig類型、亞類測(cè)定：雙擴(kuò)法或ELI62單克隆抗體的特性高度特異性高度的均一性和可重復(fù)性弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)對(duì)環(huán)境敏感性單克隆抗體的特性高度特異性63A、McAb均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體（HAMA），加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)的半衰期只有5~6h，維持有效藥物作用靶組織時(shí)間；B、完整的抗體分子的相對(duì)分子質(zhì)量過(guò)大，難以穿透實(shí)體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。McAb在免疫導(dǎo)向療法中存在的問(wèn)題（障礙）：A、McAb均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體（H64A、降低McAb的免疫源性；B、降低McAb的相對(duì)分子質(zhì)量需要解決的問(wèn)題：解決問(wèn)題的方法或途徑—基因工程技術(shù)

1984年報(bào)道了人—鼠嵌合抗體，之后制備出了改型抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識(shí)別單位等多種類型，基本上消除了抗體的鼠源性（免疫源性），相對(duì)分子質(zhì)量只有完整抗體分子的1/80~1/3。A、降低McAb的免疫源性；需要解決的問(wèn)題：解決問(wèn)題的方法或65優(yōu)點(diǎn)：在體外“永久”地存活并傳代用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性局限性：固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體制備技術(shù)復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)工、價(jià)格較高優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w的優(yōu)點(diǎn)與局限性局限性：66中國(guó)人源基因工程抗體研究獲重大成果

中國(guó)預(yù)防醫(yī)科院病毒所青年科學(xué)家梁米芳研究員率領(lǐng)的課題組，在“治療用人源基因工程抗體基礎(chǔ)與應(yīng)用研究”中取得多項(xiàng)重要成果。在世界上首先研制成功抗坦病毒、抗甲肝病毒、抗狂犬病毒人源基因工程抗體，并獲得擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的全抗體表達(dá)載體系統(tǒng)。與血源制品比較，此抗體具有抗體含量高、無(wú)免疫源性、無(wú)污染源、可連續(xù)規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)，是一類新興的特異性抗病毒感染的生物工程藥物。此成果為我國(guó)防治病毒性疾病探索出一條新的途經(jīng)，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。

-2004中國(guó)人源基因工程抗體研究獲重大成果中國(guó)預(yù)防醫(yī)科院67原液保存

細(xì)菌疫苗工藝流程示意圖菌種篩選種子批的建立及檢定菌種接種原液合并半成品配置殺菌原液收獲擴(kuò)大培養(yǎng)分裝包裝檢定中國(guó)疫苗研究：原液保存細(xì)菌疫苗工藝流程示意圖菌種篩選種子批的菌種接種68病毒原液保存

病毒疫苗工藝流程毒種篩選種子批的建立及檢定毒種接種#培養(yǎng)細(xì)胞原液合并半成品配置病毒滅活病毒的收獲過(guò)濾擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)分裝包裝檢定原代細(xì)胞的制備或傳代細(xì)胞復(fù)蘇減毒活疫苗病毒原病毒疫苗工藝流程毒種篩選種子批的毒種接種#原液合并69第三節(jié)基因工程抗體基因工程抗體(Geneticengineeringantibody)

指用基因工程方法，對(duì)抗體的基因進(jìn)行重組、缺失、修飾改型等，構(gòu)建載體，在受體細(xì)胞中表達(dá)，獲得抗體。第三節(jié)基因工程抗體基因工程抗體(Geneticengin70將小鼠Ig基因敲除，轉(zhuǎn)染人Ig基因，在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生人Ab，再經(jīng)雜交瘤技術(shù)，產(chǎn)生大量完全人源化抗體一、人源化抗體將小鼠Ig基因敲除，轉(zhuǎn)染人Ig基因，在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生人71鼠源性單克隆抗體的改造目的和原理目的：一是降低免疫源性；

二是降低相對(duì)分子量，增加組織通透性原理：抗體同抗原結(jié)合的功能決定于抗體分子的可變區(qū)（V），同種性免疫源性則決定于抗體分子的穩(wěn)定區(qū)（C）。在基因水平上把鼠源性單克隆抗體的H和L鏈的V區(qū)基因分離出來(lái)，分別與人Ig的H鏈和L鏈的C區(qū)基因連接，即成為人—鼠嵌合抗體的H和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)出完整的嵌合抗體.鼠源性單克隆抗體的改造目的和原理目的：一是降低免疫源性；

72人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體。方法：將鼠源單抗的可變區(qū)基因克隆出來(lái)，連到包含有人抗體恒定區(qū)基因及表達(dá)所需的其它元件(如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記等)的表達(dá)載體上，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞、CHO細(xì)胞)中表達(dá)。

特點(diǎn)：減少了鼠源性抗體的免疫原性保留了親本抗體特異性結(jié)合抗原的能力（一）嵌合抗體人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合73細(xì)胞-干擾素醫(yī)學(xué)課件-74盡管嵌合抗體的免疫原性已降低很多，但有時(shí)它仍可能引發(fā)較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。為了進(jìn)一步降低抗體的鼠源成分，發(fā)展出CDR移植技術(shù)。

CDR移植即把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體稱CDR移植抗體或改型抗體，也就是人源化抗體。（二）改型抗體盡管嵌合抗體的免疫原性已降低很多，但有時(shí)它仍可能引發(fā)較75經(jīng)過(guò)CDR移植，抗體的免疫原性極低，而其抗原結(jié)合能力保持不變結(jié)合半抗原及全抗原(如細(xì)胞表面受體、病毒等)的改形抗體都已有報(bào)道，到現(xiàn)在已有數(shù)百種人源化抗體。（美國(guó)正式上市的11種治療性單抗中多數(shù)是改型抗體）經(jīng)過(guò)CDR移植，抗體的免疫原性極低，而其抗原結(jié)合能力76人源化抗體的構(gòu)建可用全合成法或定點(diǎn)突變法。全合成法是以人抗體序列為骨架，以鼠抗體的CDR置換人抗體的CDR，將整個(gè)可變區(qū)序列的兩條鏈分解成若干片段，并使相鄰的片段具有彼此互補(bǔ)的粘性末端。合成所有DNA片段，每組片段分別退火，然后逐組連接成完整的可變區(qū)基因，插入質(zhì)粒中，進(jìn)一步即可用于構(gòu)建和表達(dá)改形抗體。人源化抗體的構(gòu)建可用全合成法或定點(diǎn)突變法。77定點(diǎn)突變法是將人的可變區(qū)基因克隆，根據(jù)鼠抗體的CDR序列合成幾種突變引物，用定點(diǎn)突變的方法將人的可變區(qū)基因的CDR序列變?yōu)槭罂贵w的CDR序列，然后表達(dá)出改型抗體。研究表明，在構(gòu)建改形抗體時(shí)，簡(jiǎn)單地進(jìn)行CDR替換并不能保證抗體具有好的親和力，因此在構(gòu)建時(shí)還必需包括對(duì)影響抗原結(jié)合位點(diǎn)的空間結(jié)構(gòu)的框架序列進(jìn)行操作。定點(diǎn)突變法是將人的可變區(qū)基因克隆，根據(jù)鼠抗體的CDR78Fab：抗原結(jié)合片斷Fv：可變區(qū)片段ScFv：?jiǎn)捂溈勺儏^(qū)片段單域抗體最小識(shí)別單位二、小分子抗體分子量較小但具有抗原結(jié)合功能的分子片段。基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源性單克隆抗體的V區(qū)片段，其相對(duì)分子質(zhì)量?jī)H為原抗體1/80~1/3。Fab：抗原結(jié)合片斷二、小分子抗體分子量較小但具有抗原結(jié)合79FvScFv單區(qū)抗體最小識(shí)別單位FabFvScFv單區(qū)抗體最小識(shí)別單位Fab80由完整的輕鏈和Fd組成，大小為完整分子的1/3。把Fab與細(xì)菌的前導(dǎo)肽相連，在前導(dǎo)肽的作用下Fab進(jìn)入質(zhì)周腔，裝配折疊后，它具有結(jié)合抗原的活性。(1)Fab由完整的輕鏈和Fd組成，大小為完整分子的1/3。(181

Fv、ScFv的大小約為全分子的1/6。(2)Fv或ScFv

FvScFv連接肽Fv、ScFv的大小約為全分子的1/6。(282Fv由VH與VL構(gòu)成，由于其結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合，故Fv不穩(wěn)定。在VH與VL之間加上一段連接肽，把VH與VL連成一條單鏈，得到ScFv，即單鏈抗體。連接肽的長(zhǎng)度在10-15個(gè)氨基酸左右，不宜太長(zhǎng)或太短，它應(yīng)具有柔軟性，側(cè)鏈少，抗原性弱等特點(diǎn)。常用的連接肽是(GGGGS)3。單鏈抗體的構(gòu)建在已知親本DNA序列時(shí)可用完全人工合成法單鏈抗體最常用的表達(dá)體系是大腸桿菌Fv由VH與VL構(gòu)成，由于其結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合，故Fv不穩(wěn)定。83即為VH，約為完整分子的1/12。它只由一個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，故稱單域抗體。單域抗體盡管親和力有所降低，但仍保持著原單抗的特異性。

(3)單域抗體VH即為VH，約為完整分子的1/12。它只由一個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，84約為完整分子的1/80-1/70大小，一般由一個(gè)CDR構(gòu)成，它也保持著抗體的特異性。(4)最小識(shí)別單位CDR約為完整分子的1/80-1/70大小，一般由一個(gè)CDR構(gòu)85可以用細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低;分子小，穿透力強(qiáng);不含F(xiàn)c，沒(méi)有Fc帶來(lái)的效應(yīng);在體內(nèi)循環(huán)的半衰期短，易清除，利于解毒排出;易于與毒素或酶基因連接，便于直接獲得免疫毒素或酶標(biāo)抗體等。小分子抗體的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用應(yīng)用：用于腫瘤的導(dǎo)向治療腫瘤的影像分布基因治療優(yōu)點(diǎn)：可以用細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低;小分子抗體的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)86三、雙特異性抗體和多價(jià)抗體

雙鏈抗體（Diabody）一詞最早由Hollinger等于1993年創(chuàng)造。乃是一種小分子的雙價(jià)雙特異性抗體片段。三、雙特異性抗體和多價(jià)抗體雙鏈抗體（Diabody）一87

雙特異性抗體(bispecificantibody,BSAb)是指能同時(shí)識(shí)別2種抗原的抗體。1種為對(duì)應(yīng)腫瘤相關(guān)抗原。另1種為對(duì)應(yīng)效應(yīng)成分。

即能結(jié)合靶腫瘤細(xì)胞又能結(jié)合高細(xì)胞毒性的效應(yīng)細(xì)胞,將效應(yīng)細(xì)胞富集在腫瘤周圍,而且可以模擬天然配體的作用,與細(xì)胞表面引發(fā)分子結(jié)合,激活效應(yīng)細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷和裂解。雙特異性抗體(bispecificantibody88

Hollinger等巧妙地將Ａ抗原抗體的輕鏈可變區(qū)基因(VLA)與抗Ｂ抗原抗體的重鏈可變區(qū)(VHB)通過(guò)短肽連接子連接;同樣地,將VHA與VLB連接,將兩組嵌合基因置于雙順?lè)醋拥谋磉_(dá)質(zhì)粒中,構(gòu)建成雙鏈抗體的表達(dá)質(zhì)粒,目前報(bào)道的表達(dá)質(zhì)粒均為雙順?lè)醋印１磉_(dá)后,VLAVHB與VHAVLB交叉連結(jié),形成雙特異性抗體。Hollinger等巧妙地將Ａ抗原抗體的輕鏈可變區(qū)基89細(xì)胞-干擾素醫(yī)學(xué)課件-90所以雙特異性抗體與既往腫瘤免疫治療相比,除了能特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞外,還能將循環(huán)血液中的免疫效應(yīng)細(xì)胞再導(dǎo)向至腫瘤細(xì)胞處,從而使效應(yīng)細(xì)胞的抗腫瘤活性增強(qiáng),發(fā)揮免疫導(dǎo)向作用,這是腫瘤治療的新突破。所以雙特異性抗體與既往腫瘤免疫治療相比,除了能特異性91細(xì)胞-干擾素醫(yī)學(xué)課件-92分別分離純化兩種不同的McAb，使各抗體解離為單價(jià)抗體，再使兩種不同抗原特異性的單價(jià)抗體通過(guò)化學(xué)試劑交聯(lián)起來(lái)，然后分離出目的組分。此法缺點(diǎn)是容易導(dǎo)致抗體失去活性，產(chǎn)物均一性不佳?；瘜W(xué)交聯(lián)BsAb分別分離純化兩種不同的McAb，使各抗體解離為單價(jià)抗93將兩種分泌不同特異性單抗的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行再次融合，產(chǎn)生四源雜交瘤(quadroma)。但二次雜交瘤細(xì)胞株分泌的是兩套重鏈，輕鏈的隨機(jī)組合物。BsAb在其中的比例可為10%～50%不等。多倍雜交瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性差，BsAb的產(chǎn)量少且活性低，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，臨床應(yīng)用時(shí)存在人抗鼠抗體免疫反應(yīng)(HAMA)，因此不適用于臨床。細(xì)胞工程BsAb將兩種分泌不同特異性單抗的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行再次融合，產(chǎn)94多采用抗體分子片段,如Fab，F(xiàn)v或ScFv,經(jīng)基因操作修飾后,或體外組裝為BsAb,或直接表達(dá)分泌型的BsAb?；蚬こ藼sAb多采用抗體分子片段,如Fab，F(xiàn)v或ScFv,經(jīng)基因95從廣義講應(yīng)屬于雙功能抗體范疇。（1）配基—配基型融合蛋白，如CD4-Fcγ.（2）配基—Ig型嵌合抗體，如IL-2-Ig（3）配基—FV型嵌合蛋白，如CD4-FVCD3(4)受體—FV型融合蛋白（5）酶—抗體型融合蛋白（abeneyme,抗體酶）四、抗體融合蛋白從廣義講應(yīng)屬于雙功能抗體范疇。（1）配基—配基型融合蛋白，96原核細(xì)胞表達(dá)：真核細(xì)胞表達(dá)：酵母、昆蟲細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵細(xì)胞、真菌等。轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)：煙草葉和擬南芥植物。其產(chǎn)量可達(dá)葉片總蛋白量的1.3%。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá)：?jiǎn)位蛩缴献鲛D(zhuǎn)基因鼠?；蚬こ炭贵w的表達(dá)原核細(xì)胞表達(dá)：基因工程抗體的表達(dá)97第四節(jié)噬菌體抗體工程第四節(jié)噬菌體抗體工程98它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的。其過(guò)程是把用PCR法得到的抗體基因插入絲狀噬菌體的DNA，與噬菌體外殼蛋白的基因相連，在輔助噬菌體的幫助下，噬菌粒包裝成絲狀噬菌體，抗體分子通過(guò)與PⅢ或PⅧ相連，在噬菌體表面的一端或分散分布，然后可直接對(duì)噬菌體表面的抗體分子進(jìn)行篩選。噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上99

1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面展示系統(tǒng)，通過(guò)將抗溶菌酶單鏈抗體基因克隆于fd噬菌體基因3的下游，使ScFv以融合蛋白的形式展示于噬菌體表面，利用親和層析，兩輪富集達(dá)106倍。該技術(shù)的成功給抗體基因的篩選工作帶來(lái)了革命性的變革。噬菌體表面展示系統(tǒng)(phagesurfacedisplaysystem)1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面100用PCR擴(kuò)增人抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因克隆到噬菌體載體并以融合蛋白的形式表達(dá)在其外殼表面用抗原抗體反應(yīng)篩選出表達(dá)所需要抗體的克隆并擴(kuò)增。使抗體基因以分泌的方式表達(dá)，獲得可溶性的抗體片段。抗體庫(kù)：組合抗體文庫(kù)：在建庫(kù)過(guò)程中如果將VH和VL隨機(jī)組合人天然抗體庫(kù)：抗體mRNA來(lái)源于未經(jīng)免疫的正常人（一）基本原理和程序用PCR擴(kuò)增人抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因101噬菌體抗體庫(kù)噬菌體抗體庫(kù)102（二）噬菌體表面展示文庫(kù)技術(shù)的要點(diǎn)外源基因表達(dá)多肽以融合蛋白形式展示在外殼蛋白N端將基因組合文庫(kù)插入噬菌體編碼膜蛋白的基因g3或g8的先導(dǎo)系列的緊靠下游隨機(jī)克隆入相應(yīng)載體形成組合文庫(kù)從免疫或未被免疫的B細(xì)胞中PCR擴(kuò)增抗體全套基因片段（二）噬菌體表面展示文庫(kù)技術(shù)的要點(diǎn)外源基因表達(dá)多肽以融合蛋白103用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個(gè)循環(huán)直接、方便、簡(jiǎn)捷、高效地篩選出表達(dá)特異性好、親和力強(qiáng)的抗體噬菌體庫(kù)。使翻譯出的抗體分泌到細(xì)菌的質(zhì)周腔內(nèi)，形成游離的抗體片段，經(jīng)過(guò)純化即可獲得目的抗體。篩選到的噬菌體再將基因g3或g8切除后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個(gè)循環(huán)直接、方便、簡(jiǎn)104（三）噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn)1、模擬天然全套抗體庫(kù)抗體文庫(kù)可以達(dá)到或超過(guò)1011庫(kù)容，所以能包含B細(xì)胞全部克隆。建庫(kù)的外源基因來(lái)自人體外周血、骨髓或脾臟的淋巴細(xì)胞提取的mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA擴(kuò)增，這是人體多克隆細(xì)胞的總mRNA。使用的通用引物采自多個(gè)人體，具有人的種屬普遍性?？贵w的VH和VL基因的隨機(jī)重組也增加了抗體的多樣性。（三）噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn)1、模擬天然全套抗體庫(kù)1052、避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)由于抗體庫(kù)的大容量和極高的篩選效率，使得可以調(diào)出任意抗體基因，用基因工程方法制備抗體，因而能避免使用人工免疫動(dòng)物和細(xì)胞融合技術(shù)。3、可獲得高親和力的人源化抗體在噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)中，VH和VL基因的隨機(jī)重組模擬了體內(nèi)抗體親和力成熟的過(guò)程，所用的抗體基因又來(lái)自人體，因此，所產(chǎn)生的抗體必然都是高親和力的人源化抗體。2、避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)3、可獲得高親和力的人源化抗體106將抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系起來(lái);可繞過(guò)雜交瘤技術(shù)，不需要復(fù)雜的基因工程技術(shù);抗體基因篩選的范圍廣;技術(shù)穩(wěn)定、可靠、生產(chǎn)周期短;可規(guī)模化生產(chǎn);適用范圍廣，既可用于抗體制備，也適用于其它蛋白如激素、酶、藥物、隨機(jī)多肽等的生產(chǎn)。該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):將抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系起來(lái);該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):107噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡(jiǎn)單易行，篩選容量大，效率高，繞過(guò)了細(xì)胞融合及免疫等步驟，而且在表型一基因型的統(tǒng)一和識(shí)別一增殖過(guò)程上模擬了B細(xì)胞的成熟過(guò)程，從而在實(shí)際應(yīng)用上具有很大意義。噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡(jiǎn)單易行，篩108第五節(jié)抗體診斷試劑和抗體藥物抗原抗體特異性結(jié)合，在體內(nèi)和體外均可呈現(xiàn)某種反應(yīng)。在體內(nèi)，可表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素等作用，故抗體類藥物可用于治療。在體外，由于抗原性狀和反應(yīng)條件不同，可發(fā)生凝集或沉淀等可見反應(yīng)，故可用已知抗體來(lái)鑒定抗原，做病原學(xué)診斷和血型測(cè)定，稱為血清學(xué)鑒定?？贵w診斷藥物基本分為三類：血清學(xué)鑒定用的和免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體制劑，以及體內(nèi)導(dǎo)向診斷藥物。一、抗體診斷試劑第五節(jié)抗體診斷試劑和抗體藥物抗原抗體特異性結(jié)1091、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑（1）鑒定病原菌用的抗體試劑直接凝集反應(yīng)（2）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的反向被動(dòng)血凝診斷試劑（3）妊娠診斷試劑婦女妊娠后，血液和尿液中的HCG含量增高，在3個(gè)月內(nèi)可達(dá)到高峰。此時(shí)檢測(cè)尿液中的HCG，就可確定是否懷孕。（4）抗ABO血型系統(tǒng)血清1、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑（1）鑒定病原菌用的抗體試劑直接1102、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑給抗體標(biāo)記放射性核素、熒光素或酶活性，能將抗原抗體反應(yīng)放大，使常規(guī)不能觀察的反應(yīng)得以顯現(xiàn)，可對(duì)微量抗原進(jìn)行定性定量測(cè)定，靈敏度提高。結(jié)合顯微鏡技術(shù)，還可對(duì)抗原物質(zhì)作出組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)的定位測(cè)定。除臨床診斷外，還能為探討發(fā)病機(jī)制提供手段。2、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑給抗體標(biāo)記放射性核素111（1）熒光抗體診斷試劑熒光抗體是用熒光色素,如異硫氰酸熒光素（FITC）、羅丹明（RB200）、藻紅素（PE）等標(biāo)記抗體蛋白，即成熒光抗體。用熒光抗體浸染含有抗原物質(zhì)的組織切片或細(xì)胞，熒光抗體就與抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下成為發(fā)光的可視物，從而達(dá)到診斷和定位的目的。（1）熒光抗體診斷試劑熒光抗體是用熒光色素,如異硫氰酸熒光112酶標(biāo)診斷試劑a、HBsAg(乙型肝炎表面抗原)酶標(biāo)診斷試劑b、HBeAg(乙型肝炎e抗原)酶標(biāo)診斷試劑c、HAVAg(甲型肝炎病毒抗原)酶標(biāo)診斷試劑d、測(cè)定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)診斷試劑e、AFP（甲胎蛋白）酶標(biāo)診斷試劑f、CEA（癌胚抗原）酶標(biāo)診斷試劑（2）免疫酶抗體診斷試劑：酶標(biāo)診斷試劑（2）免疫酶抗體診斷試劑：113把放射性核素分析的高靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性兩大特點(diǎn)結(jié)合起來(lái)建立的檢測(cè)技術(shù)。能測(cè)出ng/ml，甚至pg/ml水平的微量抗原物質(zhì)。（3）放射免疫用抗體診斷試劑常用的標(biāo)記抗體試劑：a、HBsAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑：125I標(biāo)記，靈敏度0.1ng/mlb、HBeAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑：125I標(biāo)記，靈敏度0.1ng/mlc、HAV抗原放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑：125I標(biāo)記d、AFP放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑：125I標(biāo)記，靈敏度1~5ng/mle、CEA放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑：125I標(biāo)記，靈敏度1ng/ml把放射性核素分析的高靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性兩1143、導(dǎo)向診斷藥物由于腫瘤的特異性小分子抗體尚在研究之中，所以導(dǎo)向藥物還未臨床廣泛應(yīng)用。3、導(dǎo)向診斷藥物115二、抗體治療藥物以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物的研究已有20多年的歷史，已制備出百余種單克隆抗體，鑒定出數(shù)十種與腫瘤相關(guān)的抗原，受試病人超過(guò)數(shù)千例。但治療用的制劑尚沒(méi)有一種達(dá)到商品化的程度。在治療藥物中，單克隆抗體與毒素的偶聯(lián)物治療淋巴瘤效果最佳，但有效率僅30%二、抗體治療藥物以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物的研116目前的客觀現(xiàn)實(shí)是：研究進(jìn)展迅速，但未達(dá)到常規(guī)治療的應(yīng)用階段。障礙（原因）：抗體相對(duì)分子質(zhì)量大，穿透力低，不能達(dá)到靶部位或攝取量低。鼠源性抗體的排斥反應(yīng)。常用的抗癌藥物：

氨甲喋呤（methotrexate,MTX）、

阿霉素(adriamycin,ADM)絲裂霉素(mitomycin,MMC）、

環(huán)磷酰胺 (cyclophosphamide,CTX)、

新抑癌蛋白(neocarzinostatin,NCS)、

正定霉素(doxorubicin,DOX)等。目前的客觀現(xiàn)實(shí)是：研究進(jìn)展迅速，但未達(dá)到常規(guī)治療的應(yīng)用階段。117治療乳腺癌曲妥珠單抗藥物治療乳腺癌曲妥珠單抗藥物118我國(guó)第一個(gè)基因重組人源化單克隆抗體藥物－泰欣生（尼妥珠單抗）我國(guó)第一個(gè)基因重組人源化單克隆抗體藥物－泰欣生（尼妥珠單抗）119治療直腸、結(jié)腸癌的貝伐單抗瑞士羅氏生產(chǎn)的安維汀治療直腸、結(jié)腸癌的貝伐單抗瑞士羅氏生產(chǎn)的安維汀120抗體藥物－研制新藥的先鋒化學(xué)合成藥物天然來(lái)源藥物放射性核素基因組、蛋白組研究抗原、藥物靶點(diǎn)細(xì)胞因子、活性蛋白抗體及其片段抗體免疫偶聯(lián)物抗體融合蛋白抗體藥物－研制新藥的先鋒化學(xué)合成藥物天然來(lái)源藥物放射性核素基121小結(jié)

雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的原理是利用聚乙二醇作為細(xì)胞融合劑，使免疫的小鼠脾細(xì)

胞與具有在體外不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細(xì)胞融為一

體，在HAT選擇性培養(yǎng)基的作用下，只讓融合成功的雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，經(jīng)過(guò)反復(fù)的免疫學(xué)檢測(cè)篩選和單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)（克隆化）,最終獲得既能產(chǎn)生所需單克隆抗體,又能不斷繁殖的雜交瘤

細(xì)胞系，將這種細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，在其產(chǎn)生的腹水中即可得到高效價(jià)的單克隆抗體。小結(jié)雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的原理是利用聚乙二醇122

20世紀(jì)80年代誕生了應(yīng)用DNA重組及蛋白工程技術(shù)對(duì)編碼抗體基因按不同需要進(jìn)行改造和裝配，經(jīng)導(dǎo)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞后重新表達(dá)的抗體，稱為基因工程抗體，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：①通過(guò)基因工程技術(shù)的改造，可以降低甚至消除人體對(duì)抗體的排斥反應(yīng)；②基因工程抗體的分子量較小，可以部分降低抗體的鼠源性，更有利于穿透血管壁，進(jìn)入病灶的核心部位；③根據(jù)治療的需要，制備新型抗體；④可以采用原核細(xì)胞、真核細(xì)胞和植物等多種表達(dá)形式，大量表達(dá)抗體分子，大大降低了生產(chǎn)成本。20世紀(jì)80年代誕生了應(yīng)用DNA重組及蛋白工程123

干擾素藥學(xué)院張倩倩124interferon(IFN)

干擾素藥學(xué)院1interferon(IFN)124病毒感染后的機(jī)體反應(yīng)干擾素及白介素自然殺傷細(xì)胞T細(xì)胞免疫非特異性免疫特異性免疫病毒感染后的機(jī)體反應(yīng)干擾素及白介素自然殺傷細(xì)胞T細(xì)胞免疫非特125

一干擾素的概念二干擾素的種類三干擾素的作用四干擾素抗病毒機(jī)理五生物學(xué)活性一干擾素的概念二干擾素的種類三126

一干擾素的概念概念：

干擾素（IFN）是一種細(xì)胞因子，它是機(jī)體感染病毒時(shí)，宿主細(xì)胞通過(guò)抗病毒反應(yīng)，而產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類似，功能相近的低分子糖蛋白。一干擾素的概念概念：127

二干擾素的種類二干擾素的種類128

三干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素

（1）抗病毒和抗腫瘤1）誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，干擾病毒復(fù)制；2）增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞殺傷；3）促進(jìn)MHC-Ⅰ類分子表達(dá)，增強(qiáng)CTL對(duì)病毒感染細(xì)胞和腫瘤等靶細(xì)胞的殺傷。

（2）免疫調(diào)節(jié)（較弱）：與Ⅱ型干擾素類似。三干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素129

三干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素（1）主要起免疫調(diào)節(jié)作用1）活化巨噬細(xì)胞；2）促進(jìn)APC(s)表達(dá)MHC-Ⅱ類分子，提高抗原遞呈能力；3）促進(jìn)MHC-Ⅰ類分子表達(dá)和增強(qiáng)CTL細(xì)胞的殺傷活性;4）增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性；5）促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖；（2）抗病毒和抗腫瘤作用(與Ⅰ型干擾素類似，次要)。三干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素130T細(xì)胞巨噬細(xì)胞B細(xì)胞粒細(xì)胞IFNNK細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞T細(xì)胞lNK細(xì)胞激活提高NK細(xì)胞活性抗病毒活性抑制細(xì)胞分裂抑制血細(xì)胞生成促進(jìn)MHCⅠ和MHCⅡ分子表達(dá)多種細(xì)胞干擾素的作用T細(xì)胞巨噬細(xì)胞B細(xì)胞粒細(xì)胞IFNNK細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞T細(xì)胞131

四干擾素抗病毒機(jī)理最初感染的細(xì)胞由于病毒核酸剌激被誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素，它透過(guò)細(xì)胞膜向外擴(kuò)散并進(jìn)入血液循環(huán)進(jìn)入其它細(xì)胞。干擾素不能直接阻止病毒吸附、穿入或釋放，而是作用于宿主細(xì)胞，使其產(chǎn)生抗病毒蛋白質(zhì)，附著于細(xì)胞的核蛋白體上，選擇性地抑制病毒mRNA翻譯為病毒蛋白質(zhì)，從而影響病毒結(jié)構(gòu)蛋白和酶類的合成，使復(fù)制受到阻礙而呈現(xiàn)抗病毒的作用。四干擾素抗病毒機(jī)理最初感染的細(xì)胞由于病毒核酸剌激132

四干擾素抗病毒機(jī)理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具有細(xì)胞種屬特征。即某一種動(dòng)物產(chǎn)生的干擾素只能保護(hù)同種屬或近緣種屬動(dòng)物細(xì)胞。干擾素是一種活性很強(qiáng)的生物制劑，既能治療病毒性疾病，又具有抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的作用。四干擾素抗病毒機(jī)理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具133四干擾素抗病毒機(jī)理四干擾素抗病毒機(jī)理134干擾素抗病毒作用干擾素抗病毒作用135作用機(jī)理 不是直接殺滅病毒IFN→

抗病毒蛋白基因→抗病毒蛋白(蛋白激酶,磷酸二脂酶)

↓ 降解病毒mRNA

抑制病毒蛋白合成抑制病毒組裝、釋放

↓

抑制病毒復(fù)制

中斷病毒感染；限制病毒擴(kuò)散

↓作用機(jī)理 不是直接殺滅病毒IFN→抗病毒蛋白基因→136五生物學(xué)活性:廣譜的抗病毒作用，一種IFN可以抑制多種病毒；抑制病毒感染、阻止病毒在體內(nèi)擴(kuò)散、促進(jìn)痊愈;調(diào)節(jié)免疫功能；抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；五生物學(xué)活性:廣譜的抗病毒作用，一種IFN可以抑制多種137

IFN作用特點(diǎn):產(chǎn)生的時(shí)間早；中斷受染細(xì)胞的病毒感染，限制病毒擴(kuò)散；IFN誘導(dǎo)的抗病毒蛋白，只對(duì)病毒起作用，不影響宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成。

IFN作用特點(diǎn):產(chǎn)生的時(shí)間早；138

謝謝謝謝139

140

141專題二抗體制藥第一節(jié)概述第二節(jié)單克隆抗體第三節(jié)基因工程抗體第四節(jié)噬菌體抗體工程第五節(jié)抗體診斷試劑和抗體藥物142專題二抗體制藥第一節(jié)概述19142第一節(jié)概述

1890年Behring和北里柴三郎發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素,建立了血清療法,開創(chuàng)了抗體制藥。

1937年Tiselius用電泳法將血清蛋白分離為白蛋白、α、β、γ球蛋白，并證明抗體活性主要存在于γ球蛋白組分。143第一節(jié)概述20143抗體工程藥物的概念通過(guò)細(xì)胞工程或基因工程方法制備，用于治療的單克隆抗體、抗體片段、基因工程改造的抗體，以及抗體免疫偶聯(lián)物或抗體融合蛋白,稱為抗體工程藥物。又稱抗體藥物、單克隆抗體治療劑、抗體治療劑?？贵w工程藥物的概念通過(guò)細(xì)胞工程或基因工程方法制備，用于治療的144抗原(antigen,Ag)---是指那些能夠刺激和/或誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答、產(chǎn)生抗體和/或致敏（效應(yīng)）淋巴細(xì)胞，同時(shí)又能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)外特異性結(jié)合，發(fā)生免疫反應(yīng)的物質(zhì)。如：病原微生物、免疫血清、藥物、疫苗對(duì)機(jī)體來(lái)說(shuō)，抗原相當(dāng)于一個(gè)國(guó)家已知的或潛在的、外部的或內(nèi)部的“敵人”?？乖?antigen,Ag)145146免疫原性：指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和/或致敏淋巴細(xì)胞的性能。

反應(yīng)原性：能與相應(yīng)的抗體和/或淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，發(fā)生反應(yīng)的性能。

23免疫原性：指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和/或致146147完全抗原：既具有免疫原性，又具有反應(yīng)原性的抗原。如微生物、異種血清半抗原：又稱不完全抗原。是指其本身只有反應(yīng)原性，但沒(méi)有免疫原性的簡(jiǎn)單小分子的抗原物質(zhì)。如某些藥物（青霉素等）、多糖、類脂。24完全抗原：既具有免疫原性，又具有反應(yīng)原性的抗原。如微生物147148目前，在中草藥中發(fā)現(xiàn)廣泛存在半抗原，如小檗堿、茶堿、丹參酮等，具有生化活性基因的化學(xué)成分都有可能成為半抗原，這些半抗原可與體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合成完全抗原，造成一些過(guò)敏反應(yīng)。25目前，在中草藥中發(fā)現(xiàn)廣泛存在半抗原，如小檗堿、茶堿、148149抗原的特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在反應(yīng)原性上。沙門氏桿菌大腸桿菌抗大腸桿菌的抗體抗沙門氏桿菌的抗體結(jié)合結(jié)合26抗原的特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在反應(yīng)原性上。沙門149抗體是對(duì)其抗原有極強(qiáng)專一性的魔彈或巡弋飛彈研究 以免疫轉(zhuǎn)印法檢測(cè)

特定抗原醫(yī)療 以毒素連結(jié)抗體攻擊

病變細(xì)胞檢驗(yàn) 以ELISA偵測(cè)特定

病原體150抗體是對(duì)其抗原有極強(qiáng)專一性的研究 以免疫轉(zhuǎn)印法檢測(cè)特150免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)抗體：能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有

免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)抗體：能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有151抗體的產(chǎn)生過(guò)程：

機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原物質(zhì)刺激后，B淋巴細(xì)胞被激活，增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白?？贵w的產(chǎn)生過(guò)程：152

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子量范圍從150,000到950,000道爾頓。分五類：IgG在血清中含量最高，達(dá)75~80%,是抗感染的主要抗體;IgM是五類免疫球蛋白中分子量最大的，為五聚體,是對(duì)一個(gè)抗原作出反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的

第一個(gè)抗體；IgA在黏膜表面、乳腺、淚腺形成，主要參與局部的免疫反應(yīng);IgD在血清中含量很低;IgE在血清含量最少。免疫球蛋白IgGIgMIgAIgDIgE免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子153動(dòng)物血清中產(chǎn)生抗體的時(shí)間示意圖抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再刺激后，IgＧ將取代IgM動(dòng)物血清中產(chǎn)生抗體的時(shí)間示意圖抗原刺激的第一至三周，IgM生154抗體研究的發(fā)展階段：①以1890年Behring發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表,用抗原免疫動(dòng)物來(lái)獲得多克隆抗體。②以1975年Milstein&Kohler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體(McAb)為代表。③以1994年Winter,創(chuàng)建了噬菌體抗體庫(kù)(repertoireofantibodiesdisplayedonphages)技術(shù),以基因工程方法制備抗體為代表。在此基礎(chǔ)上發(fā)展成抗體工程?？贵w研究的發(fā)展階段：155多克隆抗體:

一種抗原具有多個(gè)抗原決定簇,每個(gè)抗原決定簇都能刺激一個(gè)B細(xì)胞產(chǎn)生一種抗體。這樣所獲得的免疫血清是多種抗體的混和物。單克隆抗體(MonoclonalantibodyMcAb):

由一個(gè)抗原決定簇刺激的、單一的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合增殖后所產(chǎn)生的、高度均一的抗體。1234多克隆抗體:1234156多克隆抗體和單克隆抗體PuresingleAbAfterimmunization,themousespleencontainsBcellsproducingspecificantibodies.EachBcellproducesonlyonekindofantibody,whichbindstoitsspecificantigen.ConventionalantiserumisthemixtureofallantibodiesproducedbyBcellsfromspleen.IfasingleBcellwaspickedupandcultured,thenitwillproduceonlyonekindofantibody.ButBcellcannotsurvivewellintheculture.Eachhybridomalinecanproducepuresingleantibody,calledmonoclonalantibody.IfBcellisfusedwithmyeloma,thefusedcellmightbeculturedandproduceantibody.AdaptedfromMilstein(1980)ScientificAmerican,Oct.p.581234mmmm12341234MonoclonalantibodiesCellfusionSpleencells+MyelomaxAntiseumAntigenImmunizationAmixtureofallAb1234BALB/c12341234BcellPuresingleAbAfterimmunization,themousespleencontainsBcellsproducingspecificantibodies.EachBcellproducesonlyonekindofantibody,whichbindstoitsspecificantigen.ConventionalantiserumisthemixtureofallantibodiesproducedbyBcellsfromspleen.IfasingleBcellwaspickedupandcultured,thenitwillproduceonlyonekindofantibody.ButBcellcannotsurvivewellintheculture.Eachhybridomalinecanproducepuresingleantibody,calledmonoclonalantibody.IfBcellisfusedwithmyeloma,thefusedcellmightbeculturedandproduceantibody.AdaptedfromMilstein(1980)ScientificAmerican,Oct.p.581234mmmm12341234MonoclonalantibodiesCellfusionSpleencells+MyelomaxAntiseumAntigenImmunizationAmixtureofallAb1234BALB/c12341234Bcell多克隆抗體和單克隆抗體PuresingleAbAfter157用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢測(cè)與某些疾病相關(guān)的抗原，輔助臨床診斷，或用放射性核素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行腫瘤顯像，進(jìn)行免疫鑒定。用于臨床治療，如針對(duì)T淋巴細(xì)胞共有的分化抗原CD3的單克隆抗體，用作免疫抑制劑。單克隆抗體還可作為載體制備導(dǎo)向藥物。但是要解決以下兩個(gè)問(wèn)題：（1）鼠源性單克隆抗體的免疫原性；（2）完整的抗體分子分子量過(guò)大，難以穿透實(shí)體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。單克隆抗體的應(yīng)用158用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢測(cè)與某些疾病相關(guān)的抗158基因工程技術(shù)為解決這兩個(gè)問(wèn)題提供了可能。1984年：人-鼠嵌合抗體1984年至今：?jiǎn)慰寺】贵w的鼠源性及分子過(guò)大的問(wèn)題得以解決，可僅作為與抗原特異性結(jié)合試劑。已通過(guò)基因工程技術(shù)，制備出改形抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識(shí)別單位等很多類型的抗體或抗體單位。基本消除了單克隆抗體的鼠源性，相對(duì)分子質(zhì)量只有完整抗體分子的1/80~1/3，而且消除了鼠源性單克隆抗體的生物學(xué)活性如激活補(bǔ)體、促進(jìn)吞噬功能（免疫調(diào)理）、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等，只保留同抗原特異性結(jié)合的活性。159基因工程技術(shù)為解決這兩個(gè)問(wèn)題提供了可能。36159第二節(jié)單克隆抗體

McAb是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合，通過(guò)有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的。由于這種抗體是針對(duì)一個(gè)抗原決定族的抗體，又是單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，故稱為單克隆抗體。第二節(jié)單克隆抗體M