2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(上課用)

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體預(yù)習(xí)、思考下列問(wèn)題：1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞融合？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合有什么不同呢？2、動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過(guò)程有什么影響？3、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？?jī)烧叩娜诤线^(guò)程是否也一樣？雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)方法？促進(jìn)融合的方法？融合完成的標(biāo)志植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交技術(shù)植物體細(xì)胞雜交結(jié)束的標(biāo)志植物體細(xì)胞雜交的意義：

打破生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種。一、動(dòng)物細(xì)胞融合㈠概念：兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。又稱為細(xì)胞雜交。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，雜交細(xì)胞表現(xiàn)出兩個(gè)親本的特點(diǎn)。細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒㈡誘導(dǎo)方法物理法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒同植物體細(xì)胞雜交技術(shù)思考討論：

為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？

因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會(huì)感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。仙臺(tái)病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒的優(yōu)點(diǎn)？（融合率較高，對(duì)各種細(xì)胞都適宜。）㈢動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞㈢用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程具有兩個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。融合結(jié)束的標(biāo)志？（說(shuō)明了細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）想一想

在動(dòng)物細(xì)胞融合的實(shí)際操作過(guò)程中，是只用單個(gè)的兩種細(xì)胞來(lái)融合嗎？思考討論：

1、動(dòng)物細(xì)胞融合的優(yōu)點(diǎn)？2、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？

細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫及制備單克隆抗體等。

突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。主要用于制備單克隆抗體等獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較二、單克隆抗體讀下面一段文字資料，思考以下問(wèn)題：長(zhǎng)期以來(lái)，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）與抗體的關(guān)系？

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。

所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？抗體1、抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體2、特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏㈠傳統(tǒng)抗體的制備㈡單克隆抗體

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)、靈敏度高利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何篩選？融合方式？設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞種類？

㈢單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體思考：1、本過(guò)程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理。2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？

這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。㈣單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備。㈤應(yīng)用主要有：1、臨床診斷：具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤

資料：目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。小結(jié)兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A．動(dòng)物細(xì)胞融合B．胚胎移植C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D．核移植Ｃ２．在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的B．雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同C．操作過(guò)程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ反饋練習(xí)３.單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C下列各圖表示單克隆抗體制備過(guò)程的各階段圖解，請(qǐng)根據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

(1)請(qǐng)用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆制備過(guò)程的順序連接起來(lái)＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（2）在單克隆抗體制備過(guò)程中之所以選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，是因?yàn)樗鼈內(nèi)诤虾蟮碾s交瘤細(xì)胞具有＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿的特性。（3）由圖中可看出，單克隆抗體制備過(guò)程運(yùn)用了＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿

＿的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段。在體外大量繁殖產(chǎn)生特異性抗體動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為_(kāi)_______過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是________