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血清(xuèqīng)中總膽固醇的測(cè)定實(shí)驗(yàn)(shíyàn)三(膽固醇氧化酶法)第一頁,共9頁。一、實(shí)驗(yàn)(shíyàn)目的學(xué)習(xí)膽固醇氧化酶法測(cè)定血清(xuèqīng)總膽固醇的原理。掌握血清(xuèqīng)總膽固醇的測(cè)定方法及操作技術(shù)。第二頁,共9頁。
(1)(3)H2O2+4-氨基(ānjī)安替吡啉(4-AAP)+苯酚游離膽固醇+FAA膽固醇酯酶H2O+紅色(hóngsè)醌類物質(zhì)過氧化物(ɡuòyǎnɡhuàwù)酶(POD)510nm光吸收法測(cè)定相對(duì)血清總膽固醇濃度二、實(shí)驗(yàn)原理血清總膽固醇游離膽固醇膽固醇酯膽固醇氧化酶膽甾烯酮+H2O2(2)游離膽固醇第三頁,共9頁。三、實(shí)驗(yàn)(shíyàn)器材材料:人血清試劑:總膽固醇測(cè)定試劑盒用具(yòngjù):分光光度計(jì),微量移液槍,試管,試管架,恒溫水浴鍋第四頁,共9頁。(1)取3支試管,按下表加入(jiārù)試劑:試劑試劑空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管1樣品管2樣品管3工作試劑(mL)1.01.01.01.01.0標(biāo)準(zhǔn)液(uL)–10.0–––血清樣品(uL)––10.010.010.0四、實(shí)驗(yàn)(shíyàn)步驟充分混勻,37℃水浴(shuǐyù)中保溫15min;冷卻至室溫后,510nm處比色比色方法:以空白管調(diào)零,讀取標(biāo)準(zhǔn)管及樣品管光密度值。第五頁,共9頁。(2)計(jì)算:依據(jù)(yījù)朗伯-比爾定律:A=KLC標(biāo)準(zhǔn)管膽固醇濃度:5.17mmol/L
樣品管膽固醇濃度(mmol/L)=樣品管光密度值
標(biāo)準(zhǔn)管光密度值×5.17C樣=A樣A標(biāo)×C標(biāo)第六頁,共9頁。參考值膽固醇血清參考值:3.0~5.20mmol/L危險(xiǎn)(wēixiǎn)閾值:5.20~6.20mmol/L高膽固醇血癥:>6.20mmol/L
第七頁,共9頁。正確使用比色器皿:手拿比色皿的毛面;比色液應(yīng)占比色皿的2/3。測(cè)定膽固醇所用(suǒyònɡ)的試劑應(yīng)防止被葡萄糖和甘油三酯污染。微量移液槍的正確使用注意事項(xiàng)第八頁,共9頁。思考題1、簡(jiǎn)述膽固醇氧化酶法測(cè)
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