菊花的組織培養(yǎng)二

課題1菊花的組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)是指在人工培養(yǎng)基上，離體培養(yǎng)植物的器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體，并使其生長(zhǎng)、增殖、分化以及再生植株的技術(shù)。1一、基礎(chǔ)知識(shí)1、植物的組織培養(yǎng)（1）細(xì)胞的分化①概念：在個(gè)體發(fā)育中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過(guò)程.②過(guò)程：如：受精卵增殖、生長(zhǎng)、分化形成組織、器官、系統(tǒng).2③特點(diǎn)：B.穩(wěn)定性：C.全能性：A.持久性：是一種持久性的變化，它發(fā)生在生物體的整個(gè)生命過(guò)程中,在胚胎期達(dá)到最大限度.細(xì)胞分化是穩(wěn)定的，一般是不可逆轉(zhuǎn)的.已分化的細(xì)胞，仍具有發(fā)育的潛能.3⑤原因：遺傳信息的執(zhí)行情況不同(選擇性表達(dá))④結(jié)果：形成不同的細(xì)胞和組織（2）細(xì)胞的全能性①定義：生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能的特性.②原理：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完整個(gè)體所必需的全部基因.4高度特化的動(dòng)物細(xì)胞，從整個(gè)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，全能性受到限制。但它的細(xì)胞核仍然保持著全能性，這是因?yàn)榧?xì)胞核內(nèi)含有該物種遺傳性所需要的遺傳物質(zhì).已分化的植物細(xì)胞，仍具有全能性.③實(shí)例受精卵>生殖細(xì)胞>體細(xì)胞④全能性的比較:56（3）植物組織培養(yǎng)細(xì)胞離體①必要條件：一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件②原理:細(xì)胞的全能性A.外植體：從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分細(xì)胞、組織或器官.③相關(guān)概念:7B.脫分化：由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，又稱去分化。C.再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過(guò)程中重新分化根或芽等器官的過(guò)程D.愈傷組織:細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則,是高度液泡化的、成無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞.8人參的愈傷組織9菠蘿的愈傷組織1011122、影響響植物物組織織培養(yǎng)養(yǎng)的因因素（1）植物物材料料的選選擇煙草和和胡蘿蘿卜的的組織織培養(yǎng)養(yǎng)較為為容易易枸杞愈愈傷組組織的的芽誘誘導(dǎo)比比較難難同一植植物材料的的年齡齡、保保存時(shí)時(shí)間的的長(zhǎng)短短會(huì)影響響實(shí)驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果果菊花的的組織織培養(yǎng)養(yǎng)一般般選擇擇未開開花植植株的的莖上上部新新萌生生的側(cè)側(cè)枝1314（2）離體體的植植物組組織和和細(xì)胞胞對(duì)營(yíng)營(yíng)養(yǎng)、、環(huán)境境等條條件的的要求求相對(duì)對(duì)特殊殊，需需配置置不同同的培培養(yǎng)基基MS培養(yǎng)基基主要要成分分包括括：A、大量元元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機(jī)物物、植物激激素15MS固體培培養(yǎng)基基成分分及比比例(P84)16討論：：培養(yǎng)養(yǎng)基各各種營(yíng)營(yíng)養(yǎng)物物質(zhì)的的作用用？同同專題題2中微生生物培培養(yǎng)基基的配配方相相比，，MS培養(yǎng)基基的配配方有有哪些些明顯顯的不不同？？答：微量元元素和和大量量元素素提供供植物細(xì)細(xì)胞生生活所所必需需的無(wú)無(wú)機(jī)鹽鹽；蔗糖提供碳碳源，，同時(shí)時(shí)能夠夠維持持培養(yǎng)養(yǎng)基的的滲透透壓；；甘氨酸酸、維維生素素等物質(zhì)質(zhì)主要要是為為了滿滿足離離體植植物細(xì)細(xì)胞在在正常常代謝謝途徑徑受到到一定定影響響后所所產(chǎn)生生的特特殊營(yíng)營(yíng)養(yǎng)需需求。。微生物物培養(yǎng)養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)營(yíng)養(yǎng)為主。。與微微生物物的培培養(yǎng)不不同，，MS培養(yǎng)基基則需提提供大量無(wú)無(wú)機(jī)營(yíng)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)機(jī)鹽混混合物物包括括植物物生長(zhǎng)長(zhǎng)必須須的大大量元元素和和微量量元素素兩大大類。。17①常用的的植物物激素素：生生長(zhǎng)素素、細(xì)細(xì)胞分分裂素素和赤赤霉素素生長(zhǎng)素素類：：2，4－二氯氯苯氧氧乙酸酸（2，4－D）、吲吲哚乙乙酸（（IAA）、萘萘乙酸酸（NAA）、吲吲哚丁丁酸（（IBA）細(xì)胞分分裂素素類：：激動(dòng)素素（KT）、6－芐基基嘌呤呤（6－BA）、玉玉米素素（ZT）赤霉素素類：：赤霉酸酸（GA3）（3）植物物激素素的影影響18②生長(zhǎng)素素和細(xì)細(xì)胞分分裂素素作用用植物中中生長(zhǎng)長(zhǎng)素和和細(xì)胞胞分裂裂素是是啟動(dòng)動(dòng)細(xì)胞胞分裂裂、脫脫分化化和再再分化化的關(guān)關(guān)鍵性性激素素。在在生長(zhǎng)長(zhǎng)素存存在的的情況況下，，細(xì)胞胞分裂裂素的的作用用呈現(xiàn)現(xiàn)加強(qiáng)強(qiáng)的趨趨勢(shì)使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化先使用細(xì)胞分裂素后使用生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率高19生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：>有利于于根的分化化,抑制芽芽的分分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：<有利于于芽的分化化，抑抑制根根的分分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：＝促進(jìn)愈傷組組織生長(zhǎng)③生長(zhǎng)素素和細(xì)細(xì)胞分分裂素素同時(shí)時(shí)使用用，用用量的的比例例對(duì)植植物細(xì)細(xì)胞發(fā)發(fā)育方方向的的影響響（4）pH、溫度度、光光照pH控制在在5.8左右，，溫度度控制制在18－22。C,每日用用日光光燈照照射12h.203、植物物組織織培養(yǎng)養(yǎng)過(guò)程程:離體組組織或或細(xì)胞胞植物體體脫分化細(xì)胞分分裂素素≈生生長(zhǎng)素素愈傷組組織芽根細(xì)胞分分裂素素>生長(zhǎng)素素細(xì)胞分分裂素素<生長(zhǎng)素素再分化植物細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)不需要要光?需要光光21植物組組織培培養(yǎng)的的過(guò)程程離體的的植物物組織織或細(xì)細(xì)胞愈傷組組織根和芽芽完整的的植物物體脫分化化再分化化22二、實(shí)實(shí)驗(yàn)操操作（一））制備備MS固體培培養(yǎng)基基MS培養(yǎng)基基包括括20多種營(yíng)營(yíng)養(yǎng)成成分，，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室一一般使使用4。C保存配配制好好的培培養(yǎng)基基母液液來(lái)制制備.1、配置置各種種母液液23①無(wú)機(jī)物物中大大量元元素濃濃縮10倍，微微量元元素濃濃縮100倍，常常溫保保存.②激素類類、維維生素素類以以及用用量較較小的的有機(jī)機(jī)物一一般可可按1mg/ml的質(zhì)量量濃度度單獨(dú)獨(dú)配制制成母母液.③用母液液配制制培養(yǎng)養(yǎng)基時(shí)時(shí)，需需要根根據(jù)各各種母母液的的濃縮縮倍數(shù)數(shù)，計(jì)計(jì)算用用量.242、配置置培養(yǎng)養(yǎng)基分裝到到錐形形瓶中中，每每瓶分分裝50ml或100ml.①配制培培養(yǎng)液液②調(diào)PH③培養(yǎng)基基的分分裝由于菊菊花的的莖段段的組組織培培養(yǎng)比比較容容易，，因此此不必必添加加植物物激素素.253、滅菌菌分裝好好的培培養(yǎng)基基連同同其他他器械械一起起進(jìn)行行高壓壓蒸汽汽滅菌菌.1、選材：菊花花莖段段，取取生長(zhǎng)長(zhǎng)旺盛盛的嫩嫩枝.（二）外外植體消消毒2、消毒①流水沖洗洗菊花莖段段用流水水沖洗后后可少許許洗衣粉粉，用軟軟刷輕輕輕刷洗，，刷洗后后在流水水下沖洗洗20min左右.26②酒精處理理用無(wú)菌吸吸水紙吸吸干外植植體表面面的水分分，放入入體積分分?jǐn)?shù)為70％的酒精中中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將將外植體體取出，，在無(wú)菌菌水中清清洗.③消毒液處處理取出后用用無(wú)菌吸吸水紙吸吸干外植植體表面面的水分分，放入入質(zhì)量分分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后后在無(wú)菌菌水中至至少清洗洗3次，漂凈凈消毒液.27（三）接接種污染的主主要來(lái)源源是空氣氣中的細(xì)細(xì)菌和孢孢子，接接種室消消毒是至至關(guān)重要要的。用用70％的酒精精噴霧使空氣消消毒，酒精或新新潔爾滅滅搽洗工作作臺(tái)并用用紫外線照射20分鐘1、接種室室消毒2、無(wú)菌操操作要求求操作要在在酒精燈燈火焰旁旁完成，，每次使使用器械械后，都都需要用用火焰灼灼燒滅菌菌，接種種后立即即蓋好瓶瓶蓋。3、材料的的切取和和接種28294、接種注注意事項(xiàng)項(xiàng)①每接種一一塊外植植體前，，鑷子需需放入體體積分?jǐn)?shù)數(shù)為75％的酒精精溶液中中消毒一一次，然然后在酒酒精燈火火焰上燒燒一遍，，冷卻后后再接種種.②外植體在在培養(yǎng)基基中要分分布均勻勻，放置置外植體體數(shù)量根根據(jù)錐形形瓶的大大小確定定，一般般胡蘿卜卜3－4塊，菊的的莖或葉葉6－8塊，也不不要太少少，以充充分利用用培養(yǎng)基基中的營(yíng)營(yíng)養(yǎng)成分分和光照照條件.③插入時(shí)應(yīng)應(yīng)注意方方向，不要倒插插。莖段、莖莖尖基部部插入培養(yǎng)養(yǎng)基利于于吸收水水分和養(yǎng)養(yǎng)分.30思考：你你打算做做幾組重重復(fù)？你你打算設(shè)設(shè)置對(duì)照照實(shí)驗(yàn)嗎嗎？答:(空白對(duì)照照）每種材料料或配方方至少要做做一組以以上的重重復(fù)。設(shè)置對(duì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)驗(yàn)可以取取用一個(gè)個(gè)經(jīng)過(guò)滅滅菌的裝裝有培養(yǎng)養(yǎng)基的錐錐形瓶，，與接種種操作后后的錐形形瓶一同同培養(yǎng)，，用以說(shuō)說(shuō)明培養(yǎng)養(yǎng)基制作作合格，，沒有被被雜菌污污染。31（四）培培養(yǎng)1、愈傷組組織的培培養(yǎng)從接種外外植體到到出現(xiàn)愈愈傷組織織需經(jīng)過(guò)過(guò)2周時(shí)間。2周之內(nèi)可可以看到到外植體體上逐漸漸長(zhǎng)出乳乳白色或或黃白色色的瘤狀狀愈傷組組織。首次培養(yǎng)養(yǎng)愈傷組組織時(shí)，，恒溫箱箱的門應(yīng)應(yīng)該關(guān)閉閉不必見見光，因因?yàn)樵跓o(wú)無(wú)光條件件下愈傷傷組織長(zhǎng)長(zhǎng)的更快快。2周后，培培養(yǎng)基成成分接近近耗盡，，必須更更換培養(yǎng)養(yǎng)基，進(jìn)進(jìn)行繼代代培養(yǎng).32在愈傷組組織繼代代培養(yǎng)期期間，將將恒溫箱箱的門打打開，讓讓愈傷組組織見光光，愈傷傷組織見見光后顏顏色可以以轉(zhuǎn)為綠綠色.2、試管苗苗的培養(yǎng)養(yǎng)當(dāng)愈傷組組織長(zhǎng)到到一定大大小后，，可以更更換培養(yǎng)養(yǎng)基，進(jìn)進(jìn)行試管管苗的見光培養(yǎng)養(yǎng).（五）移移栽移栽生根根的菊花花試管苗苗之前，，應(yīng)先打打開培養(yǎng)養(yǎng)瓶的封封口膜，，讓試管管苗在培培養(yǎng)間生生長(zhǎng)幾日日.1、打開封封口膜2、清洗轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移用流水清清洗根部部的培養(yǎng)養(yǎng)基，將幼苗移移植到消消過(guò)毒的的蛭石或或珍珠巖巖等環(huán)境境下生活一段段時(shí)間.33（六）栽栽培3、移栽珍珠巖：：固體基質(zhì)質(zhì)型，含含水量高高、蓄水水性強(qiáng)、、透性好好，適合合栽培.幼苗長(zhǎng)壯壯后，移移栽到土土壤中.幼苗移栽栽后，每每天觀察察并記錄錄幼苗的的生長(zhǎng)情情況，適適時(shí)澆水水、施肥肥，直至至開花.3435三、課題題延伸1、一般來(lái)來(lái)說(shuō)，容容易進(jìn)行行無(wú)性繁繁殖的植植物，也也容易進(jìn)進(jìn)行組織織培養(yǎng).2、實(shí)例：蘆薈薈、豆瓣綠、、秋海棠、月月季.36(1)、培育無(wú)病毒毒植株(2)、誘導(dǎo)離體的的植物組織形形成具有生根根發(fā)芽能力的的胚狀結(jié)構(gòu)，，包裹上人造造種皮，制成成人工種子，，可以解決有些作物品種種繁殖能力差差，結(jié)子困難難或發(fā)芽率低低等問(wèn)題.(3)、基因工程中中亦需用到植植物組織培養(yǎng)養(yǎng)的方法3、植物組織培培養(yǎng)的應(yīng)用：：37人工種子38同常規(guī)的無(wú)性性繁殖方法相相比，組織培培養(yǎng)快速繁殖殖法主要具有有以下優(yōu)點(diǎn)：：（1）快速。采用常規(guī)的方方法如分株法法，一棵花卉卉一年一般只只能生產(chǎn)幾株株或幾十株，，但用組織培培養(yǎng)的方法則則每年可以繁繁殖出幾萬(wàn)甚甚至數(shù)百萬(wàn)的的小植株。（2）周年生產(chǎn)。。花卉組織培養(yǎng)養(yǎng)快速繁殖是是在實(shí)驗(yàn)室中中進(jìn)行，因條條件可控，所所以不受季節(jié)節(jié)限制，可以以全年進(jìn)行連連續(xù)生產(chǎn)。而而常規(guī)的無(wú)性性繁殖則受季季節(jié)限制，只只能在花卉生生長(zhǎng)季節(jié)進(jìn)行行繁殖。（3）經(jīng)濟(jì)效益高高?；ɑ芙M織培養(yǎng)養(yǎng)快速繁殖所所需要的空間間小，在一個(gè)個(gè)200平方米的培養(yǎng)養(yǎng)室內(nèi)一年可可生產(chǎn)試管苗苗上百萬(wàn)株。。如按每株1元計(jì)算，每年年產(chǎn)值上百萬(wàn)萬(wàn)元。（4）以組織培養(yǎng)養(yǎng)繁殖的種苗苗與母株有著著相同的遺傳傳基因。所以使用這項(xiàng)項(xiàng)技術(shù)可讓優(yōu)優(yōu)良的品種不不斷地延續(xù)。。組織培養(yǎng)與常常規(guī)繁殖相比比優(yōu)點(diǎn)眾多39本課題內(nèi)容小小結(jié)菊花組織培養(yǎng)養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)操作植物體的組織織培養(yǎng)影響組織培養(yǎng)養(yǎng)的因素細(xì)胞分化細(xì)胞全能性組織培養(yǎng)過(guò)程程營(yíng)養(yǎng)激素環(huán)境條件MS固體培養(yǎng)基制制備外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培40作業(yè)：P361、在植物組織織培養(yǎng)過(guò)程中中，為什么要要進(jìn)行一系列列的消毒、滅滅菌，并且要要求無(wú)菌操作作。2、在選取菊花花莖段是，為為什么要選取取生長(zhǎng)旺盛的的嫩枝？外植體的生理理狀態(tài)是成功功進(jìn)行組織培培養(yǎng)的重要條條件之一。生生長(zhǎng)旺盛的嫩嫩枝生理狀況況好，容易誘誘導(dǎo)脫分化和和再分化。植物組織培養(yǎng)養(yǎng)所利用的植植物材料體積積小、抗性差差，對(duì)培養(yǎng)條條件的要求較較高。用于植植物組織培養(yǎng)養(yǎng)的培養(yǎng)基同同樣適合于某某些微生物的的生長(zhǎng)，如一一些細(xì)菌、真真菌等的生長(zhǎng)長(zhǎng)。而培養(yǎng)物物一旦受到微微生物的污染染，就會(huì)導(dǎo)致致實(shí)驗(yàn)前功盡盡棄，因此要要進(jìn)行嚴(yán)格的的無(wú)菌操作。。4121.下圖是植物組組織培養(yǎng)的簡(jiǎn)簡(jiǎn)略表示。據(jù)據(jù)此回答：①②③練習(xí)1、下圖是植物物組織培養(yǎng)的的簡(jiǎn)略表示。。據(jù)此回答：：（1）①表示__________________，它能被培養(yǎng)養(yǎng)成為④的根根本原因是______________________________________。（2）②表示____________，它與①相比比分化程度__________，全能性____________.（3）若想制成人人工種子，應(yīng)應(yīng)選用____________。（4）若①是花藥藥，則④是____________，繼續(xù)對(duì)其其使用____________處理可獲得得____________正常植株，，該過(guò)程稱稱為__。（5）若①是胡胡蘿卜根尖尖細(xì)胞，則則培養(yǎng)成④④的葉片的的顏色為____________，這說(shuō)明____________。（6）若利用此此項(xiàng)技術(shù)制制造治療燙燙傷、割傷傷的藥物——紫草素，培培養(yǎng)將進(jìn)行行到____________。④①脫分化②再分化③答案：（1）離體的植植物組織或或器官植植物細(xì)胞胞具有全能能性（（2）愈傷組織織低高高（（3）③（（4）單單倍倍體體植植株株秋秋水水仙仙素素純純合合體體單單倍倍體體育育種種（（5）綠綠色色含含有有表表達(dá)達(dá)葉葉綠綠體體的的基基因因（（6）②②42練習(xí)習(xí)2、基基因因型型為為AaBb的水水稻稻（（含含24條染染色色體體））的的花花藥藥通通過(guò)過(guò)無(wú)無(wú)菌菌操操作作接接入入試試管管后后，，在在一一定定條條件件下下形形成成試試管管苗苗，，問(wèn)問(wèn)：：（1）愈愈傷傷組組織織是是花花粉粉細(xì)細(xì)胞胞不不斷斷分分裂裂后后形形成成的的不不規(guī)規(guī)則則的的細(xì)細(xì)胞胞團(tuán)團(tuán)，，愈愈傷傷組組織織形形成成過(guò)過(guò)程程中中，，必必須須從從培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中獲獲得得_____________等營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)物物質(zhì)質(zhì)。。（2）要要促促進(jìn)進(jìn)花花粉粉細(xì)細(xì)胞胞分分裂裂生生長(zhǎng)長(zhǎng)，，培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中應(yīng)應(yīng)有有_____________和_____________兩類類激激素素。。（3）愈愈傷傷組組織織分分化化是是指指愈愈傷傷組組織織形形成成芽芽和和根根，，再再由由芽芽發(fā)發(fā)育育成成葉葉和和莖莖。。這這一一過(guò)過(guò)程程必必須須給給予予光光照照，，其其原原因因是是_____________能利利用用光光能能制制造造有有機(jī)機(jī)物物，，供供試試管管苗苗生生長(zhǎng)長(zhǎng)發(fā)發(fā)育育。。（4）試試管管苗苗的的細(xì)細(xì)胞胞核核中中含含_________條脫脫氧氧核核糖糖核核苷苷酸酸鏈鏈。。（5）培培育育成成的的試試管管苗苗可可能能出出現(xiàn)現(xiàn)的的基基因因型型有有_____________。答案案：：（（1）水水、、無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)鹽鹽、、維維生生素素和和小小分分子子有有機(jī)機(jī)物物（（2）細(xì)細(xì)胞胞分分裂裂素素植植物物生生長(zhǎng)長(zhǎng)素素（（3）葉葉綠綠體體（（4）24（5）AB、aB、Ab、ab439、靜靜夜夜四四無(wú)無(wú)鄰鄰，，荒荒居居舊舊業(yè)業(yè)貧貧。。。。1月月-231月月-23Sunday,January1,202310、雨中中黃葉葉樹，，燈下下白頭頭人。。。14:51:3014:51:3014:511/1/20232:51:30PM11、以我獨(dú)沈沈久，愧君君相見頻。。。1月-2314:51:3014:51Jan-2301-Jan-2312、故故人人江江海海別別，，幾幾度度隔隔山山川川。。。。14:51:3014:51:3014:51Sunday,January1,202313、乍見翻疑疑夢(mèng)，相悲悲各問(wèn)年。。。1月-231月-2314:51:3014:51:30January1,202314、他鄉(xiāng)生生白發(fā)，，舊國(guó)見見青山。。。01一一月20232:51:30下午午14:51:301月-2315、比不了得得就不比，，得不到的的就不要。。。。一月232:51下下午1月-2314:51January1,202316、行行動(dòng)動(dòng)出出成成果果，，工工作作出出財(cái)財(cái)富富。。。。2023/1/114:51:3014:51:3001January202317、做前前，能能夠環(huán)環(huán)視四四周；；做時(shí)時(shí)，你你只能能或者者最好好沿著著以腳腳為起起點(diǎn)的的射線線向前前。。。2:51:30下午午2:51下午午14:51:301月-239、沒有失敗，，只有暫時(shí)停停止成功！。。1月-231月-23Sunday,January1,202310、很多事情情努力了未未必有結(jié)果果，但是不不努力卻什什么改變也也沒有。。。14:51:3014:51:3014:511/1/20232:51:30PM11、成功就是日日復(fù)一日那一一點(diǎn)點(diǎn)小小努努力的積累。。。1月-2314:51:3014:51Jan-2301-Jan-2312、世間成成事，不不求其絕絕對(duì)圓滿滿，留一一份不足足，可得得無(wú)限完完美。。。14:51:3014:51:3014:51Sunday,January1,202313、不不知知香香積積寺寺，，數(shù)數(shù)里里入入云云峰峰。。。。1月月-231月月-2314:51:3014:51:30January1,202314、意志志堅(jiān)強(qiáng)強(qiáng)的人人能把把世界界放在在手中中像泥泥塊一一樣任任意揉揉捏。。01一一月月20232:51:30下下午14:51:301月-2315、楚塞三湘接接，荊門九派派通。。。一月232:51下下午1月-2314:51January1,202316、少年