病原微生物實驗室生物安全管理手冊

微生物實驗室生物安全管理手冊***疾病預防控制中心PAGEPAGE17備注序號備注序號名稱1實驗室人員和項目準入制度2人員培訓考核制度3人員健康監(jiān)護制度4生物安全檢查制度5實驗室人員生物安全行為規(guī)范6事件、傷害、事故和職業(yè)性疾病報告制度7實驗室生物危險標識使用規(guī)定8實驗室內(nèi)務管理制度9實驗室菌（毒）種和生物樣本安全保管和檔案管理制度10實驗室廢棄物管理制度11實驗室消毒隔離制度12實驗室應急處置預案13實驗活動生物安全標準操作規(guī)程一、實驗室人員和項目準入制度目的果準確可靠。適用范圍適用于生物安全二級實驗室安全運轉及在此環(huán)境下的所有檢測工作。職責進入生物安全二級實驗室從事檢測工作的所有人員嚴格按照本規(guī)定執(zhí)行。具體要求：概述下列規(guī)定：具備操作資質的人員可在生物安全二級實驗室內(nèi)工作實驗室。在實驗室內(nèi)的一切活動，必須遵照生物安全手冊的規(guī)定進行。實驗室內(nèi)污染的空氣需通過高效過濾器后方能排出室外。實驗室內(nèi)產(chǎn)生的污水，必須經(jīng)過消毒后方可進入公共污水系統(tǒng)。室。實驗室內(nèi)準備二級全排式生物安全柜實驗操作，置其內(nèi)進行，以保證實驗室內(nèi)空間的安全。實驗室運行的安全性要求確可靠。實驗室工作的質量要求數(shù)據(jù)，必須準確可靠：實驗室出具的檢驗報告，必須明確完整。實驗室操作規(guī)程啟動實驗室開始工作前半小時。開啟實驗室主電源，使實驗室及生物安全柜投入運行。開啟順序：①開啟屋頂風機②開啟全排風③開啟空調(diào)④開啟安全柜⑤打開房間紫外線燈。個人防護工作人員按照下列要求進行個人防護，才能進入實驗室區(qū)域：在更衣室中換穿工作服和工作鞋。在清潔區(qū)內(nèi)，根據(jù)實驗要求做好防護。污染材料飛濺的操作時，需加戴防護面罩。進入實驗室工作人員進入實驗室時，每進入一道門，應將此門關好，再開啟下一道門。進入實驗室后，關閉房間紫外線燈。檢查實驗室運轉是否正常。做好開始實驗的各項準備。啟用標本、試劑位，使其在冰箱外停留的時間盡可能短。操作吸管插入試管底部，用吸球緩慢吸取，避免產(chǎn)生汽泡或汽溶膠。離心時，應使用雙蓋封閉式離心機和全封閉試管，每管離心液總量低于最高容量1個刻度單位：平衡時不得有液體滲陋到管套中，離心機使用后立即用消毒液擦洗消毒。觀察結果不打開容器的觀察允許在生物安全柜外進行，否則，必須在生物安全柜內(nèi)觀察結果。準予攜出實驗室的材料確保不含感染性的實驗材料，才可以從實驗室攜出。容器表面應用75%乙醇消毒。實驗室清潔2075%污染物品處理毒。更換工作服。工作完畢的更衣順序是，先用消毒液浸泡手套5放入高壓消毒袋內(nèi)，再次浸泡手套后除去手套，用75%酒精棉球擦面部裸露部位。實驗室消毒每次工作完畢，生物安全柜內(nèi)用75%酒精擦拭臺面，消毒液消毒地面，開啟紫外線燈照射1小時后，逐一關閉實驗室送風和通風設備{關閉順序與開啟順序相反}。實驗記錄與實驗報告實驗記錄實驗記錄帶出實驗室將上述記錄在紙張上的實驗記錄應用80福爾馬林，密閉熏蒸消毒6小時后方可帶出實驗室。或閣著實驗室玻璃窗由清潔區(qū)工作人員抄錄一份。實驗記錄錄入計算機24小時內(nèi)錄入計算機。記錄準確的實驗報告和錄入時間。再按1周，以備實驗室記錄備份定期檢查實驗記錄，核對備份與原始的實驗記錄，對記錄中的缺陷提出修改意見。實驗記錄的保存年限實驗記錄保存一年。已使用的實驗記錄(出具報告，發(fā)表論文，或以其他方式引用)，在使用后再保存一年。如無特殊必要，備份的實驗記錄一般永久保存。出具實驗報告在需要出具正式實驗報告的場合再由單位簽發(fā)人簽字并加蓋公章發(fā)出。標本保管規(guī)則標本進入實驗室目的等相關信息。實驗目的等相關信息。標本的保管根據(jù)標本的性質、目的進行保存，每分標本分兩份，一份檢測時使用，另一份備用。標本因各種原因損失時，啟用后備標本，并重新備份。標本的銷毀確定不用的標本，采用高壓滅菌后焚燒的方式銷毀。實驗室裝備保養(yǎng)實驗室定期保養(yǎng)實驗室的定期保養(yǎng)按照提供實驗室設備廠商的規(guī)定進行，主要是對機械和電器部分進行維護。實驗室儀器設備的保養(yǎng)和維護器必須按說明書規(guī)定的時間定期由專業(yè)人員更換，其它儀器設備也應根據(jù)實際需要清潔保養(yǎng)。實驗室儀器設備的維修更換毒，方可處理或重新投入使用。意外情況處理實驗室意外事件的處理原則造成或可能造成實驗室污染30分鐘后，對污染的物品進行清理。清理后的2小時再進行與處理記錄表。重新使用。實驗室人員的隔離觀察發(fā)生可疑的實驗室感染事故時，應對被感染的人員進行隔離觀察。如果判定為法定的傳染病感染，應按[傳染病防治法]的規(guī)定報告，同時給予有效的隔離治療二、人員培訓考核制度目的規(guī)范實驗室相關人員的培訓考核適用范圍適用于生物安全涉及的所有工作人員3、人員培訓考核制度實驗室工作人員的培訓人組織進行，并指定熟悉實驗室工作的人員擔任輔導。培訓內(nèi)容包括：相關檢驗的國家診斷標準、處理原則以及本手冊內(nèi)容。實驗室所有設備的使用方法。個人防護方法。實驗室基本技術。實驗室消毒凈化的方法。實驗室工作人員的資格考試3個月，才能獲得獨立進行實驗室操作的正式資格。三、人員健康監(jiān)護制度目的規(guī)范實驗室相關人員的健康監(jiān)護適用范圍適用于生物安全涉及的所有工作人員3、人員健康監(jiān)護制度工作人員從事工作前必須進行HIV每半年進行一次HIV抗體復檢，并保留血樣一年以上。生物安全危害是否發(fā)生。以便對從事涉及生物安全危害人員的健康狀況進行跟蹤。實驗室工作人員的適合工作狀態(tài)抗力下降的狀況：妊?、在實驗室內(nèi)連續(xù)工作4小時以上或其他原因造成的疲勞狀態(tài)。四、生物安全檢查制度目的規(guī)范實驗室生物安全，保證設備正常運行。適用范圍適用于生物安全涉及的儀器設備（比如生物安全柜等）3、生物安全檢查制度實驗室內(nèi)，每2個月以細菌培養(yǎng)的方式進行安全性檢測。生物安全柜內(nèi)放置平板培養(yǎng)基24125分鐘，然后蓋上，每平板菌落數(shù)平均不得超過2五、實驗室人員生物安全行為規(guī)范目的規(guī)范實驗室人員的生物安全行為規(guī)范適用范圍適用于生物安全涉及的所有工作人員生物安全組織管理與行為規(guī)范組織框架圖單位法人{或授權}負責人↓實驗室負責人↓生物安全員↓實驗室工作人員各類人員相應行為規(guī)范}負責人負責組織生物安全實驗室的立項、選址，施工隊的資質驗證。執(zhí)行情況。負責組織對造成外環(huán)境污染、實驗室污染、人身傷害事故的調(diào)查與處理。實驗室負責人組織制定安全手冊、操作規(guī)程等文件。的準確可靠。生物安全員有關安全與衛(wèi)生政策與標準。一旦發(fā)現(xiàn)不安全因素，立即停止工作并上報實驗室負責人。與有關人員討論研究安全政策的問題。確認所有工作人員都具有進入實驗室工作的資格。為所有人員提供連續(xù)性的安全要教育與指導。員提供最新的安全文獻和信息資料。定期檢查實驗室的各項技術參數(shù)，組織對實驗室裝備的常規(guī)保養(yǎng)。露，也要予以調(diào)查，并向實驗室負責人員和安全委員會報告調(diào)查結果和提出建議。染時，協(xié)助隨訪調(diào)查其疾病或缺勤情況。意外事件和事故進行詳細的書面記錄。確保任何需要修理和維護的儀器設備在消毒與凈化之后方可運出實驗室。作的微生物有全面、完整的了解；具有組織實驗室工作的能力；對工作有高度的責任心。實驗室工作人員進行。必須按規(guī)定進行個人防護，方得進入實驗室。保持實驗室環(huán)境的整潔，每項工作完成之后，必須清理和清潔臺面，離開實驗室注意個人的健康狀況，出現(xiàn)身體不適情況，應及時向實驗室負責人報告。實驗室工作人員的技術要求可靠的實驗結果。必須熟悉相關實驗的國家標準，能夠完成標準所規(guī)定的任務。一旦發(fā)生意外，立即向生物安全員匯報。4、個人防護程序個人防護用品的使用要求N95121631860型如有4手套更換。的防飛濺功能，重復使用前應進行徹底消毒。無過濾作用。袖口、腳踝口應為彈性收口，面部、腰部應有彈性收口或拉繩收口。套應根據(jù)需要及時更換。個人防護用品的穿戴順序進入清潔區(qū)前穿上普通白大衣和實驗室專用鞋。鞋套。注意將手套和鞋套分別套在袖口和褲口外。戴N95口罩及防護面罩、穿防水隔離服、防水鞋套、再戴外層手套。個人防護用品脫卸順序完成實驗后，在半污染區(qū)先用75%}。N95}。將脫掉的物品放入專用消毒袋中就地高壓消毒。防護面罩等重復使用的物品立即放入消毒液內(nèi)，按有關規(guī)定消毒處理。75%乙醇溶液消毒內(nèi)層手套。消毒袋高壓消毒。六、事件、傷害、事故和職業(yè)性疾病報告制度1、目的2、范圍3、職責事故責任部門負責人填寫事故報告單，報告事故發(fā)生的原因及采取的措施。4、工作程序事故分類凡違反各項規(guī)定所造成的事故均為責任事故，按其經(jīng)濟損失和人身傷害和大小分為以下幾種：大小事故界限表損失情況損失情況小事故一般事故大事故重大事故經(jīng)濟損失≤100100~10001000~10000≥10000一人受傷，休工≤33日以上兩人受傷或一人受傷，三人以上受傷，休工人身傷亡1-6殘或死亡。事故的處理上級領導。事故發(fā)生3科室填寫事故報告單，報業(yè)務質量管理科和行政管理科。事故發(fā)生后5重大事故發(fā)生后一周內(nèi)，由中心負責人向上級主管部門送交事故處理專題報告。事故報告處理單等記錄材料由業(yè)務質量管理科歸檔保存責任人技術檔案。七、實驗室生物危險標識使用規(guī)定目的規(guī)范生物安全二級實驗室的使用和管理。適用范圍適用于生物安全二級實驗室。具體要求：關區(qū)域，造成感染的危險。險標本帶入安全區(qū)域對人員造成威脅。八、實驗室內(nèi)務管理制度目的確保生物安全二級實驗室的正常運行、實驗人員、物品和環(huán)境的安全適應范圍適應于生物安全二級實驗室。職責進入生物安全二級實驗室工作的所有工作人員嚴格遵照本管理制度執(zhí)行?；局贫仍谥鲗嶒炇以O置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)。入口處貼有醒目的生物危險標志。非實驗室有關人員和物品不得進入。實驗室內(nèi)不得進食和飲水，或者進行其他與實驗無關的活動。驗室負責人的批準。實驗過程中，嚴格按有關操作程序操作，降低剪除和氣溶膠的產(chǎn)生。用移液器吸取液體，嚴禁口吸。實驗室技術人員指導下進行上崗培訓，達到合格標準，方可開始工作。實驗室工作。實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程。疫苗必須進行免疫注射。所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室前必須經(jīng)可行的消毒方法進行消毒。工作前應消毒，活性物質濺出后要隨時消毒。實驗室特殊管理制度免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的人員不許進入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負責同意方可入內(nèi)。毒處理程序。實驗室人員應接受必要的免疫接種和相應的抗體水品測定。實驗室事故處理：工作人員在操作過程中發(fā)生意外，如針刺和切傷、皮膚污染、感染性立即進行緊急處理。具體措施按《實驗室應急處置預案》執(zhí)行。填寫意外情況登記與處理記錄表，并按規(guī)定報告給有關部門。處特殊情況外，禁止在實驗室內(nèi)使用銳器。剩余的標本應密封后置于適當條件下保存。實驗過程中應使用鑒定合格的二級生物安全柜。九、實驗室菌（毒）種和生物樣本安全保管和檔案管理制度1.目的規(guī)范實驗室菌（毒）種和生物樣本的保管和檔案管理2.適用范圍實驗室菌（毒）3、實驗室菌（毒）和生物樣本的保管按國家規(guī)定可以保存的菌（毒）種，由指定的專人負責登記、保存和管理。按期傳代、鑒定，必須在無菌室或接種罩內(nèi)進行，并做好有關記錄。在保存過程中發(fā)現(xiàn)菌（毒）種變異或死亡，應及時上報科長和中心主任。本區(qū)檢出的地方菌（毒）株應及時上報，因工作需要暫時保留的菌（毒）株也應按上級規(guī)定的時間進行銷毀處理。新發(fā)現(xiàn)的菌（毒）認。菌（毒）種必須每種設一記錄卡，其內(nèi)容包括：名稱、編號、來源、分離日期、引進日用轉移及銷毀情況、保存者、部門負責人等。向上級主管部門申請索取菌（毒）種和向下級有關部門發(fā)放菌（毒）2人參加辦理，嚴格執(zhí)行國家有關規(guī)定，手續(xù)要完備，并認真做好記錄備查。一、二類菌（毒）種，應派專人向提供單位領取，不得郵寄；三類菌（毒）須持有郵寄單位證明，并按照菌（毒）種郵寄與包裝的有關規(guī)定辦理。未經(jīng)上級批準，任何單位及個人不得以工作之便，進行國際間各類菌（毒）好菌（毒）種安全防范工作。4、檔案管理制度、非實驗室人員不得隨意查看實驗室記錄和銷毀、專人負責保管感染者檔案、未經(jīng)領導批準不得向無關人員或單位提供任何實驗室及感染者信息、HIV陽性報告及告知受檢者本人或有關單位十、實驗室廢棄物管理制度目的規(guī)范廢棄物處理適用范圍尖銳器具和其他廢棄物的處理。具體方法：尖銳器具的處理代替玻璃器材。盡可能使用帶針頭套的的注射器、無針頭的系統(tǒng)和其他安全裝置。打碎的玻璃器具，禁止用手直接清理，必須使用其他工具，如掃把、簸箕、夾子或鑷子等。盛污染針、銳器及碎玻璃的容器在丟棄前必須徹底消毒。廢棄物的處理嚴格按照規(guī)定執(zhí)行。應放入適當?shù)娜萜骱蛧栏穹缆┑母邏捍鼉?nèi)，待實驗結束后立即就地高壓消毒。的專用容器中，并及時加蓋。專用的堅壁容器內(nèi)，加蓋密封。以上所有盛裝廢棄物的容器，在每次實驗結束后，就地高壓消毒。12130到消毒要求。中焚燒處理。十一、實驗室消毒隔離制度目的規(guī)范微生物實驗室和生物安全二級實驗室的消毒隔離工作。適用范圍微生物實驗室和生物安全二級實驗室。職責所有工作人員都必須遵從本規(guī)程。具體步驟實驗室基本要求污染區(qū)，并有明顯標識。2000的含氯消毒劑溶液浸濕的腳墊。實驗室內(nèi)所有物品應專用，須帶出時必須嚴格消毒。套等。實驗過程中注意自身防護，并防止操縱過程中的交叉污染。培養(yǎng)基、組織、體液等必須放在防漏密閉的容器中儲運。血清學試驗、樣品的處理和分裝應在BSL-2安全柜內(nèi)進行。樣品離心使用密封的離心杯，以防濺出。實驗過程中使用的器材、實驗廢棄物均應按廢棄物處理程序進行消毒處理。當傳染性標本溢出或濺出后，應有專業(yè)人員立即消毒和清理。消毒，并進行空氣消毒。離開實驗室前，必須按有關規(guī)定消毒雙手。消毒方法儀器等表面消毒：工作結束后，用含有效氯1000的消毒液或75%20分鐘以上。121302000mg/L1小時以上。處理時應避免皮膚損傷。2000mg/L的消毒液或7520分鐘以上。121℃高壓消毒301000mg/L30-60751-3分鐘?？諝庀荆好看螌嶒炃昂笥米贤鉄粽丈湎?，每次不少于11㎡。80ml/m36小時后方可帶出。地面消毒：工作結束，應用含有有效2000mg/L的消毒液噴灑拖地。廢棄物的處理：實驗的廢棄物應放入適當?shù)娜萜鲀?nèi)，就地121℃高壓消毒30毒后的廢棄物集中收集、焚燒處理。實驗室高壓消毒安全操作使用前應了解并掌握高壓鍋的原理及操作規(guī)則，以及不正確使用而導致的災難性后果。按照操作規(guī)程使用高壓鍋接通電源，合上高壓滅菌器左側總電源開關。注入加熱用水，注水至加熱器罩的水位水準器配件尖端浸入水中為止。鍵，把所設溫度存進程序。鍵，把所設時間存進程序。按“實行”鍵執(zhí)行滅菌程序，此時“滅菌”燈閃爍。當滅菌程序執(zhí)行完成，滅菌程序自動停止運行。0刻度時，打開高壓滅菌器頂蓋，取出滅菌樣品。規(guī)程執(zhí)行，并按照規(guī)定進行設備的維護。每1年保養(yǎng)一次，每月檢測一次消毒效果。蓋子或門必須擰緊。定期檢查高壓鍋，以確保其正常工作，防止意外事故發(fā)生，保證消毒滅局效果。高壓滅菌安全操作步驟在滅菌前將雙層的高壓滅菌帶包好，廢物在滅菌袋中的體積不能超過袋子體積的滅菌袋用橡皮帶捆好，但不能扎得太死，否則蒸汽不能進入所料袋內(nèi)影響滅菌效果。實驗產(chǎn)生的所有廢物應該及時就地滅菌處理。如果滅菌器正在使用或優(yōu)于其它原因不當高壓鍋消毒滅菌盜時間后，取出物品放在廢物收集處。當開始滅菌時必須確信滅菌國內(nèi)水量合適，高壓溫度和時間設置正確。滅菌應保持在121℃30分鐘，時間和溫度不得超過設定值，否則滅菌袋會融化，清理困難。十二、實驗室應急處置預案目的規(guī)范緊急情況的處理工作。適用范圍微生物實驗室和微生物安全二級實驗室。職責遇有緊急情況所有工作人員嚴格按此規(guī)程處理。具體要求：30分鐘后，對污染的物品進行處理。清理后在沒有強毒微生物時，再實驗室內(nèi)受到意外傷害，例如割傷、燒傷、燙傷等，由實驗室傷害事故可能導致被強毒微生物感染，例如針頭刺破、銳器割傷、粘膜暴露等途徑接觸實驗室事故可能造成氣溶膠污染，如壓力容器或管道破裂等，立即關閉實驗室，疏散現(xiàn)1培養(yǎng)物等傳染性物質的破碎30分鐘。其后即可清除掉，玻璃碎片應當用鑷子清理。污染區(qū)域應當用消毒劑清洗。破碎物品清理時如果使用了簸箕，應將其進行高壓滅菌或用有效的消毒劑浸泡24小時將其棄入污染廢棄物容器。試管破碎于密閉式安全離心杯中擰松；爾后，將整個離心杯高壓滅菌。蓄意破壞十三、實驗活動生物安全標準操作規(guī)程（一）艾滋病初篩檢測實驗操作規(guī)程目的保證艾滋病病毒抗體ELISA實驗的準確性。適用范圍艾滋病病毒抗體ELISA實驗。具體要求樣品采集-20℃同時做好記錄。樣品運送容器的材料要易于消毒處理，在所放試管周圍上下墊有軟性物質，以免碰碎，容器外標有HIV4℃以下運送。這樣同時附送檢單。樣品登記和處理記初檢結果和實驗方法及所用試劑情況。1-2300015上清液備用，如在幾天內(nèi)檢測可放在2-8-20℃冰箱。實驗準備將試劑從冰箱中取出，按試劑盒要求時間恢復室溫。檢查并記錄冰箱、溫箱溫度。期：整個實驗過程中每一步操作都要在原始記錄表上詳細登記。按照試劑盒的要求配置洗液及其他所需要的試劑。加樣和稀釋必樣溫育貼好封板膜，按照試劑盒要求的溫度和時間進行溫育，最好選擇濕育方法。洗板加酶結合物對于二步法ELISA實驗需加酶結合物，按試劑盒要求完成。加底物洗好板后應立即加底物，需加自配的底物應現(xiàn)配現(xiàn)用。終止反應在規(guī)定的時間內(nèi)用試劑盒中的或根據(jù)要求自行配置的終止液終止反應。酶標儀讀物按照試劑盒的要求選擇濾光片，確定空白孔位置，選擇合適達的打印報告格式，讀數(shù)并打印結果。所用儀器在使用后及時填寫使用記錄。結果判斷計算根據(jù)試劑盒說明書要求的陰陽對照OD值范圍判斷實驗的準確性，陰陽性對照OD在范圍之內(nèi)，試驗方可成立，超出范圍，試驗失敗，整個實驗重做。在指控圖上標出外部指控血清的S/CO值，判斷實驗結果是否被接受。以上兩個條件俊被接受后，根據(jù)試劑盒要求計算cutoff值。小于cutoff值的標本為陰性，大于或等于cutoff值得標本為陽性，在cutoff±10%反應區(qū)標本，用原有的試劑盒另一種試劑重復試驗。結果登記和報告ODHIV填寫HIV抗體篩查陽性送檢單。標本留存轉送陰性標本收集血清冷凍保存一年。并填寫陰性血清保存記錄表，陽性標本收集血清封口包好，冷藏運送送確認實驗室。支持性文件全國艾滋病監(jiān)測工作規(guī)范艾滋病實驗室安全操作及防護措施（二、結核桿菌實驗室生物安全規(guī)程實驗室管理制度和相關負責人姓名和電話。實驗室應有明顯的區(qū)域劃分，清潔區(qū)，辦污染區(qū)和污染區(qū)。無論進入實驗室時間長短，必須填寫工作日志。要嚴格遵守實驗室的一切操作規(guī)程。進行結核菌操作時，需有兩名工作人員同時進入實驗室，盡量避免單獨工作。任討論，必要時加強預防措施。批準方可進入實驗室。標本采集人員安全要求穿防護服，戴一次性口罩，帽子，戴醫(yī)用手術手套。采集標本污染器材的處理：采集標本的痰盒，試管等污染器材軍需高壓處理。標本運送安全要求痰標本需留置在特制的痰盒內(nèi)（直徑4c，高2cm的光口蓋密閉的塑料盒標本送達后痰標本運送箱及時用乙醇或是碳酸等化學消毒劑或高壓的辦法徹底消毒。實驗操作安全要求結核病細菌學實驗室要求