化學(xué)藥品檢驗中應(yīng)注意的問題

化學(xué)藥品檢驗中應(yīng)注意的問題安康市食品藥品檢驗檢測中心朱清麗2014.3實驗準(zhǔn)備與操作中應(yīng)注意的問題溶出度實驗中應(yīng)注意的問題高效液相色譜常見故障及解決方案滴定實驗中的注意事項一、實驗準(zhǔn)備與操作中應(yīng)注意的問題

1、玻璃儀器的清洗及干燥①清洗標(biāo)準(zhǔn)：內(nèi)壁上附著的水膜均勻，既不聚成水滴，也不成股流下。常用的燒杯、三角瓶、量筒等一般玻璃儀器洗滌時，先用自來水沖去灰塵，再用毛刷蘸取洗衣粉等洗滌劑直接刷洗內(nèi)外表面。最后用自來水沖洗干凈，用純化水淋洗三次。滴定管、比色管、容量瓶和移液管等量器不用毛刷刷洗，根據(jù)油污程度選擇適當(dāng)?shù)南礈靹┣逑?。新購買的玻璃器皿可先用0.5%的去污劑洗刷，再用自來水洗凈，然后浸泡在1%～2%鹽酸溶液中過夜（不可少于4小時），再用自來水沖洗，最后用純化水沖洗兩次。②干燥控干干燥法：又叫風(fēng)干，是最簡單易行的干燥方法烘干干燥法：將儀器放入烘箱中，控制溫度在105℃左右烘干。（容量瓶等精密刻度玻璃儀器不適用）吹干干燥法：用電吹風(fēng)快速吹干玻璃器皿。烤干干燥法：用酒精燈或紅外燈加熱烤干玻璃器皿。有機溶劑干燥：對一些不能加熱的厚壁或有精密刻度的儀器，如試劑瓶、吸濾瓶、容量瓶、滴定管等，可加入少量易揮發(fā)且與水互溶的有機溶液（如無水乙醇、甲醇等），轉(zhuǎn)動儀器使溶劑浸潤內(nèi)壁后倒出。如此反復(fù)操作2～3次，便可借助殘余溶劑的揮發(fā)將水分帶走。2、取樣要求具有科學(xué)性、真實性與代表性取樣量：設(shè)樣品總件數(shù)為X

當(dāng)X≤3時，每件取樣；當(dāng)3＜X≤300時，按隨機取樣；當(dāng)X＞300時，按隨機取樣；

3、濾紙的選擇類型：定量分析濾紙、定性分析濾紙、層析定性分析濾紙定量分析濾紙：用于定量化學(xué)分析中重量法分析試驗和相應(yīng)的分析試驗。定性分析濾紙：用于定性化學(xué)分析和相應(yīng)的過濾分析。4、影響實驗的各種因素儀器：比對、測試條件操作：嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)要求規(guī)范對照品：來源、純度、水分、換算、對照品溶液的穩(wěn)定性樣品：貯存條件、均一性滴定液及試劑：重新標(biāo)化、更換試劑并重新配備eg.奧美拉唑腸溶膠囊釋放度問題用不同廠家試劑配制的0.235mol/L磷酸氫二鈉溶液實驗結(jié)果：上海某一廠20%國藥集團90%廣東金砂90%谷維素片（含量應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%~105.0%)不同振搖時間對實驗結(jié)果的影響10min93.4%30min96.2%100min97.0%阿司匹林片中游離水楊酸由于阿司匹林非常容易分解，所以時間控制很重要。必須是臨用新配。二、溶出度實驗中應(yīng)注意的問題1、溶出度（釋放度）的基本概念（1）溶出度：指活性藥物成分從片劑、膠囊劑或顆粒劑等制劑在規(guī)定條件下溶出的速率和程度。——《中國藥典》2010年版（2）溶出度試驗：是一種控制藥物制劑質(zhì)量的體外檢測方法，是以實驗為基礎(chǔ)，以溶解為理論，并用數(shù)學(xué)分析手段處理溶出度試驗數(shù)據(jù)，是研究固體制劑以及半固體制劑所含主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等對制劑質(zhì)量統(tǒng)一性的方法。（3）溶出度測定法：是將某種固體制劑的一定量分別置于溶出度儀的轉(zhuǎn)籃（或溶出杯）中，在37℃±0.5℃恒溫下，在規(guī)定的轉(zhuǎn)速、溶出介質(zhì)中依法操作。——《中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2010年版2、影響溶出度的因素

影響溶出度的因素

藥物性質(zhì)工藝試驗條件制劑溶出試驗條件的影響溫度的影響溶出介質(zhì)脫氣的影響投樣取樣操作的影響轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)桿的影響轉(zhuǎn)速的影響藥片位置效應(yīng)的影響配置溶出介質(zhì)的試劑的影響（1）溫度的影響a、外圍水浴高度應(yīng)超過溶出杯里液面的高度，保證杯中溶出介質(zhì)的溫度；b、當(dāng)溶出介質(zhì)中有機相比例較大時，注意預(yù)熱和試驗過程中介質(zhì)揮發(fā)，需要使用密封性良好的溶出儀。從杯架板杯孔往水浴箱里注入蒸餾水，并使水位達到紅色標(biāo)線（2）溶出介質(zhì)脫氣的影響a、溶液中的氣泡在轉(zhuǎn)籃中聚集，會堵塞轉(zhuǎn)籃孔隙，改變了篩網(wǎng)的孔隙率，從而影響了藥物的溶出。b、氣泡與藥物相連降低了與溶劑接觸的表面，或改變了比重而使崩解和解聚過程改變。c、氣泡與聚集顆粒結(jié)合，使溶劑部顆粒的濃度及顆粒均勻度隨意改變。d、溶入的氣體有時會明顯改變有效成分的性質(zhì)。e、溫度改變時小氣泡釋放出，對液體流型產(chǎn)生影響。f、改變?nèi)艹鼋橘|(zhì)的pH值。脫氣的方法：a、煮沸法：煮沸15分鐘b、抽濾法：加熱至約41℃，趁熱減壓0.45μm過濾c、超聲法：減壓超聲脫氣5分鐘以上d、真空脫氣：取溶出介質(zhì)在緩慢攪拌加熱至41℃，并在真空條件下不斷攪拌5分鐘以上(真空脫氣儀）（3）投樣與取樣操作的影響a、投樣籃法：分別置于干燥轉(zhuǎn)籃中，同時投入六個杯中，自接觸溶出介質(zhì)時開始計時。漿法與小杯法：逐片投入溶出杯中，在30秒內(nèi)完成投樣自第一個樣品接觸溶出介質(zhì)開始啟動攪拌并計時。b、取樣在達到該品種規(guī)定的溶出時間時，應(yīng)在儀器開動的情況下取樣。自6杯中完成取樣，時間一般應(yīng)在1min內(nèi)。取樣至濾過應(yīng)在30s內(nèi)完成。

c、濾膜吸附影響過濾時濾膜與主成分間存在著一個吸附飽和過程，濾膜吸附一定量后達到飽和，不再吸附。（濾膜用蒸餾水浸泡）吸附量2%以下時可忽略不計；如果濾膜的吸附較大，可以將濾膜在水中煮沸1h以上，如果吸附仍很大，應(yīng)改用其他濾膜或濾材。必要時可將微孔濾膜濾過改為離心操作，取上清液測定。

（4）轉(zhuǎn)籃與轉(zhuǎn)桿的影響a、轉(zhuǎn)動時桿是否在溶出杯的正中央。b、轉(zhuǎn)籃潔凈程度：轉(zhuǎn)籃孔隙如有堵塞可用水或其他溶劑超聲處理、洗凈。c、漿板厚度：一般規(guī)定漿板的厚度均為4.0±1.0mm，漿板越厚產(chǎn)生的物理機械力就越大。（5）轉(zhuǎn)速的影響低轉(zhuǎn)速有時差異明顯（6）藥片位置效應(yīng)的影響a、投放過程中要避免與槳桿或槳葉發(fā)生碰撞。b、樣品在溶出杯中位置應(yīng)處于底部中心位置，如有差異距底部中心距離≤1cm（7）配制溶出介質(zhì)的試劑和試液a、無機鹽或有機溶劑，一般因不會廠商不同而產(chǎn)生顯著性差異。b、水，有時會由于來源各異，pH值有所不同，從而導(dǎo)致測定結(jié)果的差異。c、表面活性劑——SDS（十二烷基磺酸鈉

）、吐溫—80等會因生產(chǎn)廠商的不同測定結(jié)果有差異。d、緩沖液調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定pH值±0.05之內(nèi)。三、高效液相色譜常見故障及解決方案

數(shù)據(jù)結(jié)果色譜圖壓力（一）壓力1、無壓力現(xiàn)象判斷故障排除面版燈不亮電源不通檢查電源接頭松脫擰緊接頭泵頭漏液接口太松擰緊泵頭螺絲泵密封墊磨損更換密封墊泵不送溶劑泵頭有氣泡排氣泡，溶劑需脫氣使用的溶劑黏性太高換低黏性溶劑溶劑貯液器中過濾器臟清洗貯液瓶、過濾器排空閥打開關(guān)閉排空閥控制器設(shè)定不正確設(shè)置正確流動相不夠補足流動相2、壓力高現(xiàn)象判斷故障排除壓力值高泵流速設(shè)定太高設(shè)定正確的流速流動相使用不恰當(dāng)使用恰當(dāng)?shù)牧鲃酉嗑彌_結(jié)晶鹽沉淀沖洗樣品與流動相不互溶稀釋或改變流動相柱溫太低升高溫度色譜柱性能下降換柱溶劑貯液器中過濾器臟清洗鏈接管路阻塞沖洗，必要時更換進樣閥阻塞沖洗進樣器3、壓力低現(xiàn)象判斷故障排除壓力值低泵流速設(shè)定太低設(shè)定正確的流速色譜柱選擇不恰當(dāng)更換恰當(dāng)?shù)纳V柱柱溫過高降低柱溫系統(tǒng)漏液檢查漏液位置并維修流動相使用不當(dāng)改變流動相4、壓力不穩(wěn)定現(xiàn)象判斷故障排除壓力變化重現(xiàn)性好采用的方法是梯度所引起的壓力變化是正常的泵內(nèi)有氣泡溶劑脫氣不適當(dāng)排氣泡，溶劑需脫氣壓力波動泵密封墊損壞更換密封墊溶劑混合器故障清洗或更換混合器漏液連接口太松擰緊接口管路損壞更換（二）從色譜圖的異常情況推測1、峰前延現(xiàn)象判斷故障排除峰前延柱性能下降更換色譜柱保護柱失效換柱芯進樣體積太大或樣品濃度太高降低進樣體積或降低樣品濃度2、峰拖尾現(xiàn)象判斷故障排除峰拖尾柱性能下降更換色譜柱保護柱失效換柱芯色譜柱或保護柱被污染清洗柱或保護柱，必要時更換色譜柱選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱流動相選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)牧鲃酉?、峰變寬現(xiàn)象判斷故障排除峰變寬柱性能下降更換色譜柱保護柱失效換柱芯色譜柱或保護柱被污染清洗柱或保護柱，必要時更換色譜柱選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱流動相選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)牧鲃酉嗔鲃酉嗔魉偬驼{(diào)節(jié)流速緩沖液濃度太低增加濃度系統(tǒng)沒到達平衡使系統(tǒng)到達平衡進樣器問題檢查進樣器環(huán)境溫度變化使用柱溫箱漏夜檢查漏夜的位置并維修出現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰選擇其它色譜條件以改善分離效果檢測器時間常數(shù)太大使用較小的時間常數(shù)4、峰分叉現(xiàn)象判斷故障排除峰分叉柱性能下降更換色普柱保護柱失效換柱芯色譜柱或保護柱被污染清洗柱或保護柱，必要時更換進樣體積太大或樣品濃度太高降低進樣體積或降低樣品濃度樣品溶劑不溶流動相改變?nèi)軇┗虿捎昧鲃酉嗳芙鈽悠?、無峰現(xiàn)象判斷故障排除無峰檢測器參數(shù)設(shè)置錯誤設(shè)置正確的檢測器參數(shù)樣品降解檢查樣品配制過程，更換樣品自動進樣器故障檢查進樣器無樣品加樣品檢測器與數(shù)據(jù)處理裝置鏈接故障檢查并正確鏈接6、負(fù)峰現(xiàn)象判斷故障排除出現(xiàn)所有負(fù)峰連接數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)信號線接反正確連接記錄儀或檢測器信號極性相反改變極性設(shè)置出現(xiàn)一個或幾個負(fù)峰離子對分離體系對峰的影響在流動相中溶解樣品使用的流動相吸收高使用流動相稀釋樣品自動進樣器注射進空氣清洗自動進樣器7、鬼峰現(xiàn)象判斷故障排除色譜圖出現(xiàn)鬼峰樣品前處理時產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)品對照、檢查樣品處理過程，換新樣品前一次進樣的洗脫物增加分析時間或梯度洗脫、提高流速、如問題仍存在，兩次進樣間用強溶劑沖洗色譜柱注射器臟清洗注射器、沖洗進樣口流動相被污染清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過濾器、使用HPLC級試劑柱被污染清洗柱或更換柱六通閥污染清洗六通閥檢測器污染清晰檢測器管路污染沖洗流動相中含有穩(wěn)定劑或穩(wěn)定劑變化使用無防腐溶劑8、保留時間變化現(xiàn)象判斷故障排除保留時間不重復(fù)系統(tǒng)不穩(wěn)或未達到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時間使系統(tǒng)平衡室溫波動大使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對流小的環(huán)境柱被污染沖洗柱或更換柱溶劑配比不合適調(diào)節(jié)溶劑配比進樣體積太大或樣品濃度太高減小進樣體積現(xiàn)象判斷故障排除保留時間不變化流速變化重新設(shè)定流速,檢查泵是否正常工作系統(tǒng)沒有達到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時間使系統(tǒng)平衡柱被污染沖洗柱或更換柱流動相被污染清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過濾器、使用HPLC級試劑系統(tǒng)泄漏檢查并進行維修流動相脫氣不夠充分清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過濾器、使用HPLC級試劑室溫變化使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對流小的環(huán)境柱恒溫箱設(shè)置有誤設(shè)置正確的溫度9、基線漂移現(xiàn)象判斷故障排除基線漂移系統(tǒng)不穩(wěn)或沒有達到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時間使系統(tǒng)平衡室溫不穩(wěn)使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對流小的環(huán)境流動相污染或分解清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過濾器、使用HPLC級試劑流動相脫氣不充分脫氣重新平衡系統(tǒng)流動相配比不當(dāng)或流速變化更改配比或流速柱被污染沖洗柱或更換柱現(xiàn)象判斷故障排除基線漂移固定相流失為說明問題存在，用一段連接管路代替色譜柱，通流動相檢測基線檢測池被污染或有氣體用甲醇或其他強極性的溶劑沖洗流通池測定的波長選擇有誤使用分光光度計說明背景吸收，如背景值高，說明流動相含有紫外吸收化合物導(dǎo)致基線漂移。使用的流動相應(yīng)在紫外截止波長以外，或更換溶劑系統(tǒng)泄漏檢查并進行維修樣品中有強保留的物質(zhì)用強度合適的溶劑清洗色譜柱10、無規(guī)則基線噪音現(xiàn)象判斷故障排除無規(guī)則基線噪音系統(tǒng)不穩(wěn)或沒有達到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時間使系統(tǒng)平衡系統(tǒng)泄漏檢查并進行維修流動相污染或分解清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過濾器、使用HPLC級試劑柱被污染沖洗柱或更換柱色譜柱填料流失或阻塞更換色譜柱現(xiàn)象判斷故障排除無規(guī)則基線噪音流動相混合不均或混合器工作不正常維修或更換混合器檢測池被污染或用甲醇或其他強極性的溶劑沖洗流通池系統(tǒng)內(nèi)有氣泡用強極性的溶劑清洗系統(tǒng)檢測器內(nèi)有氣泡清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器檢測器燈能量不足更換燈11、規(guī)則基線噪音現(xiàn)象判斷故障排除規(guī)則基線噪音流動相、檢測器或泵內(nèi)有氣泡流動相脫氣，沖洗系統(tǒng)除去檢測器或泵內(nèi)的空氣室溫不穩(wěn)穩(wěn)定環(huán)境溫度。使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對流小的環(huán)境流動相回收使用除非特殊需要不使用回收溶劑流動相混合不完全使流動相混合均勻或使用低黏度的溶劑泵振動在系統(tǒng)中假如脈沖阻尼器泵入口管路松或阻塞檢查泵入口管路在同一水平上有其他設(shè)備關(guān)掉儀器，檢查干擾是否來自于外部（三）從數(shù)據(jù)結(jié)果中分析1、定量結(jié)果現(xiàn)象判斷故障排除精密度降低樣品預(yù)處理時樣品降解或混入雜質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)品對照、檢查樣品處理過程，換新樣品保留時間改變，峰形不正常見“峰形不正?！钡墓收吓懦椒z測器響應(yīng)故障檢查檢測器峰積分不正確重新設(shè)置參數(shù)現(xiàn)象判斷故障排除精密度降低進樣問題（對外標(biāo)法）隨手動進樣器的類型不同而異，有下列情況：（1）如使用全部定量環(huán)的手動進樣器，在進樣前需在“取樣”狀態(tài)下清洗三次；（2）如使用部分定量環(huán)的手動進樣器，進樣量需少于定量喚體積的50%（3）如使用注射器的手動進樣器，需確保進樣操作重復(fù)；（4）如使用自動進樣器需確保正確的進樣體積，注射器不含空氣，樣品瓶有足夠的樣品，系統(tǒng)不泄漏（5）如手動進樣器、自動進樣器都使用，應(yīng)確保系統(tǒng)的平衡現(xiàn)象判斷故障排除準(zhǔn)確度降低峰積分不正確見“精密度降低”的故障排除方法進樣問題見“精密度降低”的故障排除方法樣品預(yù)處理時樣品降解或混入雜質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)品對照、檢查樣品處理過程，換新樣品樣品蒸發(fā)樣品密封保存在適當(dāng)?shù)臏囟认聵悠非疤幚聿划?dāng)檢查樣品的處理過程內(nèi)標(biāo)物配置不當(dāng)配置新的內(nèi)標(biāo)物2、定性結(jié)果現(xiàn)象判斷故障排除峰不能分辨改變保留時間見“保留時間改變”的故障排除數(shù)據(jù)處理裝置的參數(shù)不正確適當(dāng)輸入?yún)?shù)，進標(biāo)準(zhǔn)樣，提高準(zhǔn)確度無峰改變保留時間故障排除方法數(shù)據(jù)處理裝置的參數(shù)不正確重新適當(dāng)輸入?yún)?shù)，進標(biāo)準(zhǔn)樣，提高準(zhǔn)確度鬼峰見“鬼峰”可能的原因見“鬼峰”的故障排除方法四、滴定實驗中的注意事項1、儀器的檢漏涂凡士林的方法：取下滴定管的活旋塞，用濾紙仔細(xì)擦干旋塞和旋塞套里的水，蘸取少許凡士林，輕涂于旋塞小孔兩側(cè)，平行將