標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 27820-2011 化學(xué)品 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色單體交換試驗(yàn)方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),旨在提供一種評(píng)估化學(xué)品潛在遺傳毒性效應(yīng)的方法。該標(biāo)準(zhǔn)具體規(guī)定了通過觀察和分析體外培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中姊妹染色單體交換(SCE)的發(fā)生頻率來評(píng)價(jià)待測(cè)物質(zhì)是否具有誘導(dǎo)DNA損傷的能力。

根據(jù)這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn),在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)首先需要準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)募?xì)胞系,通常選擇的是中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞(CHL)、人淋巴細(xì)胞或其他合適的細(xì)胞類型作為實(shí)驗(yàn)材料。接著,將這些細(xì)胞暴露于不同濃度的待測(cè)試化學(xué)品下一段時(shí)間,并使用胸腺嘧啶類似物如溴脫氧尿苷(BrdU)標(biāo)記新合成的DNA鏈。經(jīng)過一定周期的培養(yǎng)后,通過特定的技術(shù)手段使細(xì)胞分裂停滯在中期相位,然后對(duì)染色體進(jìn)行染色處理以便于顯微鏡下觀察。

關(guān)鍵步驟包括但不限于:細(xì)胞培養(yǎng)、化學(xué)品暴露、BrdU摻入、收獲與固定細(xì)胞、染色體制片及染色等過程。最終,在熒光或相差顯微鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)細(xì)胞內(nèi)的SCE數(shù)量,以此為基礎(chǔ)計(jì)算出平均SCE率,并與陰性對(duì)照組比較,以判斷受試物是否引起顯著增加的SCE頻率。


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....

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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2011-11-30 頒布
  • 2012-08-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
GB/T 27820-2011化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色單體交換試驗(yàn)方法_第1頁
GB/T 27820-2011化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色單體交換試驗(yàn)方法_第2頁
GB/T 27820-2011化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色單體交換試驗(yàn)方法_第3頁
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文檔簡(jiǎn)介

ICS1330011100

;

A80..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27820—2011

化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色

單體交換試驗(yàn)方法

Chemicals—Testmethodofinvitromammaliancellssisterchromatidexchange

2011-11-30發(fā)布2012-08-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色

單體交換試驗(yàn)方法

GB/T27820—2011

?

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100013)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

/p>

年月第一版

20125

?

書號(hào)

:155066·1-44571

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T27820—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)與聯(lián)合國經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織化學(xué)品測(cè)試指南體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞

(OECD)No.479(1986)《

姊妹染色單體交換試驗(yàn)英文版技術(shù)性內(nèi)容一致

》()。

本標(biāo)準(zhǔn)做了下列結(jié)構(gòu)和編輯性修改

:

增加了范圍一章

———;

將原文中的簡(jiǎn)介部分內(nèi)容作為本標(biāo)準(zhǔn)的引言

———OECD479“”“”;

將原文中的必備資料部分內(nèi)容作為本標(biāo)準(zhǔn)

———OECD479“”,“4.1.1”;

計(jì)量單位統(tǒng)一改為我國法定計(jì)量單位

———。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所遼寧省職業(yè)病防治院中國化工

:、、

經(jīng)濟(jì)技術(shù)發(fā)展中心江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人曲波林錚李雪飛白羽楊挺湯禮軍

:、、、、、。

GB/T27820—2011

引言

體外姐妹染色單體交換試驗(yàn)是一項(xiàng)快速檢測(cè)復(fù)制期染色體兩條姐妹染色單體間相互

(SCE)DNA

交換的試驗(yàn)代表姐妹染色單體同源位點(diǎn)上復(fù)制產(chǎn)物的相互交換盡管其分子機(jī)制還不清

,SCEDNA。

楚但推測(cè)其交換過程可能包括斷裂和重連兩個(gè)步驟檢測(cè)需要使用某種方法對(duì)不同的染

,DNA。SCEs

色體進(jìn)行標(biāo)記如可采用在染色體中摻入溴代脫氧尿嘧啶并復(fù)制兩

。DNA(bromodeoxyuridine,BrdU)

個(gè)細(xì)胞周期的方法可以在哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中進(jìn)行

。SCEs。

GB/T27820—2011

化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色

單體交換試驗(yàn)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色單體交換試驗(yàn)方法的術(shù)語和定義試驗(yàn)原則試驗(yàn)

、、

方法試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告

、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞姊妹染色單體交換試驗(yàn)

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

21

.

姊妹染色單體交換sisterchromatidexchangeSCE

,

細(xì)胞分裂復(fù)制期單個(gè)染色體內(nèi)的兩個(gè)染色體單體的相互交換在細(xì)胞分裂中期相可見到這種交

。

換它可能需要雙螺旋的酶切轉(zhuǎn)移和連接

,DNA、。

3試驗(yàn)原則

哺乳動(dòng)物細(xì)胞在加入和不加入外源性代謝活化系統(tǒng)條件下在含有受試物和溴代脫氧尿嘧啶

,(bro-

的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)兩個(gè)細(xì)胞周期加入紡錘體抑制劑如秋水仙素將分

modeoxyuridine,BrdU),。(),

裂的細(xì)胞匯聚停留在中期分裂相樣階段收獲細(xì)胞制備染色體

,、。

4試驗(yàn)方法

41準(zhǔn)備

.

411受試物

..

應(yīng)提供受試物的物態(tài)純度溶解性熔點(diǎn)沸點(diǎn)值如果適用蒸氣壓如果有等資料

、、、/、pH()、()。

應(yīng)在細(xì)胞染毒前準(zhǔn)備好含有受試物的培養(yǎng)基或?qū)⑹茉囄锶芙庠诤线m的介質(zhì)中受試物應(yīng)新鮮配制

,。

介質(zhì)的終濃度不能顯著影響細(xì)胞活性生長(zhǎng)率和頻率

、SCE。

412細(xì)胞和培養(yǎng)方法

..

可使用原代培養(yǎng)細(xì)胞如人淋巴細(xì)胞或已建立的細(xì)胞系如中國倉鼠卵巢細(xì)胞或肺細(xì)胞細(xì)胞系

()(

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