標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 34745-2017 豬圓環(huán)病毒2型 病毒SYBR Green Ⅰ實(shí)時熒光定量PCR檢測方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),旨在規(guī)范豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的實(shí)驗(yàn)室檢測流程。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用SYBR Green Ⅰ作為熒光染料進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR的方法來檢測豬圓環(huán)病毒2型的具體步驟和技術(shù)要求。
首先,在準(zhǔn)備階段,標(biāo)準(zhǔn)明確了所需材料與試劑清單,包括但不限于引物、dNTPs混合物、Taq酶、SYBR Green Ⅰ染料以及用于提取DNA的標(biāo)準(zhǔn)試劑盒等,并強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)前所有設(shè)備應(yīng)處于良好工作狀態(tài)的重要性。
接著,對于樣品處理部分,描述了從采集到核酸純化的整個過程。這其中包括了如何正確地采取生物樣本,確保其質(zhì)量不受污染;以及采用何種方法或工具對收集來的組織液或其他類型標(biāo)本中的總DNA進(jìn)行有效分離和純化。
在反應(yīng)體系構(gòu)建環(huán)節(jié)中,則具體介紹了如何配制適合于SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR反應(yīng)的最佳條件下的混合溶液,比如各組分的比例調(diào)整及最終體積設(shè)定等細(xì)節(jié)內(nèi)容。
此外,還詳盡說明了運(yùn)行程序設(shè)置,即根據(jù)所使用的儀器型號選擇合適的溫度循環(huán)參數(shù),以保證擴(kuò)增效率最大化同時減少非特異性產(chǎn)物生成的可能性。同時也指出了數(shù)據(jù)分析時需要注意的關(guān)鍵點(diǎn),如Ct值計(jì)算原則、溶解曲線分析技巧等,幫助實(shí)驗(yàn)者準(zhǔn)確判斷陽性結(jié)果并排除假陽性干擾因素。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2017-11-01 頒布
- 2018-05-01 實(shí)施
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GB/T 34745-2017豬圓環(huán)病毒2型病毒SYBR Green Ⅰ實(shí)時熒光定量PCR檢測方法-免費(fèi)下載試讀頁文檔簡介
ICS11220
B41.
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T34745—2017
豬圓環(huán)病毒2型病毒SYBRGreenⅠ實(shí)時
熒光定量PCR檢測方法
Porcinecircovirustype2—MethodofdetectingvirusbySYBR
GreenⅠreal-timePCR
2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
GB/T34745—2017
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口
(SAC/TC181)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位河南農(nóng)業(yè)大學(xué)中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心
:、。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人魏戰(zhàn)勇鄭蘭蘭邵衛(wèi)星胡慧陳紅英王亞賓王學(xué)兵崔保安寇亞楠
:、、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T34745—2017
豬圓環(huán)病毒2型病毒SYBRGreenⅠ實(shí)時
熒光定量PCR檢測方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了實(shí)時熒光定量檢測豬圓環(huán)病毒型的技術(shù)要求
SYBRGreenⅠPCR2。
本標(biāo)準(zhǔn)用于檢測豬圓環(huán)病毒型核酸適用于臨床樣品中豬圓環(huán)病毒型的快速檢測
2,2。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
3縮略語
下列縮略語適用于本文件
。
值循環(huán)閾值
Ct:(CycleThreshold)
脫氧核糖核酸
DNA:(DeoxyribonucleicAcid)
乙二胺四乙酸
EDTA:(EthylenediaminetetraaceticAcid)
磷酸鹽緩沖溶液
PBS:(PhosphateBufferSaline)
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
PCR:(PolymeraseChainReaction)
豬圓環(huán)病毒型
PCV2:2(PorcineCircovirusType2)
仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征
PMWS:(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome)
酶聚合酶
Taq:TaqDNA(TaqDNAPolymerase)
t值解鏈溫度
m:(MeltingTemperature)
4試劑
除非另有規(guī)定僅使用分析純試劑所有試劑均用無酶污染的容器用水處理后高壓
,。RNA(DEPC
滅菌分裝
)。
41蛋白酶配制見附錄保存
.K(A):-20℃。
42裂解緩沖液配制見附錄保存
.(A):4℃。
43異硫氰酸胍裂解液配制見附錄保存
.(A):4℃。
44平衡酚配制見附錄保存
.(A):4℃。
45酚氯仿異戊醇混合液配制見附錄保存
.--(25∶24∶1)(A):4℃。
46氯仿異戊醇配制見附錄保存
.-(24∶1)(A):4℃。
47氯仿常溫保存
.:。
48異丙醇常溫保存
.:。
49乙醇用新開啟的無水乙醇和滅菌去離子水配制符合
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