獸醫(yī)學(xué)畜牧學(xué)-遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)課件

第三章

遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)第一節(jié)遺傳物質(zhì)的本質(zhì)一、DNA是遺傳物質(zhì)（一）DNA是遺傳物質(zhì)的證明1928年Griffith等進(jìn)行的肺炎球菌轉(zhuǎn)化（transformation）實(shí)驗(yàn).1944年Avery證明DNA是遺傳物質(zhì).二、RNA也可作為遺傳物質(zhì)（一）RNA病毒病毒顆粒（viron）：由病毒RNA基因組和包被在外的蛋白質(zhì)外殼組成.病毒的生存方式：病毒編碼包裝基因組所需的蛋白，以及一些在感染循環(huán)中復(fù)制病毒所需的蛋白質(zhì)。其他蛋白質(zhì)由宿主提供。因此病毒不能獨(dú)立生存。（二）類病毒（viroid）類病毒:是使高等植物產(chǎn)生疾病的有傳染性的因子，由很小的環(huán)狀RNA分子構(gòu)成。與病毒不同，類病毒的RNA本身就是感染因子。類病毒只由RNA組成，其中廣泛存在不完全的堿基配對(duì)，形成一種特有的棒狀結(jié)構(gòu)。類病毒的基因組不能編碼蛋白質(zhì)。類病毒的復(fù)制：必須由宿主的酶來完成，其RNA作為模板。類病毒對(duì)宿主的影響：類病毒可通過復(fù)制占有宿主細(xì)胞中關(guān)鍵的酶，從而影響宿主細(xì)胞的正常功能；類病毒也能影響必需的RNA的產(chǎn)生而引發(fā)疾??；它們還可以作為一個(gè)不正常的調(diào)控分子，對(duì)個(gè)別基因的表達(dá)產(chǎn)生特殊的影響。（三）兩種形式的朊病毒的異同：

PrPCPrPSC功能：不詳導(dǎo)致退行性神經(jīng)疾病分布：正常腦被感染腦抗蛋白酶性：可被完全降解只能被部分降解溶解性：可溶難溶一級(jí)結(jié)構(gòu)：兩者相同二級(jí)結(jié)構(gòu)：40%-螺旋20%-螺旋，50%-折疊（四）朊病毒的感染方式PrPSC作用需要PrPC的參與PrPSC蛋白的錯(cuò)誤折疊形式可以催化天然PrPC分子從正常的可溶性的螺旋構(gòu)象向不溶性的-折疊構(gòu)象轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致了疾病和感染。（五）朊病毒的多株現(xiàn)象不同PrPSC株可使一種PrP結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化為不同的構(gòu)型；而同一種PrPSC可以在具有不同PrP蛋白的多種生物中傳代，即使經(jīng)過多次傳代仍然保持自身的生物學(xué)特征。（六）朊病毒是遺傳物質(zhì)嗎？多株現(xiàn)象難以解釋其感染方式能否被視為遺傳復(fù)制？DNA中的常見堿基有：胞嘧啶（cytosine,C）、胸腺嘧啶（thymine,T）、腺嘌呤（adenine,A）和鳥嘌呤（guanine,G）(二）戊糖：核糖和脫氧核糖（三）脫氧核糖核苷（nucleoside）由堿基和戊糖（D-脫氧核糖）縮合而成。有4種脫氧核糖核苷：胞嘧啶脫氧核糖核苷、胸腺嘧啶脫氧核糖核苷、腺嘌呤脫氧核糖核苷和鳥嘌呤脫氧核糖核苷。++H2OH（五）脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid,DNA）脫氧核糖核苷酸以3’，5’磷酸二酯鍵聚合成為脫氧核糖核酸（DNA）鏈。鏈的一端的核苷酸有自由的5’磷酸基團(tuán)，稱5’端；另一端核苷酸具有自由的3’羥基，稱3’端。一個(gè)脫氧核苷酸的3'端與下一個(gè)的5'端通過磷酸二酯鍵連接。DNA鏈的方向就是從5’端到3’端。DNA分子通常以線性或環(huán)狀的形式存在。大多數(shù)DNA由兩條互補(bǔ)的單鏈構(gòu)成。少數(shù)生物的DNA，如某些噬菌體或病毒是以單鏈形式存在的。二、序列測(cè)定方法（一）小片段重疊法（二）凝膠直讀法1.酶法（1）加減法（Sanger,1975）（2）末端終止法(雙脫氧法/間接拷貝法)（Sanger,1977）2.化學(xué)法（Maxam/Gilbert,1977）適用于DNA短片段的測(cè)定雙脫氧核苷三磷酸酶、4種dNTPddATP5'TACGATCGTA3'5'TACGA3'5'TA3'ddGTP5'TACGATCGTATG3'5'TACGATCG3'5'TACG3'5'TACGATCGTAT3'5'TACGATCGT3'5'TACGAT3'5'T3'5'TACGATC3'5'TAC3'ddTTPddCTPAGTCGTATGCTAGCAT3'ATGCTAGCATAC5'5‘3'模板引物

三、一級(jí)結(jié)構(gòu)的重要性

攜帶遺傳信息決定DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)決定DNA的空間結(jié)構(gòu)a.反平行雙鏈右手螺旋b.糖－Pi在螺旋線上c.堿基伸向內(nèi)部其平面垂直于軸d.A=T、G=Ce.直徑=2nm，一圈上升10對(duì)核苷酸，螺距為3.4nmf.大溝（majorgroove）、小溝（minorgroove）Watson—Crick雙螺旋結(jié)構(gòu)模型特點(diǎn)：（二）A-DNA構(gòu)象為相對(duì)濕度改變（75%以下）或由鈉鹽變?yōu)殁淃}、銫鹽，DNA的結(jié)構(gòu)可成為A構(gòu)象。它是B-DNA螺旋擰得更緊的狀態(tài)。DNA-RNA雜交分子、RNA-RNA雙鏈分子均采取A構(gòu)象。A-DNA、B-DNA和Z-DNA的一些結(jié)構(gòu)特征

A-DNAB-DNAZ-DNA螺旋方向每圈螺旋的堿基數(shù)每一堿基對(duì)的上升距離螺距堿基對(duì)的傾斜度每一堿基對(duì)旋轉(zhuǎn)的角度螺旋直徑大溝小溝右手性110.255nm2.8nm20o33o

2.3nm窄而極深極寬而淺右手性10.40.34nm3.4nm6o36o

2.0nm寬而深窄而深左手性120.37nm4.5nm7o-60o

1.8nm平展極窄而深B-DNA是活性最高的DNA構(gòu)象，B-DNA變成A-DNA后，仍有活性，但若局部變構(gòu)為Z-DNA后，活性明顯降低。

二、決定雙螺旋結(jié)構(gòu)狀態(tài)的因素（一）氫鍵1.堿基的氫供體氨基、羥基2.堿基的氫受體酮基、亞氨基3.G-C對(duì)及A-T對(duì)之間的氫鍵:（在一定范圍內(nèi)DNA的穩(wěn)定性與G-C百分含量成正比）（二）堿基堆積力1，堿基堆積力同一條鏈中的相鄰堿基之間的非特異性作用力2，堿基堆積力的來源疏水作用力累積的VanderWaal的作用力3，堿基堆積作用的證據(jù)單鏈多核苷酸傾向于堿基平行排列的規(guī)則螺線結(jié)構(gòu)破壞疏水作用和雙鏈的氫鍵可降低DNA的穩(wěn)定性Pu---PyPy---Pu堿基堆積形成積壓Pu的雙環(huán)結(jié)構(gòu)，其長(zhǎng)度接近或超過螺旋軸心每對(duì)Bp又以propellertwist形式存在相臨兩個(gè)Bp間的Pu發(fā)生過份的擠壓導(dǎo)致Bp的抵牾DNA分子的精細(xì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，產(chǎn)生構(gòu)象的不安定狀態(tài)Pu的抵牾發(fā)生在小溝一側(cè)Pu的抵牾發(fā)生在大溝一側(cè)2倍抵牾力TA不穩(wěn)定GC穩(wěn)定（三）帶電荷的磷酸基的靜電斥力磷酸集團(tuán)的負(fù)電對(duì)DNA雙鏈的穩(wěn)定性起負(fù)作用。陽離子可對(duì)之產(chǎn)生屏蔽。DNA溶液的離子濃度越低，DNA越不穩(wěn)定。（四）堿基分子內(nèi)能堿基內(nèi)能越高，氫鍵和堿基堆積力越容易被破壞，DNA雙鏈越不穩(wěn)定第四節(jié)DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)

形成超螺旋的原因和條件：原因：因某種原因引入了額外的螺旋。條件：a,DNA雙螺旋閉合或被蛋白結(jié)合，末端不能自由轉(zhuǎn)動(dòng)；b,DNA雙鏈上無斷裂。一、超螺旋結(jié)構(gòu)DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)是指DNA雙螺旋的進(jìn)一步扭曲盤繞所形成的構(gòu)象，主要表現(xiàn)為超螺旋結(jié)構(gòu)。松弛態(tài)（relaxedstate）:DNA中心軸與平面平行即不扭曲的狀態(tài)。超螺旋：雙螺旋結(jié)構(gòu)的DNA再次扭曲形成的螺旋結(jié)構(gòu)。

a.右旋超螺旋——負(fù)超螺旋（Negativesupercoil）b.左旋超螺旋——正超螺旋（positivesupercoil）a.b.

環(huán)狀DNA分子的拓?fù)鋵W(xué)性質(zhì)L=T+WW=L-T

L：連環(huán)數(shù)（Linkingnumber）指一個(gè)封閉環(huán)狀DNA雙螺旋分子中的兩條鏈彼此盤繞的次數(shù)；

T：雙螺旋中轉(zhuǎn)數(shù)（Twistingnumber，也叫螺圈數(shù)）是雙螺旋本身所有的性質(zhì)。其數(shù)量等于堿基對(duì)總數(shù)除以每一圈的堿基對(duì)數(shù)（如：5200÷10.4=500）；

W：超螺旋數(shù)（Writhingnumber）。

DNA的拓?fù)洚悩?gòu)體：松弛型：W=0，L=T；負(fù)超螺旋：L<T；正超螺旋：L>T

例：動(dòng)物病毒SV40的DNA（環(huán)狀，含5200bp），在無超螺旋時(shí)，L=500，T=500，W=0；但實(shí)際上從細(xì)胞中分離出的SV40DNA含有25個(gè)負(fù)超螺旋，所以它的L=475，因此，

L對(duì)一個(gè)DNA分子來講是一個(gè)拓?fù)鋵W(xué)特性，在不發(fā)生鏈的斷裂時(shí)它是一個(gè)常數(shù)。（475=500-25）L=T+WW=L-T比連環(huán)差（Specificlinkingdifference)（以表示）用來表示超螺旋的程度；當(dāng)初級(jí)螺旋數(shù)不變時(shí)，代表超螺旋密度。公式：=（L-L0）/L0（L0：表示松弛環(huán)型DNA的連環(huán)數(shù)）如一超螺旋DNA的L=23，L0=25，則=-0.08，大多數(shù)天然存在的DNA分子超螺旋密度在-0.03~-0.09之間。超螺旋結(jié)構(gòu)存在的意義密度大，體積小，在細(xì)胞中所占體積較為經(jīng)濟(jì)；超螺旋結(jié)構(gòu)能影響雙螺旋的解鏈程度，因而影響DNA分子與其它分子，如酶、蛋白質(zhì)等分子的相互作用，參與DNA復(fù)制、重組、轉(zhuǎn)錄等重要功能。DNA的拓?fù)洚悩?gòu)體可用凝膠電泳分開。影響DNA高級(jí)結(jié)構(gòu)的酶L值的改變需要至少一條DNA鏈斷裂一次。斷裂造成的DNA自由末段的一斷可繞著另一端旋轉(zhuǎn)，隨后被重新連接，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶通過催化此類反應(yīng)將DNA從一種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變成另一種。l

拓?fù)洚悩?gòu)酶

(topoisomeraseI,II)

參與構(gòu)型的改變功能比較拓?fù)涿腹δ鼙容^TopI對(duì)負(fù)超螺旋處的單鏈DNA具有極強(qiáng)的親合力TopII消除負(fù)超螺旋松弛B-DNA引入負(fù)超螺旋緊縮B-DNA1.I型DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶底物：DNA單鏈ATP：不需酶活性：DNA內(nèi)切酶和連接酶活性代表：E.Coli的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I：可催化負(fù)超螺旋DNA轉(zhuǎn)化為松弛環(huán)型。鼠DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I：對(duì)正、負(fù)超螺旋有相同的松弛能力。原理：E.coli拓?fù)洚悩?gòu)酶識(shí)別部分解螺旋的DNA分子，與DNA單鏈部分結(jié)合后，切斷一條鏈，并以其酪氨酸殘基與DNA的5’磷酸相連。磷酸二酯鍵從DNA轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)上。酶將完整的DNA鏈拉過缺口后（⊿L=+1），重新連接原先單鏈上磷酸二酯鍵。上述過程除了改變DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)外，還可使單鏈環(huán)狀分子形成三葉結(jié)構(gòu)，以及使兩個(gè)單鏈環(huán)狀分子成為環(huán)連體分子。2.II型DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶底物DNA雙鏈ATP需要酶活性DNA內(nèi)切酶和連接酶活性代表E.Coli旋轉(zhuǎn)酶（DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II），可引入負(fù)超螺旋。無ATP時(shí)，此酶只能緩慢地松弛負(fù)超螺旋。E.Coli的旋轉(zhuǎn)酶還具有形成和拆開雙鏈DNA環(huán)連體和成結(jié)分子的能力。此類酶無堿基序列特異性。3.DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶催化反應(yīng)的實(shí)質(zhì)：其本質(zhì)是先切斷DNA的磷酸二酯鍵，改變DNA的鏈環(huán)數(shù)后再連接，兼具DNA內(nèi)切酶和DNA連接酶的功能。然而這些酶并不能連接事先已經(jīng)存在的斷裂DNA，即其斷裂及連接反應(yīng)是相互偶聯(lián)的。二、生物體內(nèi)的超螺旋1.環(huán)狀DNA的超螺旋生物體如某些小病毒、細(xì)菌質(zhì)粒、真核線粒體、葉綠體、噬菌體PM2、以及某些細(xì)菌的DNA為雙鏈環(huán)狀，在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步扭曲形成超螺旋的三級(jí)結(jié)構(gòu)。2.染色體DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)

為DNA雙螺旋盤繞在組蛋白上的超螺旋結(jié)構(gòu)。

H1DNA繞聚合體1.75圈，左旋H2A、H2B、H3、H4各2分子組成聚合體H1結(jié)合在核小體間的DNA上組蛋白三、三股螺旋DNA

(TribleHelixDNA,T.SDNA)

※T.SDNA的發(fā)現(xiàn)與證實(shí)

l

1953年以前Pauling(Chemist)提出T.SDNA存在的可能性

l

1953年Watson&CrickD.SDNAmodel證明沿大溝存在多余的氫鍵給體與受體潛在的專一與DNA(蛋白質(zhì))

結(jié)合的能力形成T.SDNA可能性

l

1957年Davis,Felsenfeld,Rich發(fā)現(xiàn)poly(U)+poly(U)+poly(A)T.SRNA

T.SDNA的概念l

1966年Miller&Sobell

實(shí)現(xiàn)RNA+D.SDNATriblepolyNt

asRepressor關(guān)閉基因

但由于D.SDNA的提出而被忽視但因證明LacI產(chǎn)物為Repressor而被忽視

●

1975年P(guān)erlgut人工合成T.SDNA并證明其Tm值,沉降系數(shù)(S)

l

1987年Mirkin.S.M

Nature330(495)證明plasmidDNA在pH=4.3的溶液中,有T.SDNA的存在

●

1987年Dervan.Moser

Science238(645)合成S.SDNA+D.SDNA→T.SDNA

實(shí)現(xiàn)DNA的定點(diǎn)切割研究X-rayphotograph

核磁共振→結(jié)構(gòu)功能

繼Davis（1957）后30年第一次證明T.SDNA在生物體內(nèi)的存在

※T.S.DNA的類型

PolyT/A

TTTTTTTTTTT

AAAAAAAAAA

PolyT/A

TTTTTTTTTTT

AAAAAAAAAATTTTTTTTTTTAAAAAAAAAATTTTTTTTTTTAAAAAAAAAA●1.D.S.DNA+D.S.DNA

T.S.

DNA+

S.S.DNAHomologouspalindromicsequenceinaD.S.DNANoduleDNAorHingedDNA三鏈螺旋雙鏈螺旋HingedDNAHingedDNA

l

2.

S.S.DNA+D.S.DNAT.S.DNA☆

PU

+PU/PY(偏堿性介質(zhì)中穩(wěn)定)☆

PY

+PU/PY(偏酸性介質(zhì)中穩(wěn)定)常見類型

第三條鏈位于B-DNA的

Majorgroove中與D.S.DNA一起旋轉(zhuǎn)T.S.DNA的連接鍵

WatsonbondingA＝TG≡C(D.S.DNA)H+HoogsteenbondingG＝C+(pH小于7)第三鏈質(zhì)子化第二鏈的pu6‘,7’與第三鏈的堿基形成H鍵

三股螺旋DNA形成的條件及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)第三條單鏈DNA分子位于B-DNA大溝內(nèi)與B-DNA以

Hoogsteen

鍵連接TriblehelixMajorgroovePy:Pu:Py3ed

在Py/Pu:

Py

結(jié)構(gòu)中AT,GC+兩氫鍵配對(duì)C質(zhì)子化鏡相結(jié)構(gòu)必需條件T.S.DNA可能的功能

a)T.S.DNA可阻止調(diào)節(jié)蛋白與DNA結(jié)合,關(guān)閉基因轉(zhuǎn)錄過程

b)T.S.DNA與基因重組,交換有關(guān)

加入第三條S.S.DNA作為分子剪刀(molecularscissors),

定點(diǎn)切割DNA分子

d)加入反義的第三條鏈(anti-sencepolydNt)終止基因的表達(dá)

四、四股螺旋DNA

(tetraplexDNA,TetrableHelixDNA)

發(fā)現(xiàn)

均有形成四股螺旋DNA的可能

5’---TTAGGGTTAGGGTTAGGG-3’3’---AATCCCAATCCC-5’染色體端粒高度重復(fù)的DNA序列著絲點(diǎn)附近的高度重復(fù)序列

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)LinkedbyHoogsteenBonding7GGGG67677662×poly(T4G4)2×poly(G4C4)

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)5‘3‘TTTGGGGGGGGGGGGGGGGGGTTTTTTGGGGTTTGGGGTTTGGGGTTT真核生物染色體端粒DNA結(jié)構(gòu)可能的功能

A穩(wěn)定真核生物染色體結(jié)構(gòu)

B保證DNA末端準(zhǔn)確復(fù)制

C與DNA分子的組裝有關(guān)

D與染色體的meiosis&mitosis有關(guān)

HoogsteenBonding

5’-----TTAGGGTTAGGGTTAGGGT

3’-----AATCCCAATCCC

GGG

TA第五節(jié)DNA的變性、復(fù)性、

雜交和Cot曲線一、DNA的變性DNA變性（熔解）：DNA被加熱或某些試劑的作用下，配對(duì)堿基之間氫鍵和相鄰堿基之間的堆積力受到破壞，逐步變?yōu)榻朴跓o規(guī)則的線團(tuán)構(gòu)像的過程。（一）單、雙鏈DNA的紫外光吸收雙鏈DNA：A260=1.0時(shí)，50μg/ml單鏈DNA：A260=1.0時(shí)，33μg/ml（單鏈RNA：A260=1.0時(shí)，40μg/ml）●

D.S.DNAS.S.DNA

(加溫,極端pH,尿素,酰胺)

（二）DNA的熔解曲線Tm值：緩慢而均勻地升高DNA溶液的溫度，當(dāng)A260增加到最大增值的一半時(shí)的溫度，叫做DNA的熔解溫度（Meltingtemperature）或熔點(diǎn)，用Tm表示。（一般在70-85℃）DNA變性不僅受外部各種因素的影響，而且取決于DNA分子本身的穩(wěn)定性，即Tm值直接與DNA的性質(zhì)相關(guān)。溫度單鏈(%)10050Tm溫度單鏈(%)10050TmTmTmPolyA-TDNApolyG-C1.1851.01.37OD℃=OD增加值的中點(diǎn)溫度(一般為85-95℃)

Tm

(meltingtemperature)

=midpointofthetemperaturerangeoverwhichDNAisdenatured不同DNA的Tm值對(duì)G-C含量作圖能得到一條直線，因此測(cè)定Tm值可以推算出DNA堿基分子組成。（三）影響Tm值的因素

☆在A,T,C,G隨機(jī)分布的情況下☆GC%含量相同的情況下GC%愈高→Tm值愈大GC%愈低→Tm值愈小

AT形成變性核心，變性加快，Tm值小堿基排列對(duì)Tm值具有明顯影響（除變性核心外）（堿基堆積力的差異）

☆大片段D.S.DNA分子之間比較片段長(zhǎng)短對(duì)Tm值的影響較小,與組成和排列相關(guān)☆小于100bp的D.SDNA分子比較片段愈短，變性愈快，Tm值愈小☆變性液中含有尿素，酰胺等尿素，酰胺與堿基間形成氫鍵改變堿基對(duì)間的氫鍵Tm值可降至40℃左右

☆鹽濃度的影響

單鏈DNA主鏈的磷酸基團(tuán)負(fù)電荷的靜電斥力兩條單鏈DNA的分離Na+在磷酸基團(tuán)周圍形成的電子云對(duì)靜電斥力產(chǎn)生屏蔽作用減弱靜電斥力Tm↑當(dāng)Na+濃度低屏蔽作用小斥力加強(qiáng)Tm↓靜電斥力

熵值（△S）TmODA260

0.01M0.1M1.0MNa+當(dāng)Na+濃度高

屏蔽作用大斥力減弱熵值(△S)上升堿基溶解性降低疏水作用力增加二、復(fù)性DNA復(fù)性：變性DNA在一定條件下恢復(fù)天然DNA結(jié)構(gòu)的過程。（一）復(fù)性的條件1，消除磷酸基的靜電斥力；2，破壞連內(nèi)氫鍵（二）復(fù)性的機(jī)制1，隨機(jī)碰撞取決于DNA濃度、溶液溫度、離子強(qiáng)度等2，成核作用（nucleation)3，拉拉鏈作用（zippering）3’-ATCTATGCTGTCAT-5’5‘-TAGATACGACAGTA-3’5‘-TAGATACGACAGTA-3’3’-ATCTATGCTGTCAT-5’3’-ATATATATATAT-5’5‘-TATATATATATA-3’3’-ATATATATATAT-5’5‘-TATATATATATA-3’5‘-TATATATATATA-3’3’-ATATATATATAT-5’3’-ATATATATATAT-5’5‘-TATATATATATA-3’影響DNA復(fù)性過程的因素：

陽離子濃度0.18~0.2MNa+可消除polydNt間的靜電斥力復(fù)性反應(yīng)的溫度Tm-25℃(60-65℃)以消除S.S.DNA分子內(nèi)的部分二級(jí)結(jié)構(gòu)

S.S.DNA分子的長(zhǎng)度S.S.DNA愈長(zhǎng)S.S.DNA愈短→分子擴(kuò)散愈慢→復(fù)性愈慢→分子擴(kuò)散愈快→復(fù)性愈快影響DNA復(fù)性過程的因素：

DNA分子中,dNt

的排列狀況(隨機(jī)排列,重復(fù)排列)

S.S,DNA的初始濃度C0三、Cot曲線在一定條件，復(fù)性速度變化可用Cot值衡量。Co表示變性DNA的最初濃度（bp，mol/L），T為復(fù)性時(shí)間（s），即Cot值為變性DNA的最初濃度與復(fù)性時(shí)間的乘積（mol·s/L）。病毒和原核生物基因組的Cot曲線是單一的s形曲線，真核生物基因組的Cot曲線是多s形Cot曲線，重復(fù)頻率高的序列復(fù)性速度快，重復(fù)頻率低的則慢。135001.7×1054.2×106bpK.C.2×10-68×10-23×10-19Cot1/2不同物種核酸的Cot曲線原核生物DNA的復(fù)性動(dòng)力學(xué)原核生物Cot曲線形狀：不同生物曲線形狀相似，都是單一的S形；原核生物Cot曲線：跨度一般只有兩個(gè)數(shù)量級(jí)；原核生物Cot曲線位置：基因組越大越靠右。Cot（mol·s/L）真核生物Cot曲線特點(diǎn)：階梯狀，跨度7-8個(gè)數(shù)量級(jí)。真核生物Cot曲線的組成：快復(fù)性組分/中間復(fù)性組分/慢復(fù)性組分。真核生物DNA復(fù)性動(dòng)力學(xué)

E.ColiDNACt/C0

C0

t0.036300040%60%CalfthymusDNA10四、雜交重要的雜交技術(shù)：SouthernBlottingNorthernBlotting一、RNA的結(jié)構(gòu)特征RNA的堿基組成與一級(jí)結(jié)構(gòu)（1）堿基組成：A、G、C、U（2）一級(jí)結(jié)構(gòu)：基本組成單位——核苷酸（AMP、GMP、CMP、UMP）核苷酸間的連接鍵——3‘—5’磷酸二酯鍵存在狀態(tài)——單鏈、只有少數(shù)為雙鏈（暗色蛾CPVRNA5150bp）

第六節(jié)RNA的結(jié)構(gòu)雙螺旋、內(nèi)部環(huán)、單堿基、突起和突環(huán)、發(fā)夾環(huán)、多分支環(huán)或結(jié)合環(huán)、假結(jié)、單鏈區(qū)二、RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)元件：多分支環(huán)突環(huán)單堿基突起發(fā)夾結(jié)構(gòu)（莖環(huán)結(jié)構(gòu)）內(nèi)部環(huán)雙螺旋假結(jié)單鏈區(qū)三、mRNA結(jié)構(gòu)

1.原核生物mRNA為多順反子mRNA（polycistron），即一條mRNA可編碼幾條肽鏈。無帽子結(jié)構(gòu)和尾巴，不含稀有堿基，半壽期為1~3min，二級(jí)結(jié)構(gòu)有豐富的自身回折產(chǎn)生的雙鏈區(qū).

2.真核生物mRNA為單順反子