臨床細菌學檢驗的質量控制電子教案

臨床(línchuánɡ)細菌學檢驗的質量控制第一頁，共55頁。概念(gàiniàn)質量控制（Qualitycontrol）是臨床微生物學實驗室為了保證(bǎozhèng)檢驗結果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系第二頁，共55頁。目的(mùdì)臨床微生物學的質量控制是保證細菌(xìjūn)的直接涂片、培養(yǎng)、鑒定、藥敏試驗及血清學試驗等的準確性，避免因操作變化導致檢驗結果錯誤，造成誤診第三頁，共55頁。內容(nèiróng)室內質量控制實驗室內部質量保證的核心和基礎室間質量控制評價外部(wàibù)組織或機構質量評價第四頁，共55頁。室內質量(zhìliàng)控制對細菌檢驗人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測(jiāncè)培養(yǎng)基的質量控制試劑、染色液及抗血清的質控臨床標本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存第五頁，共55頁。一、對細菌檢驗人員(rényuán)的要求高度的主觀判斷力

個人的技能、經驗細菌學的專業(yè)(zhuānyè)水平培訓班實驗室進修(jìnxiū)學術交流專業(yè)期刊第六頁，共55頁。室內(shìnèi)質量控制對細菌檢驗(jiǎnyàn)人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測培養(yǎng)基的質量控制試劑、染色液及抗血清的質控臨床標本檢驗(jiǎnyàn)過程的質量控制標準菌株的來源和保存第七頁，共55頁。二、操作手冊各級人員的職責和權限實驗室安全措施標本采集和處理指南細菌檢驗項目培養(yǎng)基和試劑的配制方法室內(shìnèi)和室間質量控制參考數(shù)據(jù)第八頁，共55頁。二、操作手冊參考書：診斷細菌學實用臨床微生物診斷學臨床微生物學診斷與圖解(tújiě)全國臨床檢驗操作規(guī)程臨床微生物學和微生物學檢驗ManualofClinicalMicrobiology第九頁，共55頁。室內(shìnèi)質量控制對細菌檢驗人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測培養(yǎng)基的質量控制試劑、染色(rǎnsè)液及抗血清的質控臨床標本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存第十頁，共55頁。三、儀器設備的功能(gōngnéng)監(jiān)測高壓滅菌器：定期監(jiān)測（每月一次）生物(shēngwù)指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌化學指示劑：變色的指示帶培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱：每日早、晚兩次溫度觀測，繪制溫度曲線圖第十一頁，共55頁。三、儀器設備的功能(gōngnéng)監(jiān)測厭氧培養(yǎng)(péiyǎng)裝置：化學標記：美藍生物學指標：銅綠假單胞菌CO2培養(yǎng)(péiyǎng)箱：每天檢查箱內的CO2含量第十二頁，共55頁。三、儀器設備的功能(gōngnéng)監(jiān)測生物安全柜：定期更換濾網，紫外線每3月檢查1次細菌(xìjūn)培養(yǎng)儀：每批培養(yǎng)瓶進行少量生長試驗有效期內使用微生物鑒定儀及時更新軟件每批號鑒定卡用標準菌株測定第十三頁，共55頁。三、儀器設備的功能(gōngnéng)監(jiān)測

表1儀器設備的質量控制(kòngzhì)標準設備

控制標準

允許范圍高壓滅菌器121℃

≥121℃培養(yǎng)箱

35℃

±1℃水浴箱

37℃

±0.5℃冰箱

4℃

±2℃低溫冰箱-20℃

±5℃CO2培養(yǎng)箱5%~10%

<10%第十四頁，共55頁。室內(shìnèi)質量控制對細菌檢驗人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測培養(yǎng)基的質量控制(kòngzhì)試劑、染色液及抗血清的質控臨床標本檢驗過程的質量控制(kòngzhì)標準菌株的來源和保存第十五頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制(1)配制記錄：培養(yǎng)基的制作過程(guòchéng)必須統(tǒng)一無論是培養(yǎng)基或添加劑的劑量、pH值、高溫滅菌的時間或溫度，都需遵照規(guī)定培養(yǎng)基名稱、本批配制量、配方、配制日期和配制人員姓名都必須詳細記錄第十六頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制(2)培養(yǎng)基外觀的檢查：新配或新購入的培養(yǎng)基必須先以肉眼檢查其顏色(yánsè)與透明度，培養(yǎng)基應澄清，無渾濁培養(yǎng)基的色澤不正常應測其pH值，不得超過所預期值的±0.2平板培養(yǎng)基最易脫水，應放在嚴密的有蓋容器內或塑料袋內。這樣平板內培養(yǎng)基可保存兩周左右，試管內培養(yǎng)基可保存1-2個月第十七頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制(3)無菌試驗：每批配好的培養(yǎng)基須進行無菌試驗隨機選取5%~10%的量，如果配制大量的培養(yǎng)基，則任意選取10個平板或管裝培養(yǎng)基，35℃溫度下隔夜(gé〃yè)培養(yǎng)，證明無菌生長為合格第十八頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制(4)培養(yǎng)基的量：平板培養(yǎng)基的厚度(hòudù)一般為3mm(90mm平皿+15~20ml培養(yǎng)基）藥敏試驗用為4mm(90mm平皿+25ml培養(yǎng)基）斜面不超過試管的2/3第十九頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制(5)培養(yǎng)基的有效性試驗：每一批新制或新購的培養(yǎng)基，使用前均須取已知性質的標準菌株試驗是否能支持，區(qū)分或選擇某類細菌的生長培養(yǎng)基的試驗結果需要加以記錄，項目包括試驗日期、試驗結果以及實驗者的簽名等。且此記錄本需便于檢驗室人員(rényuán)的查看，以便能隨時解決任何發(fā)生的難題第二十頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制表2常用(chánɡyònɡ)培養(yǎng)基的質量控制培養(yǎng)基質控菌種生長情況結果血瓊脂

巧克力瓊脂營養(yǎng)瓊脂麥康凱瓊脂

中國藍瓊脂

SS瓊脂

沙保羅瓊脂

化膿鏈球菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌福氏志賀菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌福氏志賀菌金黃色葡萄球菌產氣腸桿菌鼠傷寒沙門菌大腸埃希菌白色假絲酵母菌++++++-++-++-+明顯乙型溶血環(huán)甲型溶血環(huán)24h生長生長分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不生長分解乳糖，菌落藍色不分解乳糖，菌落無色不生長粉紅色菌落無色菌落，中心黑色

第二十一頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制表2常用培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制生長生長，溶血生長部分抑制生長，黃色菌落生長，藍綠色菌落大量生長抑制生長++++++-脆弱擬桿菌產氣莢膜梭菌菌空腸彎曲菌大腸埃希菌霍亂弧菌副溶血弧菌霍亂弧菌大腸埃希菌厭氧血平板

彎曲菌瓊脂TCBS瓊脂堿性蛋白胨水

結果生長情況質控菌種培養(yǎng)基第二十二頁，共55頁。四、培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制(6)培養(yǎng)基的有效期：培養(yǎng)基有效期的長短應參考診斷細菌學書籍若購買現(xiàn)用的培養(yǎng)基，均應注意有效期的標示是否正確，如血平板的有效期為3星期(xīngqī)，厭氧菌分離培養(yǎng)基為1-2星期(xīngqī)等第二十三頁，共55頁。室內(shìnèi)質量控制對細菌檢驗(jiǎnyàn)人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測培養(yǎng)基的質量控制試劑、染色液及抗血清的質控臨床標本檢驗(jiǎnyàn)過程的質量控制標準菌株的來源和保存第二十四頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控染色液的質量控制染色液要標明配制或購入日期，必須選用適當?shù)臉藴示曜麝栃约瓣幮詫φ?，來鑒定(jiàndìng)染色液的性能革蘭染色用金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌制備濃菌懸液，經高壓滅菌后冰箱保存，作為革蘭染色的質量控制，每次質控與標本同步進行第二十五頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控各種染色液的監(jiān)控菌株染色液陽性對照菌陰性對照菌監(jiān)控頻度革蘭染色液金黃色葡萄球菌(pútáoqiújūn)大腸埃希菌每天抗酸染色液結核分枝桿菌每次異染顆粒染色液白喉棒狀桿菌每次莢膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通變形桿菌福氏志賀菌每次第二十六頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控試劑的質量控制各類試劑，在配制或購入后均應進行“有效”試驗，用已知陽性及陰性(yīnxìng)菌株進行試驗試劑須根據(jù)標示的配制要領或制造者的指示作適當?shù)膬Υ鎸^穩(wěn)定的試劑如靛基質試劑應在配制時及每周予以檢測核對，凡不穩(wěn)定的試劑每天使用時均應檢測，合格后才能使用第二十七頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控表3常用試劑的陽性、陰性(yīnxìng)對照菌株常用試劑陽性對照菌株陰性對照菌株凝固酶試劑金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌觸酶試驗用試劑化膿鏈球菌V-P試驗用試劑陰溝腸桿菌大腸埃希菌大腸埃希菌陰溝腸桿菌氧化酶試劑銅綠假單胞菌大腸埃希菌

靛基質(jīzhì)試劑金黃色葡萄球菌第二十八頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控診斷血清的質量控制購入的沙門菌屬、志賀菌屬、致病性大腸桿菌的診斷血清必須立即記錄其購入日期、觀察其透明度、色彩有無變化和是否有沉淀物，然后(ránhòu)置4℃冰箱保存使用前應注意檢查診斷血清的批號、有效期，如發(fā)現(xiàn)渾濁或有絮狀沉淀物時，很可能系污染所致，不能再繼續(xù)使用第二十九頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控診斷血清的質量控制使用前還應以陽性(yángxìng)及陰性菌株進行檢測，觀察其效價及特異性不得將診斷血清置室溫保存,各種診斷血清均應置冰箱中4℃保存每月用標準菌株進行一次測定

第三十頁，共55頁。五、試劑(shìjì)、染色液及抗血清的質控

臨床微生物實驗室診斷(zhěnduàn)血清質控記錄表名稱檢測頻率質控物質控鑒定記錄日期操作者沙門菌屬診斷血清每月傷寒沙門菌大腸埃希菌（ATCC25922）鼠傷寒沙門菌無菌鹽水

傷寒沙門菌鼠傷寒沙門菌ATCC25922無菌鹽水

A-F多價（）（）（）（）

Vi（）（）（）（）

Hd（）（）（）（）

Hi（）（）（）（）

O4（）（）（）（）

O9（）（）（）（）

志賀菌屬診斷血清

每月福氏志賀菌宋內志賀菌大腸埃希菌（ATCC25922）無菌鹽水

福氏志賀菌宋內志賀菌ATCC25922無菌鹽水

多價血清（）（）（）（）福氏志賀菌血清（）（）（）（）宋內志賀菌血清（）（）（）（）

致病性大腸埃希菌診斷血清每月EPECO126B16大腸埃希菌（ATCC25922）

EPECO126B16ATCC25922OK1（）（）OK2（）（）OK3（）（）

第三十一頁，共55頁。室內(shìnèi)質量控制對細菌檢驗人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測培養(yǎng)基的質量(zhìliàng)控制試劑、染色液及抗血清的質控臨床標本檢驗過程的質量(zhìliàng)控制標準菌株的來源和保存第三十二頁，共55頁。六、臨床(línchuánɡ)標本檢驗過程的質量控制培養(yǎng)前選擇合理的檢驗(jiǎnyàn)項目標本采集、運送（早期采集、無菌采集、即時送檢）標本的合理保存送檢標本的登記：三查、三對不合格標本登記：不合格原因，注明理由退回第三十三頁，共55頁。培養(yǎng)中：直接診斷:直接涂片非常必要和重要分離培養(yǎng)：使用多種適合(shìhé)于可疑病原菌生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件鑒定：按鑒定程序執(zhí)行，正確引導下一步鑒定六、臨床標本檢驗過程的質量(zhìliàng)控制第三十四頁，共55頁。培養(yǎng)后：結果復核：是否(shìfǒu)為病原菌報告單復核臨床聯(lián)系陽性結果及時通知臨床特別結果提示（ESBL；MRS）六、臨床(línchuánɡ)標本檢驗過程的質量控制第三十五頁，共55頁。糞便標本細菌培養(yǎng)的處理原則（1）標本采集：自然排便取膿血(nónɡxuè)、粘液部分糞便2~3g，液體糞便取絮狀物2~3ml，盛于滅菌容器內，立即送檢，如排不出糞便也可用肛拭送檢六、臨床標本檢驗(jiǎnyàn)過程的質量控制第三十六頁，共55頁。糞便標本細菌培養(yǎng)的處理原則(yuánzé)（2）直接涂片：革蘭染色鏡檢，用于霍亂弧菌形態(tài)學檢查懸滴法：米泔水樣便檢查流星樣運動或制動試驗直接涂片檢查真菌孢子和假菌絲

六、臨床標本(biāoběn)檢驗過程的質量控制第三十七頁，共55頁。糞便標本細菌培養(yǎng)的處理原則（3）糞便培養(yǎng)接種培養(yǎng)基：沙門—志賀菌培養(yǎng)：接種于SS和麥康凱平板霍亂弧菌培養(yǎng)：接種于堿性蛋白胨水，轉種慶大平

板或TCBS瓊脂平板致病性大腸(dàcháng)埃希菌培養(yǎng)：接種于伊紅美藍或麥康凱平板其他病原菌培養(yǎng)：視需要接種不同培養(yǎng)基

六、臨床標本(biāoběn)檢驗過程的質量控制第三十八頁，共55頁。糞便標本細菌培養(yǎng)的處理原則（3）報告方式：檢出××菌（腹瀉病原菌及藥敏結果(jiēguǒ)）菌群失調（腸道正常菌群消失）：提示抗生素使用過量未檢出沙門志賀菌

六、臨床標本檢驗過程的質量(zhìliàng)控制第三十九頁，共55頁。湖北醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科室內質控失控報告單編號：□□□□日期：年月日項目：藥敏紙片生產單位(dānwèi)：儀器型號：質控菌株：ATCC25923ATCC25922ATCC27853失控原因：1）試劑□2）鑒定卡□3）藥敏紙片□4）藥敏卡□5）其它（請述）：失控處理：失控前測定數(shù)據(jù)處理后測定數(shù)據(jù)12345失控判斷操作者簽名：質量控制負責人簽名：

六、臨床(línchuánɡ)標本檢驗過程的質量控制第四十頁，共55頁。室內質量(zhìliàng)控制對細菌檢驗人員的要求操作手冊儀器設備的功能監(jiān)測培養(yǎng)基的質量控制試劑、染色液及抗血清的質控臨床標本(biāoběn)檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存第四十一頁，共55頁。七、標準菌株的來源(láiyuán)和保存標準菌株要求必須是形態(tài)、染色反應、生理生化及血清學特性典型而穩(wěn)定的菌株實驗結果重復性好，極少發(fā)生變異國際(guójì)社會認可來源于專門機構第四十二頁，共55頁。七、標準菌株的來源(láiyuán)和保存標準菌株來源(láiyuán)美國典型菌種保藏中心ATCC（AmericanTypeCultureCollection）衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心各級臨床檢驗中心第四十三頁，共55頁。七、標準(biāozhǔn)菌株的來源和保存標準菌株的保存方法冷凍干燥法：最理想的保存方法，不改變菌種性狀，保存時間長手續(xù)(shǒuxù)繁瑣，需專門的冷凍干燥設備菌種保存中心均采用此法第四十四頁，共55頁。七、標準菌株的來源(láiyuán)和保存標準菌株的保存方法冰凍保存法：此法較簡單，將細菌(xìjūn)混懸于脫纖維羊血或脫脂牛奶中，置液氮或-20℃冰箱保存但細菌(xìjūn)經多次轉種，性狀可能發(fā)生變異第四十五頁，共55頁。七、標準菌株的來源(láiyuán)和保存標準菌株的保存方法培養(yǎng)基保存法：最簡易方便的方法，適用于大多數(shù)實驗室（1）普通(pǔtōng)瓊脂斜面保存法：適于一般細菌的保存，置4℃冰箱可保存1個月第四十六頁，共55頁。七、標準菌株的來源(láiyuán)和保存標準菌株的保存方法培養(yǎng)基保存法：最簡易(jiǎnyì)方便的方法，適用于大多數(shù)實驗室（2）血瓊脂斜面保存法：適于鏈球菌，可半月轉種一次。腦膜炎奈瑟氏菌應用巧克力斜面，若加液體石蠟，可延長保存期。第四十七頁，共55頁。七、標準菌株的來源(láiyuán)和保存標準菌株的保存方法培養(yǎng)基保存法：（3）半固體穿刺法：穿刺培養(yǎng)基并加液體石蠟，置4℃冰箱(bīngxiāng)可保存