革蘭陰性球菌課件

第九章革蘭陰性球菌奈瑟菌屬（Neisseria）奈瑟氏菌屬是一群革蘭陰性球菌，常成雙排列，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，有菌毛。人類為奈瑟氏菌屬的自然宿主，在奈瑟菌屬10個(gè)種中，對(duì)人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，兩種細(xì)菌DNA序列有70％的同源性，其余8個(gè)種視為條件致病菌。主要區(qū)別點(diǎn)為，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系統(tǒng)疾病；而腦膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。腦膜炎奈瑟菌有多糖成分。第一節(jié)腦膜炎奈瑟菌N.meningitismeningococcus1.1生物學(xué)性狀——形態(tài)腦膜炎奈瑟菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭染色）腦膜炎奈瑟菌為革蘭染色陰性，常呈雙排列，直徑約為0.6-0.8μm的雙球菌。單個(gè)菌體呈腎形或豆形。成雙排列時(shí)，兩個(gè)凹面相對(duì)。無(wú)鞭毛，不形成芽胞。新分離菌株大多有莢膜和菌毛。在腦脊液(CSF)直接涂片中，常位于中性粒細(xì)胞內(nèi)外。1.1生物學(xué)性狀——培養(yǎng)專性需氧，但在5%~10%CO2條件下生長(zhǎng)最佳。營(yíng)養(yǎng)要求高，需血液血清，最常用巧克力平板。形成光滑透明“露滴樣”菌落?？僧a(chǎn)生自溶酶，需及時(shí)轉(zhuǎn)種，培養(yǎng)物如不及時(shí)轉(zhuǎn)種，超過(guò)48h可死亡。腦膜炎奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征腦膜炎奈瑟菌在巧克力平板上形成圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、透明露滴狀菌落。

血平板：成分：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），脫纖維羊血制法：取所需要量的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，加蒸餾水溶解后，高壓滅菌。冷卻至50度，加入一定量（5%）羊血，傾注平板。用途：適于各類細(xì)菌的生長(zhǎng)。腦膜炎奈瑟菌在血瓊脂平板上的菌落特征腦膜炎奈瑟菌在培養(yǎng)基上形成圓形隆起、表面有光澤、透明或半透明、直徑約1mm～5mm的露滴樣粘液型菌落。無(wú)色素形成。血平板上無(wú)溶血現(xiàn)象。1.1生物學(xué)性狀——生化反應(yīng)可產(chǎn)生自溶酶，人工培養(yǎng)時(shí)若不及時(shí)移種，48h后菌體自溶。大多數(shù)腦膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣。氧化酶和觸酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。1.1生物學(xué)性狀——抗原構(gòu)造根據(jù)莢膜多糖抗原不同，分為13個(gè)血清群。目前我國(guó)流行的血清群，95%以上A群，B群次之，C群較少見(jiàn)，但致病力最強(qiáng)。1.1生物學(xué)性狀——致病性及免疫性致病物質(zhì)莢膜（抗吞噬作用，增強(qiáng)細(xì)菌侵襲力）菌毛（黏附細(xì)胞表面，利于進(jìn)一步侵襲）內(nèi)毒素（主要致病物質(zhì)）所致疾病流行性腦膜炎（簡(jiǎn)稱流腦）人類是唯一的易感宿主，常存在于患者或帶菌者的鼻咽腔黏膜中，主要通過(guò)飛沫直接從空氣中傳播。致病機(jī)制目前尚未完全清楚。免疫性6月～2歲年齡組嬰兒免疫力最低，是易感人群1.2.1標(biāo)本采集與分離培養(yǎng)1.病人腦脊液、血液和出血點(diǎn)滲出液的分離培養(yǎng)腦脊液離心取上清液檢測(cè)腦膜炎奈瑟菌特異抗原，沉淀物直接接種巧克力瓊脂平板，5%CO2，37℃培養(yǎng)，同時(shí)直接染色鏡檢。病人急性期靜脈血用葡萄糖血清肉湯增菌，5%CO2，37℃培養(yǎng)24-72h。每日從肉湯培養(yǎng)物中取樣分離培養(yǎng)，余下的血液分離血清檢查抗原和抗體效價(jià)，病人恢復(fù)期血液血清也檢測(cè)抗體效價(jià)。新鮮出血點(diǎn)滲出物接種巧克力平板，同時(shí)直接染色鏡檢。2.健康者咽拭子的分離培養(yǎng)咽拭子直接接種含多粘菌素B和萬(wàn)古霉素的巧克力平板。1.2.2腦膜炎奈瑟菌的鑒定生化鑒定（光滑露珠樣菌落）

氧化酶：+DNA酶：-營(yíng)養(yǎng)瓊脂生長(zhǎng)：-葡萄糖：+麥芽糖：+1.3鑒定標(biāo)準(zhǔn)1.菌體和菌落特征典型。2.生化反應(yīng)為分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。3.普通培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。4.能與腦膜炎球菌分群診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。1.4防治原則綜合性預(yù)防措施隔離病人、檢查帶菌者、預(yù)防性投藥，室內(nèi)通風(fēng)流腦疫苗：6個(gè)月-2歲接種兩次，間隔1月A群腦膜炎球菌多糖抗原。制備疫苗青霉素、磺胺大劑量治療腦膜炎接種第二節(jié)淋病奈瑟菌Gonococcus2.1生物學(xué)性狀——形態(tài)革蘭染色陰性，0.6-0.8μm腎形、成雙排列有菌毛，無(wú)芽胞和鞭毛，新分離株有莢膜2.1生物學(xué)性狀——形態(tài)男性急性淋病患者的尿道分泌物標(biāo)本直接涂片淋球菌（n.gonorrhoeae）為嚴(yán)格的人體寄生菌，常存在于急性尿道炎與陰道炎的膿性分泌物的白細(xì)胞中，形態(tài)染色類似于腦膜炎球菌。圖片顯示白細(xì)胞內(nèi)擠滿了革蘭陰性雙球菌，此種表現(xiàn)為典型的淋病柰瑟菌的特征。2.1生物學(xué)性狀——培養(yǎng)專性需氧，首次分離時(shí)，需供給5%CO2。營(yíng)養(yǎng)要求高，常用巧克力平板。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，對(duì)一般消毒劑敏感，對(duì)磺胺、青霉素較敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。2.1生物學(xué)性狀——生化反應(yīng)生化反應(yīng)只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解其它糖類。不分解麥芽糖，區(qū)別于腦膜炎球菌。氧化酶及觸酶試驗(yàn)均陽(yáng)性。淋病奈瑟菌在血瓊脂平板上的菌落特征淋病柰瑟菌在血瓊脂平板上，菌落較小、光滑凸起，無(wú)色透明或呈灰白色淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上，菌落較小，凸起，光滑，圓形，無(wú)色或灰白色與腦膜炎奈瑟菌相似，營(yíng)養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成灰白色細(xì)小S型呈滴露樣菌落2.1生物學(xué)性狀——主要菌體表面抗原構(gòu)造菌毛與粘附有關(guān)，免疫原性不強(qiáng)脂多糖抗原經(jīng)常變異，相應(yīng)抗體不能防止再感染外膜蛋白PI：主要外膜蛋白，將淋病奈瑟菌分為18個(gè)血清型PII：吸附易感細(xì)菌的蛋白2.1生物學(xué)性狀——致病物質(zhì)及所致疾病致病物質(zhì)菌毛脂多糖（內(nèi)毒素）淋病人類是淋球菌唯一的天然宿主。成人淋病絕大多數(shù)通過(guò)性接觸感染，是重要的性傳播疾病（sexuallytransmitteddisease，STD），目前我國(guó)流行的發(fā)病率最高的性傳播疾病。新生兒淋球菌性眼結(jié)膜炎“膿漏眼”2.2細(xì)菌學(xué)檢查標(biāo)本采集與注意事項(xiàng)

男性急性尿道炎患者尿道膿性分泌物；慢性尿道炎患者要求在尿道口內(nèi)3-4cm處采樣；前列腺炎患者采前列腺液。女性尿道炎患者采尿道分泌物；宮頸炎患者在宮頸口內(nèi)1-1.5cm處取樣。取時(shí)用特制棉簽旋轉(zhuǎn)數(shù)周，并停留數(shù)秒種后取出。最好床旁接種，或立即置運(yùn)送培養(yǎng)基中，盡快送至實(shí)驗(yàn)室接種培養(yǎng)。保暖（運(yùn)送時(shí)35oC保溫）、保濕、立即送檢檢驗(yàn)方法直接涂片鏡檢對(duì)男性尿道炎患者鏡下見(jiàn)大量白細(xì)胞，其內(nèi)有革蘭陰性雙球菌可判為陽(yáng)性。分離培養(yǎng)與鑒定巧克力色培養(yǎng)基快速診斷法：觀察典型菌落。ELISA法、核酸雜交、PCR技術(shù)生化反應(yīng)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)淋病奈瑟菌鑒定依據(jù)：1.涂片染色為革蘭陰性雙球菌；

2.巧克力平板上為半透明、灰白色、凸起滴露狀菌落；3.氧化酶及觸酶均陽(yáng)性；

4.只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；5.血清學(xué)試驗(yàn)陽(yáng)性。2.3細(xì)菌鑒別1.與腦膜炎奈瑟菌鑒別腦膜炎球菌可發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖產(chǎn)酸，淋球菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸，還可用血清學(xué)試驗(yàn)加以鑒別。2.與其他奈瑟菌鑒別一般沒(méi)有必要鑒別。利用細(xì)菌形態(tài)、色素、糖發(fā)酵試驗(yàn)。2.4防治原則預(yù)防淋病應(yīng)防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系。新生兒1%硝酸銀滴眼，或紅霉素、四環(huán)素眼藥膏。藥物首選青霉素，但多有耐藥性，應(yīng)用新型青霉素族抗生素。比較內(nèi)容腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌生物學(xué)性狀形態(tài)結(jié)構(gòu)G－雙球菌；有莢膜、菌毛(新)同左培養(yǎng)特性高營(yíng)養(yǎng)、5%CO2露滴狀、自溶酶高營(yíng)養(yǎng)、5%CO2

生化反應(yīng)分解葡萄糖、麥芽糖只分解葡萄糖抗原與分類莢膜多糖群特異Ag外膜蛋白型特異Ag脂多糖Ag核蛋白Ag菌毛蛋白Ag脂多糖Ag外膜蛋白Ag(PⅠ、PⅡ、PⅢ)抵抗力冷、熱、干燥、消毒劑均敏感同左致病性致病物質(zhì)莢膜、菌毛、內(nèi)毒素莢膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1所致疾病流行性腦脊膜炎