海水魚類和其他動物的免疫概念專家講座

第一節(jié)海水魚類及其它動物免疫概念一、水產(chǎn)動物免疫及其主要功效1.水產(chǎn)動物免疫1）免疫（ImmunisImmune,Immunity）：指生物機(jī)體識別本身和異己物質(zhì)，對本身物質(zhì)形整天然免疫耐受，對異己物質(zhì)產(chǎn)生去除作用一個生理反應(yīng).

簡單說，免疫是機(jī)體對病原產(chǎn)生抵抗力，使其免受感染過程。正常：免疫對機(jī)體有利，可產(chǎn)生抗感染、抗腫瘤等維持機(jī)體生理平衡和穩(wěn)定免疫保護(hù)反應(yīng)；異常：免疫可對機(jī)體造成傷害，如超敏反應(yīng)、本身免疫疾病和腫瘤等。2）水產(chǎn)動物免疫學(xué)（Immunology）：指研究水產(chǎn)養(yǎng)殖動物免疫系統(tǒng)組織結(jié)構(gòu)與生理功效一門新興學(xué)科。Chapter3.

免疫學(xué)原理在疾病診療和防治中應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第1頁2.抗原與抗體概念1)抗原：

凡是能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引發(fā)特異性免疫反應(yīng)物質(zhì)，稱為抗原。2)抗體：機(jī)體免疫活性細(xì)胞受抗原刺激后，在體液中出現(xiàn)由漿細(xì)胞產(chǎn)生一類能與對應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合球蛋白。簡單說，抗體是一個免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)Chapter2.

免疫學(xué)原理在疾病診療和防治中應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第2頁3.免疫反應(yīng)功效1)免疫防御：為機(jī)體去除異己物質(zhì)一個免疫保護(hù)功效。

正常：抗感染（毀滅病原生物、中和毒素）

異常：

（過高）變態(tài)反應(yīng)(超敏反應(yīng))；（過低）免疫缺點癥變態(tài)反應(yīng)：一些抗原或半抗原再次進(jìn)入致敏機(jī)體，在體內(nèi)引發(fā)特異性體液或細(xì)胞免疫反應(yīng)，由此造成組織損傷或生理功效紊亂。免疫缺點癥：指機(jī)體免疫系統(tǒng)因為先天性發(fā)育不良或后天遭受損傷所致免疫功效降低或缺乏系統(tǒng)綜合癥。Chapter2.

免疫學(xué)原理在疾病診療和防治中應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第3頁2)免疫穩(wěn)定：機(jī)體免疫系統(tǒng)維持內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定一個生理功效。

正常：消除體內(nèi)衰老和被破壞細(xì)胞

異常：（過高）本身免疫病本身免疫病：本身抗體或本身致敏淋巴細(xì)胞攻擊本身靶抗原細(xì)胞和組織，使其產(chǎn)生病理性改變或功效障礙。3)免疫監(jiān)督：機(jī)體免疫系統(tǒng)識別、去除體內(nèi)突變、畸形細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞一個生理保護(hù)作用。

正常：

識別和消除突變細(xì)胞

異常：

（過低）易生惡性腫瘤、病毒連續(xù)感染。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第4頁二、免疫系統(tǒng)組成

中樞免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊（禽類）

免疫器官

外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾、黏膜相關(guān)淋巴組織

造血干細(xì)胞

淋巴細(xì)胞：T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、第三淋巴細(xì)胞群

[自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、淋巴因子激活殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)]免疫

免疫細(xì)胞抗原提呈細(xì)胞：單核吞噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、并指細(xì)胞、系統(tǒng)

朗罕細(xì)胞、B細(xì)胞

其它免疫細(xì)胞：中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、紅細(xì)胞

抗體免疫分子補體

細(xì)胞因子：淋巴因子和單核因子海水魚類和其他動物的免疫概念第5頁（一）免疫器官1、中樞免疫器官1）骨髓(Bonemarrow)樣組織：魚類無淋巴造血骨髓，但在軟骨魚眶區(qū)和顱下區(qū)存在淋巴組織或骨髓樣組織，可形成血細(xì)胞，含有與高等脊椎動物骨髓相同結(jié)構(gòu)與功效。真骨魚腎臟也屬骨髓樣組織，是主要淋巴器官，具造血功效。它分為頭腎（前腎）和中腎（后腎、體腎）二部分。其中頭腎失去排泄功效而成為免疫器官和造血組織，為魚類中第二個發(fā)育免疫器官，免疫細(xì)胞發(fā)源地(產(chǎn)生B細(xì)胞和紅細(xì)胞等，相當(dāng)于哺乳類骨髓)；另外，受抗原刺激后，頭腎增生并存在抗體產(chǎn)生細(xì)胞，說明其為魚類主要抗體產(chǎn)生器官(相當(dāng)于哺乳類淋巴結(jié))。2）胸腺(Thymus)：真骨魚類胸腺位于？，它無皮質(zhì)與髓質(zhì)分界限，胸腺由結(jié)締組織被膜圍繞，實質(zhì)由上皮細(xì)胞網(wǎng)組成，在上皮細(xì)胞網(wǎng)中分布由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和成熟漿細(xì)胞等。魚類胸腺是T細(xì)胞分化成熟為具免疫活性T細(xì)胞場所，T細(xì)胞移至外周免疫器官后，可接收抗原刺激增殖分化產(chǎn)生免疫效能。魚類胸腺結(jié)構(gòu)與功效伴隨季節(jié)和年紀(jì)改變而改變。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第6頁2、外周免疫器官外周淋巴器官為捕捉抗原、加工處理抗原和呈遞抗原結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。1）脾(Spleen)：為人體最大淋巴器官，含有造血、貯血和過濾作用，也是成熟T、B細(xì)胞移居和接收抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)答主要場所。

A.人類1)脾結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組成：

a.脾表面由結(jié)締組織包裹，被膜向?qū)嵸|(zhì)內(nèi)延伸成若干小梁，脾實質(zhì)由紅髓和白髓組成，二者交界處為邊緣區(qū)（又稱為移行區(qū)）。b.白髓：由小動脈周圍淋巴鞘和鞘內(nèi)淋巴泡兩部分組成。小動脈淋巴鞘主要含T細(xì)胞，當(dāng)抗原引發(fā)細(xì)胞免疫應(yīng)答時，此區(qū)顯著增大。淋巴濾泡主要由B細(xì)胞組成，接收抗原刺激后可出現(xiàn)生發(fā)中心，內(nèi)含增殖分化B細(xì)胞。c.紅髓：分布在白髓周圍，由脾索和脾竇組成。脾索主要是B細(xì)胞集居區(qū)，也有巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。脾竇又稱血竇，有大量巨噬細(xì)胞和血細(xì)胞。d.邊緣區(qū)：紅髓和白髓交界處為邊緣區(qū)，內(nèi)含T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第7頁海水魚類和其他動物的免疫概念第8頁

2)脾功效：

a.在胚胎期為造血干細(xì)胞增殖分化場所，含有造血功效；b.是血液濾過器，能夠去除血中病原微生物和本身衰老損傷血細(xì)胞。c.為T、B細(xì)胞移居和接收抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答、產(chǎn)生免疫效應(yīng)等主要場所。脾中淋巴細(xì)胞60%為B淋巴細(xì)胞。B.魚類脾結(jié)構(gòu)與功效

a.有頜類才有真正脾，軟骨魚類脾較大，分化為紅髓和白髓，為造血器官；硬骨魚類無顯著紅髓和白髓分化，但同時有造血和免疫功效。b.與頭腎相比，脾在體液免疫反應(yīng)中處于相對次要地位，其受抗原刺激后增殖反應(yīng)以彌散方式發(fā)生在整個器官上。c.硬骨魚類受免疫接種后，其脾、腎和肝等器官黑色素巨噬細(xì)胞增多，并與淋巴細(xì)胞和抗體生成細(xì)胞聚集在一起形成黑色素巨噬細(xì)胞中心，它作用有：參加體液免疫和炎癥反應(yīng)；對異物進(jìn)行貯存、破壞和脫毒；記憶細(xì)胞原發(fā)中心；保護(hù)組織免受自由基損傷。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第9頁2）粘膜淋巴組織(MucosaAssociatedLymphaticTissue,MALT)：

a.魚類皮膚、鰓和消化道等器官上皮組織中存在淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和各類粒細(xì)胞等都屬于MALT。當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后，巨噬細(xì)胞可反抗原進(jìn)行處理和呈遞，抗體分泌細(xì)胞(Antibodysecretingcell,ASC)會分泌抗體，與粘液中溶菌酶和補體等非特異性保護(hù)組織一道組成抵抗病原感染防線。b.魚類MALT相對于其系統(tǒng)免疫系統(tǒng)有一定自主性，在其免疫接種方法選擇和改進(jìn)中有實際意義：口服免疫后，頭腎、血液和腸都出現(xiàn)ASC，但鰓中和皮膚粘液中無；肛門插管接種抗原后可誘導(dǎo)腸、皮膚粘液和膽汁中產(chǎn)生特異性抗體，但血清中無；腹腔免疫4周后，頭腎、血液和鰓中抗體分泌同時到達(dá)峰值，而腸只有到第7周才有顯著反應(yīng)；顆?？乖菝庖邥r，皮膚攝取能力遠(yuǎn)大于鰓，所以，口腔和腹腔免疫可顯著刺激系統(tǒng)免疫應(yīng)答，浸泡和肛門免疫更適宜于誘導(dǎo)粘膜免疫反應(yīng)。c.教材中腸道淋巴組織也屬于MALT范圍。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第10頁（二）免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞：泛指全部參加免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)細(xì)胞及其前體細(xì)胞，包含：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞及其它抗原提呈細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞和肥大細(xì)胞等。

魚類免疫細(xì)胞主要存在于免疫器官、組織以及血液和淋巴液中。1。T淋巴細(xì)胞：它由一群功效不一樣異質(zhì)性淋巴細(xì)胞組成，在胸腺內(nèi)分化成熟，為胸腺依賴性淋巴細(xì)胞(Thymusdependentlymphocyte)簡稱。成熟T細(xì)胞隨血流分布于外周免疫器官，并經(jīng)過血液與組織間淋巴細(xì)胞再循周游走于全身，執(zhí)行其免疫功效。其在外周血中所占淋巴細(xì)胞總數(shù)65~80%。2。B淋巴細(xì)胞：在骨髓（骨髓樣組織）中分化成熟，稱骨髓依賴淋巴細(xì)胞。成熟B細(xì)胞隨血流分布于外周淋巴組織，主要功效為產(chǎn)生抗體，執(zhí)行體液免疫。外周血中占淋巴細(xì)胞總數(shù)10~15%。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第11頁3.NK細(xì)胞它為發(fā)覺較晚一群淋巴細(xì)胞，最主要功效為非特異性殺傷靶細(xì)胞，對各種腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞具較強殺傷作用。約占5~10%。4.單核吞噬細(xì)胞它包含血液中單核細(xì)胞（Monocyte,MC）和組織中巨噬細(xì)胞。它不但在非特異性免疫中發(fā)揮主要作用，在特異性免疫中也是不可缺乏細(xì)胞，有吞噬殺傷、抗原遞呈和合成份泌細(xì)胞因子等作用。5.其它免疫細(xì)胞除上述免疫細(xì)胞外，血液中許多細(xì)胞均直接或間接參加免疫應(yīng)答過程，如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血小板等。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第12頁（三）免疫因子免疫因子：

由機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生，與免疫應(yīng)答相關(guān)、分泌到體液中或存在于細(xì)胞膜表面分子統(tǒng)稱為免疫因子。

組成：它主要包含抗體、補體系統(tǒng)各成份、細(xì)胞因子及免疫細(xì)胞膜分子等。細(xì)胞因子(Cytokines)：由免疫細(xì)胞和一些非免疫細(xì)胞（如纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等）合成和分泌，含有調(diào)整各種細(xì)胞生理功效可溶性小分子蛋白質(zhì)。細(xì)胞因子種類繁多，含有各種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)調(diào)控中作用重大。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第13頁三、免疫主要類型1.天然免疫定義：

指機(jī)體先天含有正常生理防御功效，對各種不一樣病原微生物與異物都有排斥和屏障作用，也稱非特異性免疫。如：皮膚和粘液、粘液中溶菌酶、吞噬細(xì)胞等2.取得性免疫定義：指機(jī)體對某一個或一類微生物或其產(chǎn)物所產(chǎn)生特異性抵抗力，它是后天，是生物體在生長發(fā)育過程中因為自然感染或預(yù)防接種后產(chǎn)生。也稱特異性免疫。

1)自動免疫：因感染病原或注射抗原（疫苗）而取得免疫

抗原：凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引發(fā)特異性免疫反應(yīng)物質(zhì)。

2)被動免疫：從母體取得抗體或因人工注射抗體而取得免疫

免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第14頁3)自動免疫和被動免疫區(qū)分：a.發(fā)生作用時間：

自動免疫：慢（1-4周）；被動免疫：快（馬上）b.效果：

自動免疫：可刺激機(jī)體連續(xù)產(chǎn)生抗體，再次接收抗原刺激將表現(xiàn)出再次反應(yīng)或反應(yīng)增強

被動免疫：體內(nèi)抗體數(shù)量不會增多，再次接觸抗原也不出現(xiàn)增強反應(yīng)c.維持時間：

自動免疫：長（六個月至終生）；被動免疫：短（2-3周）d.用途：

自動免疫：預(yù)防感染；

被動免疫：應(yīng)急治療

免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第15頁四、水產(chǎn)動物免疫特點1.水產(chǎn)動物病原與人類疾病關(guān)系不大，不易引發(fā)重視；2.水產(chǎn)動物免疫機(jī)制依賴于外界環(huán)境改變較為顯著；3.水產(chǎn)動物抗體與人等高等生物已知抗體不一樣，其疾病免疫學(xué)防治方法尚在探索中；4.水產(chǎn)動物是變溫動物，其免疫學(xué)研究必須在同一條件下進(jìn)行五、水產(chǎn)動物免疫在病害防治中意義1.經(jīng)過人工免疫或?qū)Σ『笥忻庖吡€體篩選，培育免疫新品種(SPR)；2.經(jīng)過人工免疫，可有效預(yù)防流行病發(fā)生；3.免疫防治可有效防止藥品殘留及化學(xué)藥品對水體污染；4.免疫防治可防止長久使用抗生素等而產(chǎn)生耐藥性；5.疫苗防治可維持較長藥效時間。免疫：水產(chǎn)動物免疫基本概念海水魚類和其他動物的免疫概念第16頁第二節(jié)水產(chǎn)養(yǎng)殖動物非特異性免疫魚蝦貝類非特異性免疫因子外部屏障：皮膚和粘膜屏障作用內(nèi)部屏障：血腦屏障(血胎屏障)非特異性免疫細(xì)胞：吞噬細(xì)胞（粒細(xì)胞等）細(xì)胞和體液作用體液：補體、溶菌酶等Chapter2.免疫原理及應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第17頁一、魚蝦貝類非特異性免疫1.外部屏障

1)作用：a.機(jī)械阻擋和排除作用b.具非特異性抗菌物質(zhì)：溶菌酶、皮脂腺產(chǎn)乳酸等c.正常菌群拮抗作用

2)種類

A.粘液:a.屏障保護(hù)作用(可限制病原菌運動，阻止其侵入)b.含有溶菌和殺菌多糖類和蛋白類，如溶菌酶等

B.甲殼、皮膚和鱗片等：機(jī)械屏障作用2.體內(nèi)屏障

血腦屏障：由腦膜、脈絡(luò)叢和腦血管等組成。為大腦與軀干屏障

作用：預(yù)防病原和其它異物進(jìn)入大腦

免疫：非特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第18頁3.非特異性免疫細(xì)胞

1)吞噬細(xì)胞：包含粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞

作用：

受病原和宿主產(chǎn)生趨化因子作用靠近并吞噬

或殺傷病原

2)非特異性細(xì)胞毒細(xì)胞：主要存在于腎臟和腹腔，血中少。

作用：與哺乳動物NK細(xì)胞類似，能夠殺傷病毒感染

靶細(xì)胞，從而含有抗感染作用

免疫：非特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第19頁4.非特異性體液因子

1)補體：

A.起源與成份：存在于血清中，由各種非特異性血清蛋白

組成，它對熱敏感，45℃20min失活

B.作用：a.在抗原抗體反應(yīng)中經(jīng)過補體第二激活通路補充

抗體作用；

b.激活后補體能溶解細(xì)胞膜，殺滅病毒；

c.激活后補體可促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬和釋放組

胺等各種功效，幫助殺滅病原.

免疫：非特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第20頁2)干擾素：

A.定義：是一類在同種細(xì)胞上含有抗病毒活性蛋白質(zhì).

(其活性發(fā)揮受細(xì)胞基因組調(diào)整和控制，包括RNA和DNA合成)

B.起源與成份：主要為由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)；

機(jī)體產(chǎn)生干擾素數(shù)量產(chǎn)生受溫度影響顯著。如：

硬頭鱒感染病毒后，10℃下，4d產(chǎn)生；15℃下，2d產(chǎn)生

C.作用：

干擾素為主要抗病毒感染因子

a.抗病毒增殖活性；b.免疫調(diào)整活性；c.細(xì)胞分裂抑制活性；d.抑制腫瘤生長活性；e.改變細(xì)胞生物學(xué)特征等。

免疫：非特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第21頁3)溶菌酶

A.起源與成份：存在于粘液、血清和巨噬細(xì)胞中，是一個

水解酶（低分子堿性多肽）

B.作用：

可直接溶解殺死G+菌等病原微生物4)C反應(yīng)性蛋白

A.起源與成份：為存在于鰈科魚類中一個蛋白質(zhì)

B.作用：

a.作為調(diào)理素可增加吞噬細(xì)胞吞噬量

b.能使真菌、細(xì)菌乃至寄生蟲中糖類和磷酸酯

產(chǎn)生沉淀，從而殺滅病原體。5)備解素：為-球蛋白，可在補體幫助下殺死許多細(xì)菌、原

蟲甚至一些病毒等免疫：非特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第22頁二、影響非特異性免疫原因1.環(huán)境原因

1)DO：

缺氧可引發(fā)水生動物抗病力下降

據(jù)此，有時可采取沖水、換水和充氣等方法緩解病情

2)水質(zhì)：水體有毒物質(zhì)可妨礙機(jī)體正常機(jī)能，免疫力下降

3)水溫：適宜溫度改變可抑制疾病暴發(fā)2.營養(yǎng)原因

1)營養(yǎng)不足，體質(zhì)下降，機(jī)體抗菌力降低2)營養(yǎng)不足，機(jī)體細(xì)胞代謝下降，病毒感染率降低3.個體差異和年紀(jì)影響免疫：非特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第23頁第三節(jié)特異性免疫一、抗原（Antigen,Ag）1.抗原概念

1)抗原：是一個能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)使之發(fā)生特異性免疫應(yīng)答，并能與對應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物或效應(yīng)體細(xì)胞在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合物質(zhì)。2)抗原兩種性能：

a.免疫原性：指抗原分子能刺激機(jī)免疫細(xì)胞，并使之活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生效應(yīng)分子（抗體）或細(xì)胞體（致敏T細(xì)胞）性能。

b.免疫反應(yīng)性：指抗原分子能與對應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合產(chǎn)生免疫反應(yīng)性能。

免疫原性和免疫反應(yīng)性統(tǒng)稱為抗原性。Chapter2.免疫原理及應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第24頁3)抗原主要種類：

a.完全抗原（completeantigen）：

現(xiàn)有免疫原性又有免疫反應(yīng)性抗原稱為完全抗原。

大多異種蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒、細(xì)菌外毒素和動物免疫血清等都為完全抗原

b.不完全抗原(incompleteantigen)：

那些本身沒有免疫原性而只有免疫反應(yīng)性物質(zhì),又稱半抗原（hapten）半抗原大多為小分子物質(zhì)，如大多數(shù)多糖、脂類、一些藥品和簡單化合物等、

半抗原單獨作用無免疫原性，當(dāng)與大分子蛋白質(zhì)載體結(jié)合形成半抗原—載體復(fù)合物使，便可取得免疫原性。該復(fù)合物不但可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對半抗原抗體，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對蛋白質(zhì)載體抗體。

4)特殊抗原：

a.變應(yīng)原(allergen)：能刺激機(jī)體產(chǎn)生病理性免疫應(yīng)答(超敏反應(yīng))抗原。b.耐受原(tolerangen)：能誘導(dǎo)機(jī)體對其表現(xiàn)無免疫應(yīng)答(免疫耐受)抗原。免疫類型：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第25頁2.抗原特征

1)特異性：含有與對應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng)能力；

2)異物性：正常情況下，能引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答抗原都是異種或異體物質(zhì)，機(jī)體本身物質(zhì)或細(xì)胞不能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答；而且，親緣關(guān)系越遠(yuǎn)、組織結(jié)構(gòu)間差異越大，抗原性越強。

3)大分子膠體性：抗原分子量較大(1萬Da以上)，分子量小于4000Da物質(zhì)普通不具抗原性。同一類物質(zhì)，其抗原性隨分子量增大而增強

4)結(jié)構(gòu)復(fù)雜性：抗原要有一定化學(xué)組成和復(fù)雜結(jié)構(gòu)

抗原性：芳香類Pr.>非芳香類Pr>多糖>核酸>類脂

5)完整性：抗原必須保持完整化學(xué)活性基團(tuán)才能含有抗原性，不然，將不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第26頁3.決定抗原免疫原性原因

某物質(zhì)是否含有免疫原性，能否作為免疫原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與其本身性質(zhì)、機(jī)體對該物質(zhì)反應(yīng)性及免疫方式等直接相關(guān)。

1)分子大小：凡含有免疫原性物質(zhì)均為大分子有機(jī)物質(zhì)（無機(jī)物不能作為免疫原，分子量低于4000物質(zhì)通常也無免疫原性）；

為何大分子物質(zhì)免疫原性較強呢？

a.分子量越大，其表面攜帶抗原決定簇越多，因而對淋巴細(xì)胞刺激也越強；

b.大分子膠體物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在體內(nèi)不易被破壞和去除，存留時間較長，使淋巴細(xì)胞得到較持久刺激，有利于免疫應(yīng)答發(fā)生。

2)化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成：大分子物質(zhì)并不都有良好免疫原性，還與組成與結(jié)構(gòu)相關(guān)如：明膠分子量雖達(dá)10萬，但其組分為直鏈a.a.，易被分解破壞，免疫原性弱;

若明膠分子上連接少許酪氨酸或谷氨酸等芳香族a.a.，免疫原性顯著增強;以芳香族a.a.為主Pr.，其免疫原性要顯著高于非芳香族a.a.為主Pr.免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第27頁3)異物性：

免疫系統(tǒng)能識別自己和異己物質(zhì)，對本身物質(zhì)免疫耐受；對異己物質(zhì)免疫應(yīng)答

。免疫原性與抗原和宿主種系關(guān)系遠(yuǎn)近相關(guān)，種系關(guān)系越遠(yuǎn)，免疫原性越強。

含有異物性物質(zhì)包含以下三類：

a.異種物質(zhì)：如細(xì)菌、病毒、異種血清、植物蛋白等；

b.同種異體物質(zhì)：如人類紅細(xì)胞表面血型抗原（A、B、O、Rh）等；c.改變和隱蔽本身物質(zhì)：主要包含在外傷、感染、輻射或藥品作用下，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變“本身”物質(zhì)和釋放入血本身抗原，如甲狀腺蛋白，等。4)免疫路徑：相同抗原因免疫路徑不一樣，產(chǎn)生免疫效果也不一樣多數(shù)抗原須經(jīng)非消化道(皮下、肌肉、體表或血液等)路徑才能產(chǎn)生良好免疫效果；有些抗原(如須刺激腸粘膜相關(guān)淋巴組織抗原)，只有口服免疫才有良好效果。5)機(jī)體應(yīng)答性：抗原物質(zhì)能否產(chǎn)生免疫原性還與機(jī)體免疫應(yīng)答能力相關(guān)。如：純化多糖對人和小鼠有良好免疫原性，而對豚鼠則不能引發(fā)免疫應(yīng)答。

另外，抗原免疫原性還與抗原劑量、佐劑、機(jī)體年紀(jì)與生理狀態(tài)等原因相關(guān)。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第28頁4.抗原特異性與交叉反應(yīng)

抗原特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在免疫反應(yīng)性上。

表現(xiàn)在免疫原性：指某一抗原分子只能誘導(dǎo)對應(yīng)淋巴細(xì)胞發(fā)生專一應(yīng)答；

表現(xiàn)在免疫反應(yīng)性：指某一抗原分子只能與對應(yīng)抗體或淋巴細(xì)胞發(fā)生專一結(jié)合。

抗原特異性是由抗原分子表面抗原決定簇決定。1)抗原決定簇（antigenicdeterminant）：指位于抗原分子表面、決定抗原特異性特定化學(xué)基團(tuán)，它是決定抗原反應(yīng)性展現(xiàn)高度特異性物質(zhì)基礎(chǔ)。又稱表位（epitope）

詳細(xì)說，抗原決定簇就是與對應(yīng)淋巴細(xì)胞上抗原受體結(jié)合部位，而且，只有二者結(jié)合才能激活淋巴細(xì)胞并引發(fā)免疫反應(yīng)

免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第29頁2)抗原決定簇種類與組成

a.種類：一個抗原表面能夠有一個或各種不一樣抗原決定簇；

功效性(抗原)決定簇：指位于抗原分子表面易被對應(yīng)淋巴細(xì)胞識別、開啟免疫應(yīng)答，同時能與對應(yīng)抗體或致敏T細(xì)胞特異性結(jié)合發(fā)生免疫反應(yīng)決定簇。

隱蔽性(抗原)決定簇：位于抗原分子內(nèi)部，不能被淋巴細(xì)胞識別，無法觸發(fā)免疫應(yīng)答抗原決定簇。它若經(jīng)理化原因處理或經(jīng)抗原提呈細(xì)胞加工后，也可將隱藏與抗原分子內(nèi)部決定簇暴露，稱為功效性決定簇而發(fā)揮免疫作用。b.抗原結(jié)合價：一個抗原分子上能與對應(yīng)抗體分子結(jié)合抗原決定簇總數(shù)

單價抗原：有些半抗原只能和抗體分子中一個抗原結(jié)合部位結(jié)合，為單價抗原

多價抗原：多數(shù)抗原有多個相同和不一樣抗原決定簇，能和多個抗體分子結(jié)合。c.組成：不一樣類型抗原決定簇組成不一樣，普通有5-7個單體組成

如：Pr類抗原：其抗原決定簇有5個左右氨基酸多糖類抗原：其抗原決定簇有6個左右單糖核酸類抗原：其抗原決定簇有6-8個左右核苷酸殘基

免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第30頁3)抗原決定簇反抗原特異性影響

抗原決定簇化學(xué)組成、排列及空間結(jié)構(gòu)決定著抗原特異性。天然抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，同種抗原有各種不一樣抗原決定簇，不一樣抗原也含有不一樣抗原決定簇，因而各具特異性。4)共同抗原與交叉反應(yīng)共同抗原：指含有相同抗原決定簇抗原。其中：

類屬抗原：存在于同一個屬或近緣種屬中共同抗原稱類屬抗原；

異嗜性抗原：存在于不一樣種屬生物間共同抗原稱異嗜性抗原。交叉反應(yīng)：由共同抗原決定簇刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體可和兩種抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)。

交叉反應(yīng)有時也在兩種抗原決定簇構(gòu)型相同時發(fā)生。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第31頁免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第32頁5.抗原分類

依據(jù)分類方法不一樣，能夠?qū)⒖乖譃椴灰粯宇愋?。A.依據(jù)抗原起源及與機(jī)體親緣關(guān)系分類(1)異種抗原：指來自另一物種抗原物質(zhì)。如各種微生物及其代謝產(chǎn)物、(2)同種異體抗原：指來自同種而基因型不一樣個體抗原物質(zhì)，如人血型抗原；(3)本身抗原：指能引發(fā)本身免疫應(yīng)答本身組織成份，如改變和隱蔽本身物質(zhì)。B.依據(jù)抗原激活B細(xì)胞是否依賴T細(xì)胞輔助來分類(1)胸腺依賴性抗原（thymusdependantantigen,TD-Ag）：

TD抗原：含T細(xì)胞抗原決定簇、需T細(xì)胞幫助才能激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab抗原。

如：病毒、細(xì)菌、細(xì)胞及各種蛋白質(zhì)等抗原都屬TD抗原(2)胸腺非依賴性抗原（thymusindependantantigen,TI-Ag）：TI抗原：只含B細(xì)胞抗原決定簇、不需T細(xì)胞幫助可直接激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab抗原

如：革蘭氏陰性菌LPS、莢膜多糖等。

C.抗原其它分類方法：如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依取得方式分天然、人工和合成抗原等。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第33頁6.細(xì)菌抗原

細(xì)菌是主要病原體，其成份十分復(fù)雜，每種結(jié)構(gòu)及其代謝產(chǎn)物都有不一樣抗原成份，每種細(xì)菌都是一個由各種抗原組成復(fù)合體。

細(xì)菌抗原種類：

a.表面抗原：包含莢膜抗原和微莢膜抗原；

b.菌體抗原：指位于細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)上抗原；

c.鞭毛抗原：存在于鞭毛上抗原；

d.菌毛抗原：存在于菌毛上抗原；

e.外毒素和類毒素：毒素是Pr，具很強免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素

外毒素：為細(xì)菌產(chǎn)生一類蛋白質(zhì)，具強抗原性

類毒素：為外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛脫毒而成，具強抗原性外毒素和類毒素均能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素

免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第34頁7.佐劑（adjuvant）

1)定義：指與抗原同時或預(yù)先注入機(jī)體后，能夠非特異性地增強機(jī)體反抗原免疫應(yīng)答能力物質(zhì)。

2)種類：

a.無機(jī)佐劑：主要為含鋁化合物，如：銨明礬、氫氧化鋁、磷酸鋁等

b.有機(jī)佐劑：主要為微生物及其代謝產(chǎn)物，如分枝桿菌(結(jié)核桿菌)、LPS等

c.合成佐劑：一些合成物質(zhì)，如PolyI:C、PolyA:U等

d.油劑：如礦物油（石蠟油）、植物油、花生油乳化佐劑、弗氏佐劑等

3)弗氏佐劑：由礦物油(石蠟油)、乳化劑(羊毛脂或吐溫80)和殺死分支桿菌(如結(jié)核桿菌)等組成佐劑。a.完全氟氏佐劑：以上三種成份俱全佐劑b.不完全氟氏佐劑：不含分支桿菌氟氏佐劑，其對機(jī)體刺激作用較弱免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第35頁4)作用：

a.增加抗原免疫原性（增加抗原表面積）；b.增強抗體反抗原免疫應(yīng)答能力；c.改變抗體產(chǎn)生類型；d.引發(fā)或增強IV型超敏反應(yīng)。5)作用機(jī)制：（作用機(jī)制還未完全了解，主要可能有以下原因）主要是促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖、分化，改變抗原物理形狀，使抗原在體內(nèi)維持較長時間，易于巨噬細(xì)胞攝取、處理并提呈給淋巴細(xì)胞，從而提升抗原免疫原性，增強機(jī)體反抗原應(yīng)答能力。6)使用方法：預(yù)先使用或與抗原同時使用免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第36頁二、免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)1.免疫球蛋白與抗體基本概念(1)免疫球蛋白：指含有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相同球蛋白。

Ig過去稱為球蛋白，主要存在于血液和其它分泌液中。(2)膜表面免疫球蛋白(Surfacemembraneimmunoglobulin,SmIg)：B細(xì)胞膜上可作為抗原識別受體免疫球蛋白。(3)抗體(Antibody,Ab)：機(jī)體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟終末B細(xì)（漿細(xì)胞）所合成與分泌一類能與對應(yīng)抗原特異性結(jié)合含有免疫功效球蛋白。

抗體是主要免疫分子，主要存在于血液、體液和粘膜分泌液中。

細(xì)胞免疫：由免疫細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。

體液免疫：由抗體介導(dǎo)免疫反應(yīng)。

抗體=免疫球蛋白？Why?免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第37頁抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都是抗體。

如：骨髓瘤蛋白化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相同(屬Ig)，但無抗體活性，無免疫功效；

SmIg化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相同，能與Ag特異性結(jié)合，但它不是激活B細(xì)胞產(chǎn)生。

免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)上概念，但抗體是生物學(xué)功效上概念。2.作為抗體必須具備條件：

1)只有脊椎動物漿細(xì)胞才能產(chǎn)生；2)必須有抗原刺激；3)能與對應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合；4)其化學(xué)本質(zhì)是一個具免疫功效球蛋白。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第38頁3.Ig化學(xué)結(jié)構(gòu)

H鏈V區(qū)

Ig分子是由一個或多個單體組成；L鏈V區(qū)

如：IgG、IgD和IgE均為單體分子

L鏈C區(qū)每個Ig單體呈Y形對稱結(jié)構(gòu)。H鏈C區(qū)每個單體是由二硫鍵連接四條肽鏈組成；四條肽鏈包含2條重鏈(H鏈)和2條輕鏈(L鏈)；Ig單體結(jié)構(gòu)

重鏈：約由450個或570個氨基酸組成，它包含5類：、、、、。Ig因重鏈種類不一樣分為5類：IgG(鏈)，IgA(鏈)，IgM(鏈)，IgD(鏈)，IgE(鏈)

輕鏈：約由214個氨基酸組成，以二硫鍵與重鏈相連。它有2類：型和型每條肽鏈包含可變區(qū)(V區(qū))和穩(wěn)定區(qū)(C區(qū))。重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)都是抗原特異性結(jié)合部位。在結(jié)構(gòu)上與抗原結(jié)構(gòu)互補(因而又稱互補決定區(qū))免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第39頁海水魚類和其他動物的免疫概念第40頁4.不一樣動物中Ig類型

依據(jù)CH上同種型決定簇不一樣，將Ig分為5種：IgA、IgG、IgM、IgD和IgE.其中，IgG、IgA和IgM又依CH氨基酸組成和H鏈間二硫鍵數(shù)目標(biāo)差異，分成若干亞類：

IgG1、IgG2、IgG3、IgG4；IgA1、IgA2；IgM1和IgM2。1)哺乳類：a.人、鼠：IgG,IgA,IgM,IgD,IgE;b.兔：IgG,IgA,IgM;c.其它：IgG,IgA,IgM,IgE;

2)鳥類：IgG,IgA,IgM;

3)兩棲類：IgG,IgM;

4)魚類：IgM;5)無脊椎動物：無Ig免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第41頁5.各種Ig特征與功效1)IgG：

a.起源與性質(zhì)：主要由脾和淋巴結(jié)漿細(xì)胞合成，常以單體形式存在于血清和其它血清中。它在人體含量最高(3/4)、半衰期最長(23d)、易透過毛細(xì)血管，因而可廣泛分布到組織和其它體液中。分子量15萬Da.

b.作用：(1)抗感染作用，抗毒素及大多抗菌和抗病毒抗體均屬IgG；IgG還是唯一能經(jīng)過胎盤Ig，是新生兒抗感染主要原因。(2)不少本身抗體和引發(fā)II、III型變態(tài)反應(yīng)抗體也屬IgG;(3)IgG與補體結(jié)合后可經(jīng)過傳統(tǒng)路徑激活補體；(4)IgG能與巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞表面對應(yīng)受體結(jié)合，從而發(fā)揮調(diào)理吞噬和ADCC效應(yīng)。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第42頁2)IgM：

a.起源與性質(zhì)：

(1)主要由脾漿細(xì)胞合成，它是由5個IgM單體借一個J鏈和若干個二硫鍵連接而成五聚體，是5類Ig中分子量最大(95萬Da)，故稱巨球蛋白。(2)它不能透過血管壁，主要分布于血液中，占血清Ig總量10%左右；(3)為個體發(fā)育中合成最早Ig，在胎兒晚期已能合成，但它不能經(jīng)過胎盤；(4)是人體免疫后最早出現(xiàn)抗體；(5)IgM是當(dāng)前魚類中唯一確認(rèn)抗體類型。

b.作用：

其作用與IgG類似，含有殺菌、溶菌、調(diào)理吞噬及凝集作用等，不過，因為IgM抗原結(jié)合效價最高，是高效能抗菌抗體，它上述作用均比IgG強。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第43頁單體海水魚類和其他動物的免疫概念第44頁3)IgA：

(1)分為血清型IgA和分泌型IgA(SIgA)兩種類型。前者85%為單體，少數(shù)為含J鏈二聚體，主要由腸系膜淋巴組織漿細(xì)胞產(chǎn)生；后者為二聚體(雙體)。(2)人體含量僅次于IgG(占10-15%)，分子量為18-20萬Da。(3)是少數(shù)在消化道中不被消化Pr之一；(4)嬰兒出生4-6個月后才能合成，但可從母乳中取得SIgA(5)SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜表面以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)分泌液中，是局部粘膜防御感染主要原因；(6)血清型IgA含有中和毒素、調(diào)理吞噬作用。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第45頁4)IgD：(1)以單體形式存在于血清中，含量低，僅占人體血清Ig總量1%。(2)結(jié)構(gòu)與IgG類似，不能經(jīng)過胎盤，也不能激活補體。(3)血清中IgD功效尚不清楚，但B細(xì)胞表面IgD(SIgD)是成熟B細(xì)胞主要標(biāo)志，它是B細(xì)胞抗原識別受體，在接收抗原刺激后對B細(xì)胞活化、增生和分化其調(diào)整作用；

5)IgE：

(1)以單體形式存在于血清中，是系統(tǒng)進(jìn)化最晚出現(xiàn)Ig，也是含量最低Ig，僅占血清Ig總量0.001%.(2)在過敏性疾病和一些寄生蟲感染病人血清中其含量顯著增高；(3)產(chǎn)生部位與SIgA相同，主要由呼吸道（如鼻咽、扁桃體、支氣管)和胃腸道粘膜固有層漿細(xì)胞產(chǎn)生。免疫：特異性免疫海水魚類和其他動物的免疫概念第46頁海水魚類和其他動物的免疫概念第47頁第四節(jié)免疫學(xué)方法及其應(yīng)用一、基本概念1.血清學(xué)反應(yīng)：抗原與對應(yīng)抗體在體外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng);2.免疫學(xué)反應(yīng)：抗原與對應(yīng)抗體在體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng);3.抗原抗體反應(yīng)：抗原與對應(yīng)抗體在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)；4.免疫診療學(xué)：用體液免疫和細(xì)胞免疫方法來診療相關(guān)疾病科學(xué)。

二、血清學(xué)反應(yīng)特點

1.特異性與交叉性：a.特異性：一個抗原普通只能與其對應(yīng)抗體結(jié)合；

b.交叉性：當(dāng)不一樣抗原含有相同抗原決定簇時，其結(jié)合又含有交叉性2.表面性與可逆性：a.表面性：抗原與抗體分子結(jié)合是分子表面結(jié)合；

b.可逆性：抗原抗體結(jié)合后，在一定條件下仍可分開，且其性質(zhì)不變?？赡嫘允敲庖呶綄游龇ㄌ崛∶庖呒兛乖蚩贵w理論基礎(chǔ)。Chapter2.免疫原理及應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第48頁3.定比性：抗原與抗體需按一定百分比結(jié)合

普通情況下，抗原表面抗原決定簇是多價，而抗體上抗原受體通常是單價或二價，二者只有以一定百分比結(jié)合才能出現(xiàn)可見血清學(xué)反應(yīng)。4.階段性:

抗原抗體反應(yīng)含有顯著階段性1)抗原抗體特異性結(jié)合階段：時間短（數(shù)秒），不可見2)抗原與抗體反應(yīng)可見階段：慢（數(shù)分至數(shù)天），有凝集、沉淀等5.高度敏感性：可用于檢測極微量抗原與抗體。如：

血清中和試驗可用于檢測含量低至10-3

g/ml魚類病毒；ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)可檢測含量為10-3

g/ml細(xì)菌性病原6.條件依賴性：抗原抗體間出現(xiàn)可見反應(yīng)要提供最適條件，如：

pH值(普通為6-8)；溫度(37-45℃)；適當(dāng)電解質(zhì)(如生理鹽水)；震蕩(增加抗原抗體相互接觸機(jī)會)等。免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第49頁三、主要抗原抗體反應(yīng)（一）凝集反應(yīng)（Agglutination）1.定義：顆粒性抗原(如完整紅細(xì)胞或細(xì)菌)與對應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，經(jīng)過一定時間形成肉眼可見凝集物，稱為凝集反應(yīng)。用于凝集反應(yīng)抗原稱為凝集原；用于凝集反應(yīng)抗體稱凝集素2.種類:

(1)直接凝集反應(yīng)(directagglutination)：顆粒性抗原直接與對應(yīng)抗體結(jié)合所出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。玻片法：屬定性試驗，慣用于細(xì)菌和ABO血型判定試管法：屬定量試驗，用已知Ag測定血清中對應(yīng)Ab及其數(shù)量。在該試驗中，將出現(xiàn)顯著凝集反應(yīng)血清最高稀釋度稱為該抗體效價或滴度。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第50頁

(2)間接凝集反應(yīng)(indirectorpassiveagglutination)：將可溶性抗原先吸附于一個與免疫無關(guān)載體顆粒表面，再與對應(yīng)抗體作用，在適當(dāng)電解質(zhì)存在時，出現(xiàn)載體顆粒被動凝集現(xiàn)象。慣用載體有些人O型紅細(xì)胞、乳膠顆粒、活性炭等，并因載體不一樣而分別稱為間接血凝試驗、間接乳凝試驗和間接炭凝試驗。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第51頁（二）沉淀反應(yīng)(precipitation)1.定義：可溶性抗原(如血清蛋白、多糖和細(xì)菌抽提液等)與其對應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下出現(xiàn)肉眼可見沉淀物現(xiàn)象。

用于沉淀反應(yīng)抗原稱為沉淀原；用于沉淀反應(yīng)抗體稱沉淀素

沉淀反應(yīng)包含環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)以及由此派生出來瓊脂擴(kuò)散免疫試驗等。其中，前二者敏感性不高，已少用，派生方法現(xiàn)仍廣泛應(yīng)用。2.沉淀反應(yīng)種類與應(yīng)用：

1)經(jīng)典方法：

a.環(huán)狀沉淀反應(yīng)：在小試管中加入抗血清+遲緩加入待測抗原(數(shù)分鐘)結(jié)果：陽性—白色沉淀環(huán)；陰性—無

b.絮狀沉淀反應(yīng)：將已知抗體與待測抗原混勻于試管或凹玻片結(jié)果：

陽性—絮狀沉淀；陰性—無免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第52頁2)當(dāng)代方法：

a.單免疫擴(kuò)散(singleimmunodiffusion)：將適當(dāng)濃度已知抗體預(yù)先混在1~1.5%瓊脂內(nèi)制成凝膠板，再以適當(dāng)距離在板上打孔，孔中加入待測抗原，當(dāng)抗原向周圍擴(kuò)散時，與板上抗體相遇，并在最適當(dāng)百分比處形成白色沉淀環(huán)。因沉淀環(huán)直徑與抗原濃度成正比，所以，若先用已知濃度抗原制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，便可依沉淀環(huán)直徑測定待測抗原濃度。結(jié)果：陽性—白色沉淀環(huán)；陰性—無

b.雙向免疫擴(kuò)散(doubleimmunodiffusion)：預(yù)先制備瓊脂板，依據(jù)需要在瓊脂板上打孔，再將抗原、抗體分別加入不一樣孔內(nèi)，使二者相互擴(kuò)散，若抗原抗體相對應(yīng)，則二者在適當(dāng)百分比處形成白色沉淀線。若反應(yīng)中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)兩條或兩條以上沉淀線。該方法可用來分析和判定復(fù)雜抗原成份，或測定抗原、抗體提取物純度。缺點是所需時間較長和靈敏度不高。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第53頁c.對流免疫電泳(Counterimmunoelectrophoresis,CIE)：為在雙向瓊脂擴(kuò)散基礎(chǔ)上進(jìn)行電泳方法。將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)，在負(fù)極端孔內(nèi)加抗原，正極端孔內(nèi)加抗體，然后通電。抗原在pH8.6緩沖液中帶負(fù)電荷，故向正極移動；抗體為大分子球蛋白，移動慢，并受瓊脂電滲影響由正極向負(fù)極移動，在二者相遇適當(dāng)百分比處出現(xiàn)白色沉淀線。因該法使抗原抗體相向而行，提升了敏感性，缺點是多組抗原抗體存在時沉淀線易重合在一起，缺乏分辨力。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第54頁（三）補體結(jié)合試驗1.定義：有補體參加，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作指示系統(tǒng)抗原抗體反應(yīng)2.組成：有2個系統(tǒng)共5種成份

1)檢測系統(tǒng)：包含已知抗原(或抗體)和待測抗體(或抗原)

2)指示系統(tǒng)：包含綿羊紅細(xì)胞和溶血素(綿羊紅細(xì)胞特異性抗體)3)補體：取自豚鼠新鮮血清3.補體結(jié)合反應(yīng)基本原理

1)補體可與任何抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合；2)指示系統(tǒng)遇補體后就出現(xiàn)顯著溶血反應(yīng)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第55頁4.操作過程和結(jié)果1)

陽性反應(yīng)：+補體抗原(體)+待測抗體(原)抗原抗體復(fù)合物抗原抗體和補體復(fù)合物+指示系統(tǒng)(綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物)結(jié)果：（所以時無游離補體與指示系統(tǒng)結(jié)合）不發(fā)生溶血2)陰性反應(yīng)：+補體抗原(體)+待測抗體(原)抗原+抗體抗原+抗體+補體(游離)+指示系統(tǒng)(綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物)

發(fā)生溶血綿羊紅細(xì)胞、溶血素及補體復(fù)合物免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第56頁（四）中和反應(yīng)定義：特異性抗體與對應(yīng)抗原結(jié)合后，能抑制抗原各種生物學(xué)活性（如：毒性、酶活性和病毒感染性等）反應(yīng)。免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第57頁四、當(dāng)代免疫標(biāo)識技術(shù)（immunolabellingtechnique）

定義：將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等加以標(biāo)識，以提升抗原抗體反應(yīng)以及抗原或抗體檢測靈敏度一類新技術(shù)。免疫標(biāo)識技術(shù)敏感性高、特異性強、應(yīng)用范圍廣(抗原或抗體定量、定性、定位)（一）免疫熒光技術(shù)（immunofluorecencetechnique）1.定義：用熒光物標(biāo)識抗體來檢測細(xì)胞或組織中對應(yīng)抗原或抗體技術(shù)，又稱熒光抗體技術(shù)。2.熒光物種類：異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等3.種類：包含直接法、間接法和補體法免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第58頁例：直接法：將待測標(biāo)本固定于玻片表面，滴加已知熒光抗體后再以緩沖液沖洗，干燥后于熒光顯微鏡下觀察。

(1)過程：

+待測抗原

熒光素+抗體熒光抗體(一段時間后沖洗)熒光鏡檢測結(jié)果：

(2)結(jié)果：陽性—可見帶熒光抗原抗體復(fù)合物；

陰性—無熒光(因為帶熒光抗體不能與抗原結(jié)合，被沖洗掉)

(3)用途：用以檢測病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌和沉積于組織中免疫復(fù)合物等。

(4)特點：簡單、特異性高；敏感性低、同時檢測各種抗原時較復(fù)雜。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第59頁(二)免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechnique)or酶免疫測定1.定義：用酶標(biāo)識抗體或抗原來檢測抗原或抗體方法.應(yīng)用范圍極廣。2.顯示方法：用酶特殊底物來處理反應(yīng)后標(biāo)本，經(jīng)過酶催化底物顯色反應(yīng)來測定抗原或抗體存在。以酶標(biāo)依作定量或定性分析。3.標(biāo)識酶：辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。4.底物：鄰苯二胺和對硝基苯磷酸酯。5.特點：敏感性高、特異性強，既可定性又可定量。6.慣用方法：當(dāng)前應(yīng)用最多為酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmusorbentassay,ELISA)：是利用抗原或抗體能非特異性吸附于聚苯乙烯等固相載體表面特征，使抗原-抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行一個免疫酶技術(shù)。它當(dāng)前包含直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競爭法、抑制性測定法和橋聯(lián)法等各種。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第60頁例1.

直接法：用于檢測抗原或抗體（尤其是總抗體濃度）a.用于檢測抗原時：以不一樣稀釋毒待測樣品(Ag)包被酶標(biāo)板反應(yīng)板，孵育后洗滌封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌加入酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌加入底物，測定酶促反應(yīng)強度。b.用于檢測抗體（待測樣品中總抗體）時：以不一樣稀釋毒待測樣品(Ab)包被酶標(biāo)板反應(yīng)板，孵育后洗滌封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌加入酶標(biāo)抗抗體，孵育后洗滌加入底物，測定酶促反應(yīng)強度。

免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第61頁例2.雙抗體夾心法：主要用于測定大分子抗原過程：以純化特異性抗體或含抗體血清包被酶標(biāo)反應(yīng)板，孵育后洗滌封閉液封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌加入待測樣品，孵育后洗滌加入酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌加入酶底物，測定酶促反應(yīng)強度。加待測抗原

加酶標(biāo)抗體

已知抗體吸附抗原抗體復(fù)合物酶聯(lián)抗體抗原抗體復(fù)合物免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第62頁（三）放射免疫測定技術(shù)(Radioimmunoassay,RIA)

1.

定義：用放射性同位素標(biāo)識來檢測抗原抗體反應(yīng)高靈敏度技術(shù)。2.

原理與方法：其基本原理為：待測抗原和標(biāo)識抗原對有限量抗體存在競爭性結(jié)合：Ag*+Ab?Ag*-Ab；Ag

+Ab?Ag-Ab

(1)抗原用同位素(如131I、3H等)標(biāo)識后仍能與對應(yīng)抗體特異性結(jié)合；(2)將兩類抗原與抗體混合后，兩類抗原均能與抗體結(jié)合，當(dāng)Ag*和Ab數(shù)量恒定，且Ag*與Ag之和大于Ab上結(jié)合點數(shù)目時，Ag*與Ag存在競爭抑制：Ag數(shù)量增加，Ab-Ab生成量增加，Ag*-Ab數(shù)量就降低，游離Ag*就增多。

(3)用層析等方法將Ag*-Ab和Ag-Ab復(fù)合物(B)與游離Ag*和Ag(F)分離，測定B和F放射活性。計算B/F值，繪制B/F和Ag量關(guān)系曲線圖。(4)預(yù)先用一系列已知濃度未標(biāo)識抗原和一定量標(biāo)識抗原及抗體混合，以相同方法繪制B/F和Ag量關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)競爭抑制曲線圖。(5)試驗時，在一樣條件下，依據(jù)待測Ag放射性結(jié)合率，依標(biāo)準(zhǔn)曲線查出Ag量。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第63頁（四）熒光和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)

A.熒光免疫技術(shù)1.

定義：用熒光素（如異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明和四甲基異硫氰酸羅丹明）標(biāo)識來檢測抗原抗體反應(yīng)免疫分析技術(shù)。2.

種類：包含熒光免疫組織化學(xué)(如熒光抗體)技術(shù)和熒光免疫測定。B.發(fā)光免疫分析定義：利用物質(zhì)發(fā)光特征(如輻射光波長、發(fā)光光子數(shù))與產(chǎn)生輻射物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)常數(shù)、構(gòu)型、數(shù)量等親密相關(guān)，經(jīng)過受激分子發(fā)射光譜，發(fā)光衰減常數(shù)、發(fā)光方向等來判斷該分子屬性；經(jīng)過發(fā)光強度來判斷物質(zhì)量免疫分析技術(shù)。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第64頁（五）免疫電鏡技術(shù)1.

定義：在保持抗體免疫性前提下，用高電子密度標(biāo)識物（如鐵蛋白、金等），或用經(jīng)細(xì)胞化學(xué)方法處理使電子密度增高標(biāo)識物（如辣根過氧化物酶等酶類）標(biāo)識抗體后，將標(biāo)識抗體與對應(yīng)抗原結(jié)合，然后用電子顯微鏡觀察技術(shù)。又稱電子顯微鏡免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。

2.

種類：

(1)非包埋法免疫染色：該法是以超薄冷凍切片免疫染色。因該法不經(jīng)脫水和包埋等步驟，抗原保護(hù)很好，且有利于免疫試劑在組織中滲透；但在技術(shù)上困難較多，需配制專用設(shè)備。

(2)包埋前免疫染色：組織固定厚切片免疫染色包埋超薄切片投射電鏡觀察。(3)包埋后免疫染色：組織固定包埋超薄切片免疫染色EM觀察。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法海水魚類和其他動物的免疫概念第65頁免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法第五節(jié)免疫學(xué)原理在魚蝦病害防治中應(yīng)用一、用于疾病診療

（免疫診療方法有二類）1.用已知抗原診療病原：用已知抗原與從患病動物中提取抗體進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原種類。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體診療。2.用已知抗體診療病原：將已知抗體與從病體中分離病原進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原種類，該法適于全部被診療動物。診療方法特點抗體檢測量應(yīng)用范圍血清中和試驗靈敏度高，費時≥10-3g/ml病毒病沉淀反應(yīng)方便可靠，靈敏度低≥20細(xì)菌病補體結(jié)合試驗靈敏度高，存在干擾≥10-1細(xì)菌病凝集反應(yīng)快速準(zhǔn)確，應(yīng)用局限≥310-2部分細(xì)菌病免疫熒光快速方便，需特殊儀器≥20細(xì)菌病放射免疫測定快速靈敏，需特殊儀器≥10-3病毒病ELISA快速靈敏，應(yīng)用前景好≥10-3細(xì)菌病海水魚類和其他動物的免疫概念第66頁二、用于疾病治療利用被動免疫，即給患病動物接種抗體進(jìn)行應(yīng)急治療。過程：先將抗原（疫苗）注入同種或其它種動物機(jī)體，1-4周后從接種動物血液等部位提取抗體（或制備卵黃抗體），并將提取抗體接種到患病動物中進(jìn)行疾病治療。三、用于疾病預(yù)防水產(chǎn)動物免疫最主要應(yīng)用方向為研制疫苗進(jìn)行疾病預(yù)防在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中，因為只有魚類、兩棲類和爬行類等脊椎動物才能在接種抗原后產(chǎn)生抗體，當(dāng)前所以也認(rèn)為只有這些動物才能用免疫學(xué)方法進(jìn)行疾病預(yù)防。免疫：免疫學(xué)原理應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第67頁（一）魚用疫苗種類

A.依據(jù)疫苗取得方法來分：

1.死疫苗(滅活疫苗)：熱滅活、化學(xué)滅活、紫外線滅活、超聲滅活等優(yōu)點：安全性好，制造簡單；缺點：免疫劑量大，免疫持久性差。

2.活疫苗：包含弱毒疫苗和異種疫苗優(yōu)點：弱毒疫苗—免疫原性好，免疫劑量少，連續(xù)時間長異種疫苗—安全性好，免疫時間長。缺點：弱毒疫苗—安全性差異種疫苗—取得比較困難

3.化學(xué)疫苗：以化學(xué)方法提取病菌有效成份(如LPS)制成優(yōu)點：免疫劑量小，免疫原性強，作用穩(wěn)定；缺點：制造較復(fù)雜，成本稍高。免疫：免疫學(xué)原理應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第68頁

4.亞單位疫苗：病原微生物中能使機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)力成份只占病原體小部分，將這些成份分離出來制成疫苗為亞單位疫苗。優(yōu)點：可除去有害成份，降低異常反應(yīng)，提升免疫效果；缺點：制造過程復(fù)雜、成本高。5.基因工程疫苗：將病原主要免疫原性蛋白密碼基因DNA轉(zhuǎn)移、重組后取得優(yōu)點：易于規(guī)模生產(chǎn)，成本低；缺點：研究周期長，免疫原成份單一，產(chǎn)生抗體量小。6.合成疫苗：將含有保護(hù)性免疫力人工合成肽與適當(dāng)載體結(jié)合后，再加入佐劑制成疫苗稱為合成疫苗優(yōu)點：作用效果好，易于規(guī)模生產(chǎn)；缺點：研究難度大。免疫：免疫學(xué)原理應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第69頁B.依據(jù)疫苗性質(zhì)和組成成份來分：

1.單價疫苗：由單一病菌培養(yǎng)制備疫苗

2.多價疫苗：由同一個病菌不一樣型或不一樣株培養(yǎng)制備疫苗

3.聯(lián)苗(混合疫苗)：由一個以上病菌或其代謝產(chǎn)物制備疫苗如：二聯(lián)疫苗、三聯(lián)疫苗……C.依據(jù)抗原類別來分：

1.病毒疫苗：如草魚出血病疫苗

2.細(xì)菌疫苗：如石斑魚創(chuàng)傷弧菌疫苗

3.寄生蟲疫苗：如小瓜蟲疫苗免疫：免疫學(xué)原理應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第70頁（二）魚用疫苗接種方法

1.注射法：將疫苗直接注射到肌肉、腹腔或心臟免疫接種方法。

優(yōu)點：免疫效果好；缺點：操作困難，易損傷接種魚類，幼魚無法使用。

2.口服法：將疫苗經(jīng)過投喂方法接種到魚類機(jī)體優(yōu)點：操作簡單；缺點：免疫效果不穩(wěn)定（因消化液對疫苗消化分解）

3.浸泡法：將魚類浸泡于疫苗溶液中以到達(dá)免疫接種目標(biāo)優(yōu)點：操作簡單；缺點：免疫效果不穩(wěn)定（因浸泡進(jìn)入機(jī)體疫苗數(shù)量有限）免疫：免疫學(xué)原理應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第71頁

4.噴霧法：將疫苗以高壓噴射到接種生物體表以進(jìn)行免疫方法。

優(yōu)點：操作簡單；缺點：免疫效果差。

5.其它方法：如超聲免疫法等，該法是在浸泡法基礎(chǔ)上外加超聲作用而實施接種方法，當(dāng)前尚在探索中。（三）幾個常見魚類疫苗制備方法

1.病毒性疫苗（組織苗）制備方法

勻漿,3000rpm,30min上清液+(800單位青霉素+800單位鏈霉素)/ml病魚組織+生理鹽水

沉淀

加1‰福爾馬林，32℃72h安全檢測冷凍保留組織苗效力檢測免疫：免疫學(xué)原理應(yīng)用海水魚類和其他動物的免疫概念第72頁2.細(xì)菌滅活疫苗制備方法

擴(kuò)大培養(yǎng)5000rpm,30min,PBS配制

病原