2020考研-考研分子生物學(xué)-歷年考研真題-問(wèn)答題-背誦版-考研專業(yè)課

分子生物學(xué)

問(wèn)答

1.簡(jiǎn)述基因工程的原理和過(guò)程

原理：將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進(jìn)行拼接重組，再轉(zhuǎn)入另一種生物（受

體）體內(nèi)，使之按人們的意愿穩(wěn)定遺傳，表達(dá)出新產(chǎn)物或新性狀。

不同基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ);基因是可切割的;基因是可轉(zhuǎn)移的;遺傳密碼是通用的；

基因可通過(guò)復(fù)制把遺傳信息傳遞給下T弋；肽段與基因之間存在對(duì)應(yīng)關(guān)系

過(guò)程：獲得目的基因，?載體的選擇與制備，?構(gòu)建基因表達(dá)載體；目的基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；

目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2.基因治療的載體有幾種？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？

兩種：病毒載體和非病毒載體；

病毒載體：轉(zhuǎn)染效率高；但制備困難，容量小，靶向特異性差及自身免疫原性和存在生

物安全問(wèn)題

非病毒載體：安全，制備簡(jiǎn)單，容量大，免疫原性低，但效率不高

3.試述復(fù)制和轉(zhuǎn)錄相同與不同之處

相同遵循堿基互補(bǔ)原則以DNA為模板需要依賴DNA的聚合酶合成方向5'-3';

生成磷酸二酯鍵。

不同：

復(fù)制轉(zhuǎn)錄

模板兩條鏈都復(fù)制模板鏈復(fù)制

酶DNA聚合酶RNA聚合酶

原料dNTPNTP

配對(duì)A-T,C-GA-T,C-G,A-U

引物需RNA引物不需要

產(chǎn)物子代雙鏈DNAtRNA,mRNA,rRNA

4.簡(jiǎn)述真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其主要功能

大多數(shù)真核生物mRNA會(huì)在5'端以7甲基-鳥(niǎo)瞟吟及三磷酸鳥(niǎo)苗為起始分子結(jié)構(gòu)，稱

為帽子結(jié)構(gòu)；帽子結(jié)構(gòu)在翻譯起始時(shí)有促進(jìn)核糖體與mRNA結(jié)合，加速翻譯起始的作

用，同時(shí)可以增強(qiáng)mRNA穩(wěn)定性

在真核生物mRNA會(huì)在3'末端，大多數(shù)有一段長(zhǎng)短不一的多聚腺昔酸結(jié)構(gòu)，稱為多

聚A尾，一般有十到幾十個(gè)腺甘酸鏈接而成。目前認(rèn)為是RNA合成后加上去的，會(huì)隨

著mRNA存在的時(shí)間延長(zhǎng)逐漸變短，目前認(rèn)為這種3'末端結(jié)構(gòu)可能與mRNA從核內(nèi)

向核質(zhì)轉(zhuǎn)位及mRNA穩(wěn)定性有關(guān)

5.簡(jiǎn)述基因診斷的研究進(jìn)展及前景

基因診斷指利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的原理和方法，通過(guò)檢測(cè)基因的存在、結(jié)

構(gòu)缺陷或表達(dá)功能異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病做出診斷的方法和過(guò)程

基因診斷已在臨床遺傳學(xué)，腫瘤，法醫(yī)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，如遺傳病診斷，產(chǎn)前診

斷，DNA指紋鑒定等，目前主要的基因診斷方法有核酸分子雜交，PCR,測(cè)序及基因

芯片等方法

前景：分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的飛速發(fā)展必將極大的促進(jìn)基因診斷技術(shù)的進(jìn)步，如二

代，三代等測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，基因診斷將極大發(fā)展，如個(gè)體化用藥指導(dǎo)等以基因診斷為

基礎(chǔ)的精準(zhǔn)醫(yī)療將極大促進(jìn)醫(yī)療進(jìn)步

6.基因診斷的方式有很多，目前常采用的技術(shù)方法有幾種？并簡(jiǎn)述其基本原理。

PCR:設(shè)計(jì)并合成一組跨越突變（缺失或插入）斷裂點(diǎn)的引物，將待測(cè)DNA樣本進(jìn)行

PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，從擴(kuò)增片段的大小判斷是否存在缺失或突變。

基因芯片：采用原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬(wàn)計(jì)的探針固化于支持物表面，產(chǎn)生

二維探針微陣列，然后與標(biāo)記樣品進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)對(duì)生物樣品進(jìn)行快速，并行

高效的檢測(cè)或診斷

直接測(cè)序：通過(guò)如高通量測(cè)序直接測(cè)出基因的序列，最準(zhǔn)確

Southern印跡法：又稱DNA印漬術(shù)，是將存在于凝膠中的DNA分子轉(zhuǎn)移(印漬)

于固定化介質(zhì)上并加以檢測(cè)分析的技術(shù)。DNA轉(zhuǎn)移至固相支持體的過(guò)程中，各個(gè)DNA片

段的相對(duì)位置保持不變，用放射性標(biāo)記的DNA與固著于濾鏡上的DNA雜交，經(jīng)放射自顯

影鎖定與探針互補(bǔ)的電泳條帶的位置。該技術(shù)主要用于基因組DNA的分析。

限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析：該技術(shù)利用限制性內(nèi)切酶能識(shí)別DNA分子的特異序列，

并在特定序列處切開(kāi)DNA分子即產(chǎn)生限制性片段的特性又寸于不同種群的生物個(gè)體而言，

他們的DNA序列存在差別。如果這種差別剛好發(fā)生在內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，并使內(nèi)切酶識(shí)別

序列變成了不能識(shí)別序列或是這種差別使本來(lái)不是內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的DNA序列變成了內(nèi)切

酶識(shí)別位點(diǎn)。這樣就導(dǎo)致了用限制性內(nèi)切酶酶切該DNA序列時(shí)，就會(huì)少一個(gè)或多一個(gè)酶切

位點(diǎn)，結(jié)果產(chǎn)生少一個(gè)或多一個(gè)的酶切片段。這樣就形成了用同一種限制性內(nèi)切酶切割不同

物種DNA序列時(shí)，產(chǎn)生不同長(zhǎng)度大小、不同數(shù)量的限制性酶切片段。后將這些片段電泳、

轉(zhuǎn)膜、變性，與標(biāo)記過(guò)的探針進(jìn)行雜交，洗膜，即可分析其多態(tài)性結(jié)果。

單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法：?jiǎn)捂湗?gòu)象多態(tài)性(signlestrandconformation

polymorphism,SSCP)是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構(gòu)象差異，這種差異

將造成相同或相近長(zhǎng)度的單鏈DNA電泳遷移率不同從而可用于DNA中單個(gè)堿基的替代、

微小的缺失或手稿的檢測(cè)。用SSCP法檢查基因突變時(shí)，通常在疑有突變的DNA片段附近

設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后將擴(kuò)增物用甲酰胺等變性，并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳，

突變所引起的DNA構(gòu)象差異將表現(xiàn)為電泳帶位置的差異，從而可據(jù)之作出診斷。

寡核昔酸探針診斷法：當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時(shí)，可以合成等基因特異的

寡核苗酸探針（allele-specificoligonucleotide,ASO）用同位素或^同位素標(biāo)記進(jìn)行診

斷。探針通常為長(zhǎng)20bp左右的核甘酸。用于探測(cè)點(diǎn)突變時(shí)一般需要合成兩種探針，一種與

正?；蛐蛄型耆恢?，能與之穩(wěn)定地雜交，但不能與突變基因序列雜交，?另一種與突變基

因序列一致，能與突變基因序列穩(wěn)定雜交，但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交，這樣，就可以

把只有一個(gè)堿基發(fā)生了突變的基因區(qū)別開(kāi)來(lái)。

7.簡(jiǎn)述乳糖操縱子（operon）的正負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制

1）乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含有Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼

半乳糖苗酶、半乳糖普透性酶和半乳糖乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列0、一個(gè)啟動(dòng)

子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因L

2）阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒(méi)有乳糖存在時(shí)，I基因編碼的阻遏雷白結(jié)合于操縱序列0

處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)

物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)不能結(jié)合于操縱序列浮LW操縱子被誘導(dǎo)開(kāi)放合成分解乳糖的三種酶。

所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)。

3）CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn),當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源

的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，CAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu)，

CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn),激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)

基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)節(jié)，加速

合成分解乳糖的三種酶。

4）協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)節(jié)與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)

制，互相協(xié)調(diào)，互相制約。

8.PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制兩者有哪些主要的相同點(diǎn)和不同點(diǎn)，各舉出5個(gè)。

相同：原料都是dNTR遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)（A-T,C-G），都需要引物，都需要消耗能量,

都需要酶，都需要模板，都能擴(kuò)增模板DNA

不同：

PCR體內(nèi)復(fù)制

速度快慢

引物單鏈DNA片段RNA片段

場(chǎng)所體外體內(nèi)

酶Taq酶DNA聚合酶，DNA解旋

酶，DNA連接酶等酶

能量來(lái)源熱能ATP

模板一個(gè)DNA目的片段整個(gè)DNA分子

9.試比較原核生物與真核生物在蛋白質(zhì)生物合成中的差異

真核生物原核生物

起始復(fù)合物合成所9種左右IF1,IF2,IF3,三種

需蛋白因子

起始復(fù)合物形成過(guò)43S起始復(fù)合物的形成；48s起始70s復(fù)合物

程的次序差異復(fù)合物的形成和80s起始復(fù)合物

的形成

肽鏈延長(zhǎng)和終止過(guò)因子的種類和名稱不同

程

轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯偶聯(lián)轉(zhuǎn)錄翻譯不偶聯(lián)

mRNAmRNA模板只有一個(gè)翻譯起始點(diǎn)多順?lè)醋?/p>

和一個(gè)終止點(diǎn),一條mRNA翻譯

T多肽鏈（單W販子）

對(duì)小分子蛋白質(zhì)合不敏感對(duì)小分子蛋白質(zhì)合成抑制

成抑制劑劑敏感

10.癌基因的激活方式有哪些？舉例說(shuō)明之。

點(diǎn)突變：膀胱上皮H-ras序列與膀胱癌細(xì)胞株h-ras序列差別只是外顯子的一個(gè)堿基不

同

基因易位:基因領(lǐng)域效應(yīng)可抑制原癌基因的表達(dá)，使之處于非激活狀態(tài)，基因易位使基因

重排，基因領(lǐng)域效應(yīng)消失；B淋巴細(xì)胞癌常由于基因重排是c-myc的表達(dá)失控

強(qiáng)啟動(dòng)子的插入：前病毒基因組中長(zhǎng)末端重復(fù)序列內(nèi)啟動(dòng)子和增強(qiáng)子整合在C-myc,活

化了C-myc

基因擴(kuò)增：如人的急性粒細(xì)胞白血病的HL-60細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)c-myc基因大量擴(kuò)增

低甲基化轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的cpG島甲基化可抑制基因轉(zhuǎn)錄低甲基化某些癌基因如h-ras.

c-myc將大量表達(dá)

11.基因工程中常用a互補(bǔ)來(lái)篩選重組質(zhì)粒，請(qǐng)說(shuō)明其原理。

a互補(bǔ)是指Lac基因上缺失經(jīng)操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整近操縱基因區(qū)段的陰性

的突變體之間形成功能互補(bǔ)。在重組質(zhì)粒中裝入一個(gè)大腸桿菌乳糖操縱子的DNA片段

（LacZ基因）,質(zhì)粒攜帶的半乳糖苗酶基因?qū)⒄１磉_(dá)，與大腸桿菌的半乳糖苗酶基因互

補(bǔ)，產(chǎn)生有活性的半乳糖苗酶，加入人工底物XOgal和誘導(dǎo)劑IPTG后，出現(xiàn)藍(lán)色的菌

落。如果在多克隆位點(diǎn)上插入外源基因，將使lacZ基因滅活，不能生成有活性的半乳

糖苗酶，結(jié)果出現(xiàn)白色菌落。

12.列出四種天然存在的具有催化活性的RNA:I型內(nèi)含子、II型內(nèi)含子、RNaseP、錘頭

型核酶。

13.什么是分子伴侶？其促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊的機(jī)理？

分子伴侶是細(xì)胞中的一大類蛋白質(zhì)，是由不相關(guān)的蛋白質(zhì)組成的一個(gè)家系,它們介導(dǎo)其

它蛋白質(zhì)的正確裝配，但自己不成為最后功能結(jié)構(gòu)中的組分。

1.分子伴侶通過(guò)提過(guò)一個(gè)保護(hù)環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu)；

2.分子伴侶可逆性的與未折疊的肽段的疏水部分結(jié)合后又松開(kāi)，如此反復(fù)進(jìn)行可防止

錯(cuò)誤的聚集發(fā)生，使肽鏈正確折疊；

3.分子伴侶也可與錯(cuò)誤聚集的肽段結(jié)合，使之結(jié)局后再誘導(dǎo)其正確折疊；

4.分子伴侶在蛋白質(zhì)分子折疊過(guò)程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。

14.什么是酮體？酮體的生成和利用有哪些酶類？酮體代謝的特點(diǎn)和意義。

酮體是脂肪氧化的中間產(chǎn)物，即乙酰乙酸，如羥丁酸和丙酮統(tǒng)稱。HMGCoA合成酶是

此途徑的限速酶；還有乙酰乙酸輔酶硫解酶；HMGCoA裂解酶，卜羥丁酸脫氫酶。酮

體在肝臟生成，肝外利用。酮體生成是肝臟輸出能源的一種方式，葡萄糖不足時(shí)，可以

提供能量。大腦不能利用脂肪酸，可利用酮體，其可通過(guò)毛細(xì)血管壁。酮體利用的增加

可減少糖的利用，有利于維持血糖水平恒定，節(jié)省蛋白質(zhì)消耗。

15.簡(jiǎn)述PCR的基本原理及其應(yīng)用

PCR,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，基本工作原理是以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對(duì)分別與

模板互補(bǔ)的寡核昔酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿

著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。不斷重復(fù)這一過(guò)程,可使目的DNA片段得到

擴(kuò)增。因?yàn)樾潞铣傻腄NA也可以作為模板因而PCR可使DNA的合成量呈指數(shù)增長(zhǎng)。

應(yīng)用：分子生物學(xué)等學(xué)科的研究、基因探針的制備、序列分析、法學(xué)領(lǐng)域、蛋白質(zhì)工程

等領(lǐng)域均有應(yīng)用。

16.分別從DNA水平、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯及蛋白水平來(lái)說(shuō)明真核基因表達(dá)調(diào)控

DNA水平上的調(diào)控是通過(guò)改變基因組中有關(guān)基因的數(shù)量、結(jié)構(gòu)）1質(zhì)序和活性而控制基因

的表達(dá)。這一類的調(diào)控機(jī)制包括基因的擴(kuò)增、重排或化學(xué)修飾；

轉(zhuǎn)錄水平上，DNA分子上的順式作用元件以及反式作用因子對(duì)基因表達(dá)有調(diào)節(jié)活性；

轉(zhuǎn)錄后水平，真核基因組有內(nèi)含子和外顯子，所以初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物hnRNA會(huì)經(jīng)過(guò)加帽、加

尾和剪接等步驟的加工才能成為成熟的mRNA分子;

翻譯水平如阻遏蛋白可與mRNA結(jié)合,可以阻止蛋白質(zhì)的翻譯等。

蛋白水平上，翻譯出的多肽鏈還需通過(guò)正確的折疊、切割、化學(xué)修飾等過(guò)程,才能產(chǎn)生

具有生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。

17.試述SNP的概念及其意義，和尋找SNP的研究方法

單核甘酸多態(tài)性,即基因組DNA序列中單個(gè)核昔酸（AGCT）變異所引起的DNA序列

多態(tài)性。是人類可遺傳的變異中最常見(jiàn)的一種。

意義：具有已知性、可遺傳性、可檢測(cè)性，用于疾病基因的定位、克隆和鑒定。尋找疾

病相關(guān)的突變位點(diǎn)，發(fā)展疾病預(yù)防策略，發(fā)展個(gè)性化醫(yī)療，可以通過(guò)對(duì)藥物靶點(diǎn)個(gè)體差

異性分析，發(fā)展個(gè)性化藥物、方法治療。還可以用于法醫(yī)領(lǐng)域和器官移植領(lǐng)域。

18.試述原核生物RNA的種類和結(jié)構(gòu)

轉(zhuǎn)運(yùn)RNAtRNA轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸

核蛋白體RNArRNA核蛋白體組成成

信使RNAmRNA蛋白質(zhì)合成模板

不均一核RNAhnRNA成熟mRNA的前體

小核RNAsnRNA參與hnRNA的剪接

小胞漿RNASCRNA/7SL-RNA蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號(hào)識(shí)別體的組成成分

反義RNAanRNA/micRNA對(duì)基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用

核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA

19.試述基因轉(zhuǎn)錄的基本特征

轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的相同點(diǎn)都在酶的催化作用下，以DNA為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，沿5,

-3'方向合成與模板互補(bǔ)的新鏈.

轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的差別：1.轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部分區(qū)域.約3%的DNA序列最后被表達(dá)成為成

熟的mRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成.

2.轉(zhuǎn)錄時(shí)只有一條鏈為模板，稱為模板鏈或反義鏈，而另一條稱為有意義鏈或編碼鏈.DNA

復(fù)制時(shí)，兩條鏈都用作模板.

3.轉(zhuǎn)錄起始不需要引物的參與，而DNA復(fù)制一定要引物的存在.

4.轉(zhuǎn)錄的底物是4種瞬核甘三磷酸(rNTP),即ATP、GTP、CTP和UTP;RNA與模板

DNA的堿基相互配對(duì)關(guān)系為G-C和A-U.而復(fù)制的底物是dNTP,堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系為

G-C和A-T.

5.RNA的合成依賴于RNA聚合酶的催化作用，而DNA復(fù)制需要DNA聚合酶，兩種聚合

酶系不同.

6.轉(zhuǎn)錄時(shí)DNA-RNA雜合雙鏈分子是不穩(wěn)定的,RNA鏈在延伸過(guò)程中不斷從模板鏈上游

離出來(lái)，模板DNA又恢復(fù)雙鏈狀態(tài)，?而DNA復(fù)制叉形成之后一直打開(kāi)，不斷向兩側(cè)延伸,

新合成的鏈與親本鏈形成子鏈.

7.真核生物基因和rRNA、tRNA基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄生成的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物一般都需經(jīng)過(guò)加工，才能

具有生物功能和成熟的RNA分子.

20.已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個(gè)核甘酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)

和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后進(jìn)行指紋圖分析。結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)肽段的差異，測(cè)

得其氨基酸順序如下：

正常肽段：Met-Val-Cys-Val-Arg

突變體肽段：Met-Ala-Met-Arg

1）指出此肽段在該蛋白質(zhì)分子中的位置：前端

2）什么樣的突變（什么核昔酸插入到什么地方）導(dǎo)致了氨基酸順序的改變？

在正常肽段的第一個(gè)Vai的密碼GUA的G后插入了一個(gè)C

3）推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核甘酸序列：

正常:AUGGUAUGCGUXCGX

突變:AUGGCUAUGCGU

提示：有關(guān)氨基酸的簡(jiǎn)并碼：

VakGUUGUCGUAGUGCys:UGUUGC

Arg:CGUCGCCGACGGAGAAGG

Ala:GCUGCCGCAGCG（Met:AUG）

21.試述真核生物基因組的特點(diǎn)

遠(yuǎn)大于原核生物基因組，基因數(shù)龐大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，含多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)；基因組與蛋白

質(zhì)結(jié)合成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核中；基因?yàn)閱雾樂(lè)醋?；多為不連續(xù)斷裂基因，由內(nèi)含子

和外顯子鑲嵌而成；非編碼基因多于編碼基因；含大量重復(fù)序列；功能相關(guān)基因構(gòu)成各

種基因家族

22.原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

1.基因組由一條環(huán)狀雙鏈DNA組成；2.只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)；3.大多數(shù)結(jié)構(gòu)基因組

成操縱子結(jié)構(gòu)；4.結(jié)構(gòu)基因無(wú)重疊現(xiàn)象；5.無(wú)內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后不需要剪接；6.基因組

中編碼區(qū)大于非編碼區(qū)；7.重復(fù)基因少，結(jié)構(gòu)基因一般為單拷貝；8.有編碼同工酶的

等基因；9.基因組中存在可移動(dòng)的DNA序列10.非編碼區(qū)主要是調(diào)控序列。

23.從高等真核生物基因組中克隆的完整基因?yàn)槭裁丛诖竽c桿菌中不能正常表達(dá)？

真核生物和原核生物啟動(dòng)子不同，且真核生物基因組為斷裂基因，由內(nèi)含子和外顯子鑲

嵌而成，完整基因組轉(zhuǎn)入，沒(méi)有相應(yīng)的啟動(dòng)子，不能啟動(dòng)mRNA轉(zhuǎn)錄，且內(nèi)含子不能

正確剪切，所以不能表達(dá)

24.試述基因工程中理想載體的條件，并簡(jiǎn)單舉例常用載體的種類

條件：1.必須由自身的復(fù)制子；2.載體分子上必須有限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，即

多克隆位點(diǎn)，以供外源DNA的插入；3.載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū)別陽(yáng)性

重組子和陰性重組子；4.載體分子必須有足夠的容量；5.可通過(guò)特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞；

6.對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、前導(dǎo)序列、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)等

DNA調(diào)控元件。

種類：質(zhì)粒，噬菌體，YAC,BAC

1.簡(jiǎn)述基因治療的策略（寫(xiě)出一些腫瘤基因治療的一些策略。5/7/8）

L基因矯正：對(duì)于致病基因中的異常堿基進(jìn)行精確修復(fù)，使其恢復(fù)正常功能。

2、基因置換：基因置換就是用正常的基因原位替換病變細(xì)胞內(nèi)的致病基因,使細(xì)胞內(nèi)

的DNA完全恢復(fù)正常狀態(tài)。這種治療方法最為理想，但目前由于技術(shù)原因尚難達(dá)到。

3、基因修復(fù)：基因修復(fù)是指將致病基因的突變堿基序列糾正，而正常部分予以保留。

這種基因治療方式最后也能使致病基因得到完全恢復(fù)，操作上要求高，實(shí)踐中有一定難

度。

4、基因修飾又稱基因增補(bǔ)，將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，目的基因的表達(dá)產(chǎn)

物能修飾缺陷細(xì)胞的功能或使原有的某些功能得以加強(qiáng)。在這種治療方法中，缺陷基因

仍然存在于細(xì)胞內(nèi)，目前基因治療多采用這種方式。

5、基因失活：利用反義技術(shù)能特異地封閉基因表達(dá)特性，抑制一些有害基因的表達(dá)，

已達(dá)到治療疾病的目的。用此技術(shù)還可封閉腫瘤細(xì)胞的耐藥基因的表達(dá)增加化療效果。

6、免疫調(diào)節(jié)：將抗體、抗原或細(xì)胞因子的基因?qū)爰踩梭w內(nèi)，改變病人免疫狀態(tài),達(dá)

到預(yù)防和治療疾病的目的。

7、自殺基因治療，導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞后，會(huì)產(chǎn)生一種酶，該酶使低毒藥物前體轉(zhuǎn)化為能夠

殺死腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)害的物質(zhì)

8、耐藥基因治療：在腫瘤化療過(guò)程中，把產(chǎn)生抗藥物毒性的基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，從而

使患者能耐受更大劑量的化療。

25.請(qǐng)闡述細(xì)菌操縱子模型的基本結(jié)構(gòu)，并舉例說(shuō)明阻遏型操縱子的基因表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制

在原核生物中，功能相關(guān)基因成簇地串聯(lián)、密集于染色體上，共同組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位,

通常由兩個(gè)以上的編碼序列與啟動(dòng)序列、操縱序列以及其他調(diào)節(jié)序列在基因組中成簇串

聯(lián)組成。

色氨酸操縱子為阻遏型操縱子，其基因表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制為：

1.阻遏作用：

1）輔阻遏蛋白（trpR的產(chǎn)物）通過(guò)與操縱基因的結(jié)合與否來(lái)控制基因是否被轉(zhuǎn)錄；2）

輔阻遏蛋白的活性受到色氨酸水平的控制，色氨酸水平高時(shí)，色氨酸與輔阻遏蛋白結(jié)合

激活了輔阻遏蛋白，并與色氨酸操縱子緊密結(jié)合，因此可以阻止轉(zhuǎn)錄。當(dāng)色氨酸水平低

時(shí)，阻遏蛋白以一種非活性形式存在，不能結(jié)合DNA。在這樣的條件下,trp操縱子被

RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄，同時(shí)Trp生物合成途徑被激活。

2.弱化作用：色氨酸操縱子轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控是通過(guò)弱化作用實(shí)現(xiàn)的。色氨酸操縱子前導(dǎo)

區(qū)的堿基序列包括4個(gè)分別以1、2、3和4表示的片段，能以兩種不同的方式進(jìn)行堿基

酉己對(duì),trp濃度高時(shí)，2-3不配對(duì)，3、4區(qū)自由配對(duì)形成莖環(huán)狀終止結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停止；trp

濃度低時(shí)，2,3配對(duì)，4區(qū)片段無(wú)配對(duì)，結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。

26.什么是反義RNA?請(qǐng)闡述反義RNA參與真核基因表達(dá)調(diào)控的可能作用位點(diǎn)及其機(jī)制

堿基序列正好與有意義的mRNA互補(bǔ)的RNA稱為反義RNA。

真核細(xì)胞中有三類反義RNA:I類:這類反義RNA直接作用于其靶mRNA的SD序列

和/或編碼區(qū)，引起翻譯的直接抑制（IA類）或與靶mRNA結(jié)合后引起該雙鏈RNA分子

對(duì)RNA酶m的敏感性增加，使其降解（IB類）。II類:這類反義RNA與mRNA的SD

序列的上游非編碼區(qū)結(jié)合，從而抑制靶mRNA的翻譯功能。其作用機(jī)制尚不完全清楚，

可能是反義RNA與靶mRNA的上游序列結(jié)合后會(huì)引起核糖體結(jié)合位點(diǎn)區(qū)域的二級(jí)結(jié)構(gòu)

發(fā)生改變，因而阻止了核糖體的結(jié)合。m類:這類反義RNA可直接抑制靶mRNA的轉(zhuǎn)

錄。

27.請(qǐng)說(shuō)明你所了解的檢測(cè)基因點(diǎn)突變的二種基于PCR技術(shù)的分析方法的技術(shù)原理及主要

操作流程（重點(diǎn)描述點(diǎn)突變的分析原理，PCR原理可省略）

SSCP/PCR:通過(guò)PCR同時(shí)擴(kuò)增待測(cè)基因和野生型對(duì)照基因的DNA片段，將擴(kuò)增的雙

鏈DNA變性成單鏈,用非變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離。待測(cè)基因的單鏈DNA

上單個(gè)堿基的改變可導(dǎo)致構(gòu)象的改變，其電泳遷移率也會(huì)發(fā)生改變。通過(guò)比較這兩者的

遷移率，即可判斷是否發(fā)生基因突變。

RFLP/PCR:通過(guò)PCR同時(shí)擴(kuò)增待測(cè)基因與正常型對(duì)照基因的DNA片段，將擴(kuò)展后的

DNA進(jìn)行酶切鑒定，由于個(gè)體之間的DNA的核甘酸序列存在差異，若發(fā)生點(diǎn)突變而

因此改變了限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)則可導(dǎo)致相應(yīng)的限制性片段的長(zhǎng)度和數(shù)量發(fā)生變

化。

變性高效液相色譜:基本原理是利用PCR擴(kuò)增過(guò)程的單鏈DNA產(chǎn)物可以隨機(jī)與互補(bǔ)鏈

相結(jié)合而成雙鏈的特性，依據(jù)最終產(chǎn)物中是否會(huì)出現(xiàn)異源雙鏈來(lái)判斷待測(cè)樣品中是否存

在點(diǎn)突變。若被測(cè)DNA片段中不存在點(diǎn)突變，所有PCR產(chǎn)物都具有相同的序列，即只

產(chǎn)生同源雙鏈。若存在點(diǎn)突變，PCR反應(yīng)體系中會(huì)產(chǎn)生4種不同的DNA雙鏈分子，2

種同源、2種異源雙鏈。在特定的部分變性洗脫條件下，不同源的DNA片段的變性程

度將有別于同源雙鏈，由此造成因DNA分子電荷量等的差異而在液相色譜中呈現(xiàn)出不

同的滯留時(shí)間。

28.信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)特征及功能

結(jié)構(gòu)特征L一般帶有10-15個(gè)疏水氨基酸，位于蛋白質(zhì)的N端；2、在靠近N端有

一個(gè)或數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸；3、C端有一個(gè)能被信號(hào)肽識(shí)別的位點(diǎn)；4、沒(méi)有嚴(yán)格的

專一性；5、信號(hào)肽可能是一種環(huán)狀結(jié)構(gòu)，而非是以一種直線通過(guò)雙脂層膜；（6、在C

端靠近蛋白酶切點(diǎn)處常有數(shù)個(gè)極性氨基酸，離切割位點(diǎn)最近的那個(gè)氨基酸往往帶有很短

的側(cè)鏈；7、廣義上的信號(hào)肽是初生蛋白質(zhì)穿過(guò)膜必須的疏水性肽段，它位于蛋白質(zhì)各

部位。）

功能：L保證蛋白質(zhì)順利轉(zhuǎn)運(yùn)；2、延伸功能；3、能和新生的分泌蛋白的信號(hào)肽相結(jié)

合；4、能和位于膜上的蛋白受體相結(jié)合。

29.簡(jiǎn)述CAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑？

答：1、組成：胞夕息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質(zhì)激素），受

體，G蛋白，腺甘酸環(huán)化酶，CAMP,PKA。

2、途徑：

信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化；受體活化G蛋白；活化后的G蛋白激活腺

甘酸環(huán)化酶；腺苜酸環(huán)化酶催化ATP生成CAMP;CAMP活化PKA,PKA使目標(biāo)蛋白

磷酸化，調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基因的表達(dá)

30.簡(jiǎn)述IP3-Ca2+信號(hào)途徑：

答案要點(diǎn)：信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化，受體活化G蛋白，活化后的G

蛋白激活PLC,PLC水解PIP2生成IP3和DG,IP3使鈣通道打開(kāi)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高，

Ca2+與CaM結(jié)合，激活Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶，Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶使

目標(biāo)蛋白磷酸化。

31.請(qǐng)敘述DNA多態(tài)性的基本概念及其分子基礎(chǔ)(序列/長(zhǎng)度的多態(tài)性)

DNA的多態(tài)性指正常人群中,DNA分子或基因的某些位點(diǎn)可以發(fā)生中性改變，使DNA

的一級(jí)結(jié)構(gòu)各不相同，但并不影響基因的表達(dá)；DNA的多態(tài)性可以看作是在分子水平

上的個(gè)體區(qū)別的遺傳標(biāo)志。

32.人工構(gòu)建的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體應(yīng)具備哪些條件？

⑴原核DNA序列：為了能在大腸桿菌中增殖,得到大量能轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的重組

DNA，哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中通常有一段原核序列，包括一個(gè)能在大腸桿菌中自身復(fù)制的復(fù)

制子，便于挑選含重組DNA細(xì)菌的抗生素抗性基因，以及便于把真核序列插入載體的少

數(shù)單一限制性酶切位點(diǎn)。當(dāng)具備這些序列以后，外源的真核基因序列可由單一酶切位點(diǎn)插

入載體中，形成的重組DNA可在大腸桿菌中增殖，經(jīng)抗生素篩選后進(jìn)行DNA提取，即可

得到大量的所需的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體。

(2)啟動(dòng)子：根據(jù)宿主細(xì)胞類型選擇不同的啟動(dòng)子。

(3)增強(qiáng)子：增強(qiáng)子是使啟動(dòng)子的基因轉(zhuǎn)錄效率顯著提高的一類項(xiàng)式作用元件，有多個(gè)

獨(dú)立核昔酸序列組成。許多增強(qiáng)子只能在特定的組織或細(xì)胞中起作用，即具有組織細(xì)胞的特

異性，因此在構(gòu)建真核表達(dá)載體的時(shí)候，應(yīng)根據(jù)宿主細(xì)胞來(lái)選擇增強(qiáng)子。

(4)剪接信號(hào)：真核基因由許多內(nèi)含子和外顯子組成。被轉(zhuǎn)錄成mRNA前體以后，需

通過(guò)剪除內(nèi)含子、連接外顯子才能成為成熟的mRNAo

(5)終止信號(hào)和多聚腺昔化的信號(hào)

(6)遺傳標(biāo)記：從成千上萬(wàn)個(gè)哺乳細(xì)胞中檢測(cè)出極少數(shù)的含DNA重組體的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，

并鑒定已導(dǎo)入外源DNA是哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因表達(dá)系統(tǒng)的一個(gè)關(guān)鍵內(nèi)容。

33.DNA的保真性

1,子代DNA鏈以母鏈為模板按嚴(yán)格的堿基互補(bǔ)配對(duì)規(guī)律生成，保證子代DNA與母

代DNA雙鏈在堿基序列上的一致性，從而保留了親代的全部遺傳信息。

2.堿基選擇功能，DNA聚合酶ZI能保證選擇正確配對(duì)的堿基合成子鏈。

3.復(fù)制中如出現(xiàn)錯(cuò)配，DNA聚合酶I和IB均由及時(shí)校對(duì)功能，切除錯(cuò)配堿基后,重

新連接正確的堿基。

4.原核及真核均存在對(duì)DNA分子中的錯(cuò)誤或損傷進(jìn)行修復(fù)的機(jī)制。

5.引物生成的作用還盡量減少DNA復(fù)制起始處的突變，因?yàn)閺?fù)制起始最復(fù)雜也最容

易出錯(cuò),若引物出現(xiàn)錯(cuò)配，最終會(huì)被切除，被序列正確的DNA片段取代。

34.什么是基因表達(dá)調(diào)控中的順式作用元件和反式作用因子，試舉例說(shuō)明他們對(duì)基因表達(dá)調(diào)

控的影響。

反式作用因子：是指真核細(xì)胞內(nèi)含有的大量可以通過(guò)直接或間接結(jié)合順式作用元件而調(diào)

節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子。

順式作用元件：主要指真核生物中，與結(jié)構(gòu)基因處于同一DNA分子的，可調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)

錄的DNA特殊序列，主要包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子、和可誘導(dǎo)元件等。

OOOOOO

35.蛋白質(zhì)的延長(zhǎng)過(guò)程。

1.進(jìn)位：根據(jù)A位上密碼引導(dǎo)，相應(yīng)的氨基酰-tRNA進(jìn)入A位，稱為進(jìn)位。